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仪器分析

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仪器分析. 第三讲. 主讲教师:刘忠英                   学时: 32. 第 十 章 紫外 - 可见分光光度法. Ultraviolet visible spectrophotometry; UV-vis. 第一节 紫外 - 可见分光光度法的 基本原理和概念 第二节 紫外 - 可见分光光度计 第三节 紫外 - 可见分光光度分析方法. 第一节 紫外 - 可见分光光度 的基本原理和概念. 一、紫外 - 可见吸收光谱的产生 —— 电子跃迁类型 二、相关的基本概念 三、吸收带类型及其与分子结构的关系

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仪器分析

第三讲

主讲教师:刘忠英                   学时:32

slide2

第 十 章 紫外-可见分光光度法

Ultraviolet visible spectrophotometry; UV-vis

slide3
第一节 紫外-可见分光光度法的

基本原理和概念

  • 第二节 紫外-可见分光光度计
  • 第三节 紫外-可见分光光度分析方法
slide4
第一节 紫外-可见分光光度的基本原理和概念

一、紫外-可见吸收光谱的产生——电子跃迁类型

二、相关的基本概念

三、吸收带类型及其与分子结构的关系

四、影响吸收带的因素

五、Lamber-Beer’s 定律

slide5
1.分子吸收光谱的产生——分子中的价电子在不同分子轨道(能级)间的跃迁引起1.分子吸收光谱的产生——分子中的价电子在不同分子轨道(能级)间的跃迁引起

能级:电子能级、振动能级、转动能级

跃迁:电子受激发,从低能级转移到高能级的过程

一、紫外-可见吸收光谱的产生

若用一连续的电磁辐射照射样品分子,将照射前后的

光强度变化转变为电信号并记录下来,就可得到光强

度变化对波长的关系曲线,即为分子吸收光谱

slide6
2.分子吸收光谱的分类

分子内运动涉及三种跃迁能级,所需能量大小顺序

slide7

3.紫外-可见吸收光谱的产生

由于分子吸收紫外-可见光区的电磁辐射,分子中

价电子(或外层电子)在不同的分子轨道之间(能级)跃迁而产生。

电子能级的能量差 ΔEe假如是5eV,可计算出:

λ= hc/ΔE

= 6.624×10-34×2.998×108/5×1.6×10-19

= 2.48×10-7m=248nm

slide8

电子跃迁产生的吸收光谱在紫外—可见光区

  • (200-780nm),称紫外—可见光谱.紫外-可见光谱属于电子跃迁光谱。

电子能级间跃迁的同时总伴随有振动和转动能级间的跃迁。即电子光谱中总包含振动能级和转动能级间跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带.

slide9

n

H

C

O

s

H

p

4. 紫外-可见吸收光谱的电子跃迁类型
  • 分子中的价电子包括
  • σ电子 → 形成单键
  • π电子 形成双键
  • n电子 非成键的
  • 轨道:电子围绕原子或分子运动的几率;
  • 轨道不同,电子所具有能量不同。
slide11
电子跃迁类型

1.σ→σ*跃迁

所需能量最大,σ电子只有吸收远紫外

光的能量才能发生跃迁。

饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外

区(吸收波长λ<150nm,只能被真空紫外分

光光度计检测到)。如甲烷的λ为125nm,乙

烷λmax为135nm。

slide12

2. π→ π*跃迁

吸收波长处于远紫外区的近紫外端或近紫外区(200nm左右),摩尔吸光系数

ε一般在104 L·mol-1·cm-1以上,属于强吸收。

 不饱和烃、共轭烯烃和芳香烃类均可发

生该类跃迁。如:乙烯π→π*跃迁的λ为

165 nm,ε为:1×104 L· mol-1·cm-1。

slide13
3. n →π*跃迁

 需能量最低,吸收波长λ>200nm。吸收

谱带强度较弱。 ε :10~100之间

 分子中孤对电子和π键同时存在时发生

n→π* 跃迁。=C=O,=C=S,-N=N-

丙酮n →π*跃迁的λ为279nm 。

slide14

4. n→σ*跃迁

吸收波长为200nm左右,大部分在远紫外区,近紫外区仍不易观察到.

