Download
1 / 10
E N D
ХРОМАТОГРАФСКИМЕТОДИЗААНАЛИЗ • Хроматографиятаеобщоназваниенаметоди, прикоитодвеилиповече съединенияведнасмессеразделятфизическичрезразпределениетоим междудвефази: а) стационарнафаза, коятоможедабъдетвърдаилитечна, нанесенавърхутвърда, иб) подвижнафаза, газилитечност, която непрекъснатотечеоколостационарнатафаза. Разделянетонаиндивидуални компонентисеосъществяваглавновследствиенаразликитевафинитетаим къмстационарнатафаза. • Хроматографиятаеоткритаинаименованапрез 1906 г. отруския ботаникМихаилЦвет, койтосеопиталдаразделиоцветенипигментиот листа, пропускайкиразтвора, койтогисъдържалпрезколонасваровик. През 1941 г. МартиниСинджоткриваттечно-течнатахроматография, а през 1952 г. получаватНобеловатанаградапохимиязазначимосттана откритието.
КЛАСИФИКАЦИЯНАХРОМАТОГРАФСКИТЕСИСТЕМИКЛАСИФИКАЦИЯНАХРОМАТОГРАФСКИТЕСИСТЕМИ • Спрямоагрегатнотосъстояниенаподвижнатафаза: газоваитечна хроматография; • Спрямовидътнанеподвижнатафаза: газово-твърда; газово-течна; течно- твърдаитечно-течна; • Споредтипанаразпределителноторавновесие: адсорбционна (твърд сорбент); абсорбционна (теченсорбент); • Взависимостотгеометриятанахроматографскатасистема: колоннаи планарна.
ХРОМАТОГРАФСКИПАРАМЕТРИ • Задържане: Мярказастепентаназадържанеевеличината “капацитетен фактор” к’x, коятоседефинирасъсследнияизраз: Vs . Xs Vs к’x= -------------- ---- = ----------- . Kx, Vm . Xm Vm където Vs и Vm сасъответнообемитена стационарнатафазаинаподвижнатафазавколоната, Xs и Xm саресп. моловетеотаналитавстационарнатаиподвижнафазаиКхсеявява термодинамиченразпределителенкоефициент. Възоснованакапацитетния факторсеизвеждаосновнотоуравнениезавсекихроматографскипроцес, коетосвързваобемътназадържанесдругивеличини: Vr = Vm (1 + к’x) = Vm + Vs . Kx
ТСХТСХпредставлявапланарнахроматография, коятосеосъществявавърху откритаплоча – плакаотстъкло, алуминийилипластмасасопределениразмери. Плакатаепокритаспорьозентвърдпрах, съставенотмалкичастицисдиаметърот 5 до 40 mm. Обикновеноизползванитефазивключватсиликагел, алуминиев оксид, целулоза, полиамидниийонообменнисмоли, кактоисвързващовещество. Зааналитичницелисеизползваслойсдебелина 0.2 до 0.3 mm, азапрепаративни – от 2 до 10 mm. Развититеплакисевизуализиратчрезнапръскванес цветообразуващиреактивиилинаблюдениеподУВ-облъчване.Припредварително добавянекъмслоянафлуоресциращагент, разделенитевещества, благодарениена свояефектнагасене, сепроявяваткатотъмнипетнавърхуфлуоресциращфонпри 254 и 366 nm. Експерименталнифактори, коитовлияятвърхувъзпроизвеждането на Rf саприродатанаадсорбента, природатанаподвижнатафаза, активносттана адсорбента, неговатадебелинаиеднородност, температурата, концентрациятана веществатавпробата, равновесиетовпарнотоналяганемеждуплакатаи атмосфератанапроявителнатакамера. КоличествениаспектинаТСХ: 1. Визуално сравняваненапетнатаспрямотакиванареферентниразтвори. 2. Физични измерваниянапетната: измерваненапропускливост, отражениеили флуоресценциясъсспектрофотометър; измерваненаинтензитетанапетноточрез
ТСХДенситометрия – методзаколичественотънкослойнохроматографско определяне, базиращосенаоблъчваненапетнотоотТСХ-плакатасвълнас определенинтензитетисъгласноЗаконанаБугер-Ламбер-Беерсеизмерва намалениетовинтензитетанасветлината, коетоеправопропорционалнона концентрациятавещество, илисеизмерва: интензитетнаотразенатасветлина (ремисия); интензитетнафлуоресценция
ТСХХАРАКТЕРИСТИКИНАСКАНИРАЩ ДЕНСИТОМЕТЪР: - Неизисквадопълнително PC; - Анализипубликуваненакачествениобрази; - Високо чувствителна CCD камера, 12bit образ; - Compact Flash управлениенафона; - IP- адрес; - Възможностза принтиране; - Оптичноувеличение; - Възможностза оптималноразпределениенапикселите; - Възможност заанализпрезденя.
ВЕТХВЕТХеразделителенметодсвисокачувствителностиВЕТХВЕТХеразделителенметодсвисокачувствителности селективностиспоредизползваниядетекторсголямлинеендиапазони добравъзпроизводимост. Прилагасеедновременнозаидентичности количественоопределяненаосновнатасъставка, “related substances” и примесите. Заидентичностнацелеватакомпонентавалидиранетона ВЕТХизисквадаседокаженеобходиматаселективност, апри количественоопределянеизаопределянена LOD и LOQ енеобходим външенсертифициранстандартенматериал. Възможноедасеизползваи методанавътрешниястандарткатоизбранотозавътрешенстандарт веществотрябвададавасамостоятеленпикпридобавяневизвестна концентрация. Същотакапридобавяневравниконцентрации вътрешниятстандарттрябвадаимаотносителенфакторнаотклика, отчитащразликитевплощите (RRF – relative response factor), чиято стойностевинтервала: 0.8 < RRF < 1.2.
ХроматографскиметодикиИзпитванезаколичественоопределяненаХроматографскиметодикиИзпитванезаколичественоопределянена примеси: • Приколичественоопределяненапримесисепроцедирав зависимостоттовадалипримеситеселимитират (отколичественагледна точка) илидалисадопустимикатовещества (отгледнаточкана токсичност). Обикновеноколичественотосъдържаниеенедостатъчна оценка. Задостоверностсеизползватразличниподходи: сравнениена резултатитестезиотизкуственасмес (към placebo седобавят лекарственотовеществоисъответнитепримесивопределено количество); сравнятсерезултати, полученииснезависимааналитична процедура (полярографски) ит.н. Акометодътнееселективен, той задължителносепридружавасдругселективенхроматографскиметодза изпитванезачистотапоотношениенапречещитекомпоненти. При наличиенаразличниоточакванитепримеси (разпаднипродукти, страничнинепредположениреакционнипродукти) най-ефективниса комбинациисъсспектралнидетектори, асъщоналичиетона предварителниизследваниязакинетиканареакционнитепроцесии химическастабилност.