含非键电子的饱和烃衍生物(含N,O,S

和卤素等杂原子)均呈现n →σ*跃迁。如一

氯甲烷、甲醇、三甲基胺,n →σ*跃迁的λ分

别为173nm、183nm和227nm。

5. 电荷迁移跃迁

6. 配位场跃迁

slide15
注:

紫外光谱电子跃迁类型:n—π*跃迁 π—π*跃迁

饱和化合物无紫外吸收

电子跃迁类型与分子结构及存在基团有密切联系

根据分子结构→推测可能产生的电子跃迁类型;

根据吸收谱带波长和电子跃迁类型 →推测分子中可能存在的基团(分子结构鉴定)

slide16
1.吸收光谱(吸收曲线)

是以波长(nm)为横坐标,吸光度A(或透光率T)为纵坐标所描绘的曲线。不同波长光对样品作用不同,吸收强度不同.

二、相关的基本概念
slide17

525nm

2.0

1.6

A 1.2

0.8

0.4

400 480 560 640 720

λ/nm

KMnO4溶液光吸收曲线

不同物质光吸收曲线的形状是不同的

吸收光谱的形状与物质分子的结构有关

2.0

1.6

A 1.2

0.8

0.4

250 300 350 400 450

λ / nm

K2Cr2O7溶液的光吸收曲线

slide18

看到:

 同一种物质对不同波长光的吸光度不同。

 不同浓度的同一种物质,其吸收曲线形状相似λmax不变。

 不同浓度的同一种物质,在某一定波长下吸光度 A 有差异,在λmax处吸光度A 的差异最大。

物质的λmax与其结构有关,

与浓度无关

slide19

2.吸收光谱特征

定性依据

吸收峰→λmax

谷→λmin

肩峰→λsh

末端吸收→饱和

σ-σ跃迁产生

slide20
3.生色团(发色团)能吸收紫外-可见光的基团3.生色团(发色团)能吸收紫外-可见光的基团

有机化合物:具有不饱和键和未成对电子的基

具n 电子和π电子的基团。

产生n→ π*跃迁和π→ π*跃迁。

例: C=C;C=O;C=N;—N=N—

4.助色团本身无紫外吸收,但可以使生色团或饱和烃吸收峰加强,同时使吸收峰长移的基团。

有机物:连有杂原子的饱和基团

例:—OH, —NH2,—X, —OR,—SH,

slide21
5.红移和蓝移

由于化合物结构变化(共轭、引入助色团取代基)

或采用不同溶剂后吸收峰位置向长波方向的移动,叫红移(长移)

吸收峰位置向短波方向移动,叫蓝移(紫移,短移)

6.增色效应和减色效应

增色效应:吸收强度增强的效应

减色效应:吸收强度减小的效应

7.强带和弱带

εmax>104 → 强带 εmin<102 → 弱带

slide22

仪器分析

第四讲

主讲教师:刘忠英                   学时:32

slide24
1.R带:由含杂原子的不饱和基团的n →π*跃迁产生

C=O;C=N;—N=N—

E小,λmax250~400nm,εmax<100

溶剂极性↑,λmax↓ → 蓝移(短移)

2.K带:由共轭双键的π→ π*跃迁产生

(—CH=CH—)n,—CH=C—CO—

λmax >200nm,εmax>104

共轭体系增长,λmax↑→红移,εmax↑

三、吸收带类型及其与分子结构的关系
slide25
3.B带:芳香族化合物的主要特征吸收带

λmax =230~270nm,宽带;

εmax=200

4.E带:由苯环环形共轭系统的π→ π*跃迁产生

芳香族化合物的特征吸收带

E1 180nm εmax>104(常观察不到)

E2 200nm εmax=7000 强吸收

苯环有发色团取代且与苯环共轭时,E2带与K带

( π→ π*)合并, 一起红移(长移)

slide27

C

H

n→ p*;R带

3

C

O

p→ p*;K带

slide28
5. 电荷转移吸收带指的是许多无机物(如碱金属卤化物)和某些有机物混合而得的分子配台物.在外来辐射激发下强烈地吸收紫外光或可见光,从而获得的可见或紫外吸收带.

6. 配位体场吸收带指的是过渡金属水合离子与显色剂(通常是有机化合物)所形成的配合物,吸收适当波长的可见光(或紫外光)从而获得的吸收带.

slide29

四. 影响吸收带的因素

1.位阻影响

max295.5nm

反式二苯乙烯

易形成共轭

max280nm

顺式二苯乙烯

不易形成共轭

2.跨环效应n-π*跃迁 R带红移

slide30
3.溶剂效应 影响峰位置、强度、-----光谱形状

对λmax影响:

n-π*跃迁:溶剂极性↑,λmax↓蓝移

π-π*跃迁:溶剂极性↑ ,λmax↑红移

对吸收光谱精细结构影响

溶剂极性↑,苯环精细结构消失

溶剂的选择——极性;纯度高;截止波长< λmax

slide31

由于极性

,所以,在由极性小到极性大的

溶剂中,能量下降的顺序为

溶剂极性

n-π*中,基态极性大n电子与溶剂之间能形成氢键,使基态能量下降的大。

极性大

极性小

n

极性小

极性大

n

slide32

正己烷

CHCl3

CH3OH

H2O

230

238

237

247

329

315

309

305

溶 剂

slide33
4.pH值的影响影响物质存在型态,影响吸收波长4.pH值的影响影响物质存在型态,影响吸收波长

如酚类化合物由于体系的pH不同,其离

解情况不同,而产生不同的吸收光谱。

235,287nm

210.5,270nm

lamber beer1
(一) Lamber-Beer定律:吸收光谱法基本定律

1760年

1852年

描述物质对单色光吸收的强弱与吸光物质的浓度和厚度间的关系的定律。

推到:假设一束平行单色光通过一个吸光物体

lg t a ecl
-lgT=A=ECl

Lambert-Beer定律的数学表达式

A—吸光度 E-吸光系数

C-溶液浓度 l-比色皿厚度

吸收定律表明,当用一束平行波长的单色光垂直照射均匀、透明的吸光介质时,其吸光度与溶液的浓度和厚度的乘积成正比, 这是定量分析的理论基础。

slide38

入射光 I0

透射光 It

吸光度 A= lg1/T = lg Io/It = -lgT=Ecl

T取值为 0.0 % ~ 100.0 %

全部吸收 T = 0.0 %

全部透射 T = 100.0 %

透光率

T ↗,溶液对光的吸收A ↘;

T ↘,溶液对光的吸收 A↗。

slide40

Lamber-Beer定律的适用条件(前提)

  • 入射光为平行单色光,垂直照射.
  • 溶液是稀溶液( C<0.01 mol/L )
  • 在同一波长下,各组分吸光度具有加和性
  • 应用:多组分测定
  • 讨论:
slide41

仪器分析

第五讲

主讲教师:刘忠英                   学时:32

slide42
(二)吸光系数和吸收光谱

1.吸光系数的物理意义:

一定波长下,单位浓度、单位厚度的吸光度.

2.吸光系数两种表示法:

1)摩尔吸光系数ε:

在一定λ下,C=1mol/L,l=1cm时的吸光度

2)百分吸光系数/ 比吸光系数:

在一定λ下,C=1g/100ml,l=1cm时的吸光度

3)两者关系

slide43

摩尔吸光系数ε的讨论

(1)吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特

征常数; ε=f(λ)

(2)不随浓度c和光程长度b的改变而改变。

在温度和波长等条件一定时,ε仅与吸收物质

本身的性质有关,与待测物浓度无关;

(3)可作为定性鉴定的参数;

slide44
(4)同一吸收物质在不同波长下的ε值是不同

的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数,常以εmax表示。εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力。

(5)εmax越大表明该物质的吸光能力越强,用

光度法测定该物质的灵敏度越高。

(6)若共存物互相不影响性质,即ε不变,总吸光度是共存物吸光度的和。

slide45
六、偏离Beer定律的因素

依据Beer定律,A与C关系应为经过原点的直线。

  • 偏离Beer定律的主要因素

(一)化学因素

(二)光学因素

(三)透光率的测量误差

slide46

(一)化学因素

  • Beer定律适用的另一个前提:稀溶液,浓度过高会使C与A关系偏离定律。

浓度影响——离解、缔合与溶剂作用, 二聚体吸收峰

slide47
酸效应

例: 铬酸盐或重铬酸盐溶

液中存在下列平衡:

2CrO42-+2H+= Cr2O72-+H2O

(黄色) (橙色)

溶液中CrO42-、 Cr2O72-的颜

色不同,吸光性质也不相同.

故此时溶液pH 对测定有重

要影响。

控制溶液条件,避免偏离现象,减少误差

slide48

(二)光学因素

  • 1.非单色光的影响:
  • Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光

仪器使用的是连续光源,

用单色器分光,由于单色

器色散能力的限制和出口

狭缝要保持一定的宽度,

不可能得到纯的单色光。

 选择较纯单色光

 选λmax作为测定波长

slide49
2.杂散光的影响:

杂散光来源:仪器本身缺陷;光学元件污染

造成;与所选波长相距较远.

杂散光可使吸收光谱变形,吸光度变值。

3.反射光和散色光的影响:

浑浊溶液产生散射和反射,从而产生“假吸收”,实测吸光度增大,导致定律的偏离。

注:一般可用空白对比校正消除。

4.非平行光的影响:

使光程↑,A↑,吸收光谱变形。

slide50

(三)透光率的测量误差——ΔT

在不同吸光度范围内读数也可引入不同程度的读数误差。这些误差来源于光源不稳、检测器、 显示器和噪音等误差的总和,所以也称之“测量误差”,这些误差最后都反映在读数上,表 现为“读数误差”。

T=0.368; A=0.4343, 测定误差最小

slide51

单色器

吸收池

光源

检测系统

第二节 紫外-可见分光光度计

一、组成部件及其作用

记录装置

紫外可见分光光度计

(195--820nm)

slide52

强度

氙灯(气体放电光源)

氘灯

氢灯

钨灯(热辐射光源)

钨灯

氢灯

/nm

400

600

1000

800

1.光源:发出所需波长范围内的连续光谱,有足够的光强度,稳定。

钨灯或卤钨灯——可见光源 350~2500nm

氢灯或氘灯——紫外光源 150~400nm

种类:

slide53

2.单色器:将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。狭缝、准直镜、色散元件

3.吸收池(比色皿):用于盛待测及参比溶液。

玻璃——能吸收UV光,仅适用于可见光区

石英——不能吸收紫外光,适用于紫外和可见光区

要求:匹配性(盛样品溶液和空白溶液的比色杯应匹配,对光的吸收和反射应一致)

比色皿必须与光束方向垂直。

每套比色皿的质料、厚度应

完全相同,以免产生误差。

slide54

4.检测器:将光信号转变为电信号的装置

光电池、光电管、光电倍增管、二极管阵列检测器

5.记录装置:讯号处理和显示系统

把放大的信号以 A 或 T 的方式显示或记录下来

slide55

0.575

光源

单色器

检测器

显示

吸收池

二、 分光光度计的基本类型

(一)基本类型

1.单光束分光光度计:

特点:结构简单,操作方便,适用于常规分析。

slide56

仪器分析

第六讲

主讲教师:刘忠英                   学时:32

slide57

721 型分光光度计

可见分光光度计

slide59
2.双光束分光光度计

经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束

光,一束通过参比池,一束通过样品池。光度计

能自动比较两束光的强度.

特点:不用拉动吸收池,可以减小移动误差。

消除光源强度变化所引起的误差

slide61
(二)光学性能
  • 波长范围
  • 波长准确度
  • 波长重现性
  • 透光率测量范围
  • 吸光度测量范围
  • 光度准确度
  • 光度重复性
  • 分辨率
  • 杂散光
slide62
(三)仪器的校正

波长、吸光度的准确度、吸收池的光学性能检查校正

  • 波长校正 :氢灯(氘灯)发射的原子谱线, 486.13nm,656.28nm
  • 吸光度校正:0.005mol/L的重铬酸钾硫酸溶液。
  • 吸收池的校正:

A、B杯分别装入参比溶液和试样溶液,测定二者的A值。

两个比色杯交换溶液,再测定,两次测定的A差值应小于1%

slide63
一、定性分析

二、定量分析

定性鉴别

纯度检查和杂质限量测定

单组分的定量方法

多组分的定量方法

第三节 紫外-可见分光光度分析方法
slide64
一、定性分析

定性鉴别的依据→吸收光谱的特征

吸收光谱的形状

吸收峰的数目

吸收峰的位置(波长)

吸收峰的强度

相应的吸光系数

相同化合物 × 吸收光谱相同

slide65
1.对比吸收光谱特征数据

同一测定条件下,与标准对照物谱图

或标准谱图进行对照比较:

吸收峰

谷 所在波长

肩 峰

吸光系数:不同化合物具有相同吸收基团,

但摩尔质量不同,吸光系数不同。

slide67
2.对比A或吸光系数的比值:

例:

3.对比吸收光谱的一致性

与标准品吸收光谱核对

与文献所载标准图谱核对

slide68
二 、 纯度检查

1.杂质检查

  • 1)峰位不重叠:
  • 找λ→使主成分无吸收,杂质有吸收→直接考察杂质含量
  • 2)峰位重叠:
  • 主成分强吸收,杂质无吸收 / 弱吸收
  • 与纯品比较,E↓。
  • 杂质强吸收 >> 主成分吸收→与纯品比较,E↑;
  • 3)有吸收的杂质使光谱变形。
slide69
2.杂质限量的测定: 允许存在的限量

(1)杂质的吸光度值

例:肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算

2mg/mL -0.05mol/L的HCL溶液,λ 310nm下测定

规定 A310≤0.05 即符合要求的杂质限量≤0.06%

slide70
(2)峰-谷吸光度比值

纯品碘解磷定:A294 / A262 =3.39

有杂质存在,杂质在262nm有吸收,

使A294 / A262 < 3.39。

A峰 / A谷 最小限定值

slide71
三、单组分的定量方法

1.吸光系数法

2.标准曲线法

3.对照法:外标一点法

slide72

仪器分析

第七讲

主讲教师:刘忠英                   学时:32

slide73
三、单组分的定量方法

1.吸光系数法

2.标准曲线法

3.对照法:外标一点法

slide75
例:维生素B12的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207,用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414,求该溶液的浓度。例:维生素B12的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207,用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414,求该溶液的浓度。

解:

slide76
例:精密称取B12样品25.0mg,用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml,又置100ml容量瓶中,加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中,于361nm处测定吸光度为0.507,求B12的百分含量?例:精密称取B12样品25.0mg,用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml,又置100ml容量瓶中,加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中,于361nm处测定吸光度为0.507,求B12的百分含量?

解:

slide79
3.对照法:外标一点法

λ一定,分别测定Ci Cs 吸光度Ai 和As

slide80
例:维生素B12的含量测定

精密吸取B12注射液2.50mL,加水稀释至10.00mL;另配制对照液,精密称定对照品25.00mg,加水稀释至1000mL。在361nm处,用1cm吸收池,分别测定吸光度为0.508和0.518,求B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量(该B12注射液的标示量为100μg / mL)

解:

slide82
三种情况:

1.两组分吸收光谱不重叠(互不干扰)

两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量

slide83
2.两组分吸收光谱部分重叠

λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca

λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Cb

slide84
3.两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定3.两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定

(1)解线性方程组法

(2)等吸收双波长消去法

slide87
消去b的影响测a

注:须满足两个基本条件

选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点

选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大

slide88

1.取咖啡酸,在165℃干燥至恒重,精密称取10.00mg,加少量1.取咖啡酸,在165℃干燥至恒重,精密称取10.00mg,加少量

乙醇溶解,转移至200mL容量瓶中,加水至刻度线,取此溶

液5.00mL,置于50mL容量瓶中,加6mol/L的HCL 4mL,加

水至刻度线。取此溶液于1cm比色池中,在323nm处测定吸

光度为0.463,已知该波长处的 ,求咖啡酸百分

含量?

slide89
解:

2.精密称取0.0500g样品,置于250mL容量瓶中,加入

0.02mol/L HCL溶解,稀释至刻度。准确吸取2mL,稀释至

100mL。以0.02mol/L HCL为空白,在263nm处用1cm吸收池

测定透光率为41.7%,其摩尔吸光系数为12000,被测物分

子量为100.0,试计算263nm处 和样品的百分含量。

slide90

五、结构分析(一)有机化合物的紫外吸收光谱五、结构分析(一)有机化合物的紫外吸收光谱

1 饱和碳氢化合物

只有 跃迁。如:CH4 125 nm;CH6 135 nm

2 含杂原子饱和化合物

, 跃迁。如: 表10-5

含孤立生色团(不饱和、不饱和杂原子化合物)

有 , , , 跃迁。

slide91

(3)共轭烯、炔

分子中有双键,但不共轭,只有双键吸收峰,

有 , 跃迁。如:

也在远紫外区。

但如果形成共轭,使波长向长波移动。

共轭体系增加,跃迁所需能量越小,吸收峰长移增 加,吸光系数增大。

slide92

e

10000

2×10000

21000

43000

121000

共轭分子

(nm)

随着共轭体系增大 λ向长波移动 ε逐渐增加

乙烯

165

165

217

丁二烯

己三烯

268

334

癸五烯

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O

O

羰基 — C —

O

—C=C—C—R

O

—C=C—C—H,

(4)α,β-不饱和醛、酮、酸、酯

醛和酮

没有共轭时C=C和C=O

200nm处强吸收

280nm处有羰基

有α,β-不饱和键时,形成共轭

200~260nm

310-350nm

溶剂对不饱和醛、酮影响较大,极性溶剂使 带红移

使 带蓝移。

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O

O

羰基 — C —

O

—C—OR

O

—C—OH,

酸、酯含有

与助色团-OH, -OR相连后

n

n

酸、酯与醛、酮比较, 吸收波长较长,

吸收波长短

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lge

E

2

E

1

B

184

l (nm)

204

255

(5) 芳香族化合物

λmax e

E1 184 60000

E2 204 8000

B 255 200

苯环上有取代基时,三个带都长移,吸收长度增加。

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(二)有机化合物结构的研究

1. 从吸收光谱中初步推断官能团:

220-800nm 无吸收,饱和碳氢化合物、胺、腈、醇、醚、

氯代烃、氟代烃,没有共轭体系,没有醛、酮;

210-250nm 有吸收,可能有两个共轭单位;

260-300nm 有强吸收,可能含有3-5个共轭单位

250-300nm 有弱吸收带,有羰基;

250-300nm 有中强吸收带,有苯环存在;

有颜色( 可见区有吸收带 ),共轭生色团在5个以上。

2. 异构体的推断:

(1)结构异构体: 不同,相应的吸光系数不同。

(2)顺反异构体:一般顺式异构体波长短,反式异构体波长长。

3. 化合物骨架的推断:未知化合物与已知化合物的紫外吸收光谱一

致,可能二者具有相同的发色团。

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六 比色法:可见分光光度法,吸收可见光。

不吸收可见光的无色物质,可以通过显色反应, 转化成有色物质,测定吸光度,进行定性定量分析。

特点:灵敏度高、选择性强,操作简便。

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(一)显色反应及条件
  • 1. 对显色反应的要求①被测物质与所生成的有色物质之间,必须有确定的定量关系,方能使反应产物的吸光度准确地反映被测物的含量。②反应产物必须有足够的稳定性,以保证测得的吸光度有一定的重现性。③如试剂本身有色,则反应产物的颜色与试剂颜色须有明显的差别,即产物与试剂对光的最大吸收波长应有较大差异,才能分辨产物的吸收与试剂的吸收。④反应产物的摩尔吸光系数足够大(103~105),才能有足够的灵敏度。⑤显色反应须有较好的选择性,才能减免干扰因索。对于萃取比色法.应有足够大的分配比.保证萃取完全.
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2. 反应条件

(1)试剂与溶剂

(2)酸碱度

(3)时间

(4)温度及其它

3. 反应条件的控制:

通过实验确定,描绘吸光度-条件曲线;(A-T,A-pH, A-C)

(二)测定方法

A = K C