ДИАГНОСТИКА ПЕРОКСИСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ У ДЕТЕЙ
Download
1 / 22

??????????? ????????????? ????????? ? ????? - PowerPoint PPT Presentation


  • 244 Views
  • Uploaded on

ДИАГНОСТИКА ПЕРОКСИСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ У ДЕТЕЙ. И.С. Мамедов, Ю.А. Смолина, В.С. Сухоруков НИЛ общей патологии ФГУ МНИИ педиатрии и детской хирургии. Функции пероксисом. катаболизм полиаминов «пероксисомное дыхание» синтез плазмологенов

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about '??????????? ????????????? ????????? ? ?????' - andres


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
4154805

ДИАГНОСТИКА ПЕРОКСИСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ У ДЕТЕЙ

И.С. Мамедов, Ю.А. Смолина, В.С. Сухоруков

НИЛ общей патологии ФГУ МНИИ педиатрии и детской хирургии


4154805
Функции пероксисом НАРУШЕНИЙ У ДЕТЕЙ

катаболизм полиаминов

«пероксисомное дыхание»

синтез плазмологенов

β-окисление длинноцепочечных (С24-26 и более)и разветвлённых жирных кислот (С 26 и более)

биосинтез эфиросодержащих липидов

α-окисление жирных кислот

детоксикация глиоксилата


4154805
Классификация пероксисомных болезней

Критерии разделения:

морфологический: отсутствие или наличие пероксисом в печени

биохимический: нарушение одной или нескольких функций пероксисом


4154805
Классификация пероксисомных болезней

1-ая группа

  • Синдром Целльвегера (СНЦ)

  • Инфантильная форма болезни Рефсума

  • Неонатальная адренолейкодистрофия

  • Точечная остехондродисплазия

  • Ряд форм амавроза Лебера

  • Гиперпипеколовая ацидемия

  • Ризомиелическая точечная хондродисплазия (РТОХД) первого типа

Пероксисомы в печени отсутствуют или их количество значительно уменьшено, полное нарушение биогенеза.


4154805
Классификация пероксисомных болезней

2-ая группа

Нарушение нескольких биологических функций, нормальное количество пероксисом в печени

целльвегероподобный синдром

синдром недостаточности D-бифункциональных белков

синдром псевдоцелльвегера


4154805
Классификация пероксисомных болезней

3-ая группа

Нарушение одной биологической функции нормальное количество пероксисом в печени

Пероксисомные нарушения β-окисления:

X-сцепленная адренолейкодистрофия (Х-АЛД)

Недостаточность ацил-КoA-оксидазы

Недостаточность D-бифункциональ­ных белков

Недостаточность белка, транспортирующего стирол (СТБ)

Недостаточность 2-метил-ацил-КоА-редуктазы (МАКoАР)

Нарушения биосинтеза эфиросодержащих липидов:

РТОХД второго типа

РТОХД третьего типа

Нарушения α-окисления фитановой кислоты:

Болезнь Рефсума

Нарушение детоксикации глиоксилата

Гипероксалурия первого типа


4154805

Уровни содержания длинноцепочечных жирных кислот (ДЦЖК), пристановой и фитановой кислот в плазме крови при различных пероксисомных нарушениях.


4154805
Диагностические маркёры пероксисомных нарушений

Фитановая кислота(C19H39COOH)

Пристановая кислота

Гексакозаеновая кислота (С26:0)

Лигноцериновая кислота (С24:0)

Бегеновая кислота (С22:0)

C24/C22

C26/C22


4154805
β пероксисомных нарушений-окисление жирных кислот


4154805
Окисление фитановой кислоты пероксисомных нарушений


4154805
Окисление пристановой кислоты пероксисомных нарушений


4154805
Газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС)

Agilent 6850/5375


4154805
Газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС)

Shimadzu GS 17A/GSMS-QP 5050


4154805

Rf/DC Voltage масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС)

Принцип работы масс-спектрометрического детектора


4154805
Материалы и методы масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС)

Материалом для исследования служит плазма, собранная аспирацией венозной крови как детей, так и взрослых пациентов.

Для длительного хранения, чтобы исключить изменения уровней содержания исследуемых соединений, плазма замораживается.

Большое число образцов плазмы пациентов, поступающих в лабораторию из различных клинических баз РГМУ, объединяются и тщательно перемешиваются. Для каждой серии анализа используются образцы, полученные из смеси плазмы одной выборки.


4154805
Этапы пробоподготовки: масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС)

Кислотный гидролиз

Щелочной гидролиз

Экстракция гексаном

Упаривание эстрагента в токе гелия

Дериватизация ацилирующим реагентом MBTFA


4154805
Хроматограмма длинноцепочечных жирных кислот в плазме крови, полученная методом ГХ-МС


4154805

Верхние эталонные значения фитановой и пристановой кислот для людей в возрасте 2-х лет и более:

фитановая кислота – 10 мкмоль/л

пристановая кислота – 3 мкмоль/л

Концентрации ДЦЖК в плазме контрольных образцов, в мкмоль/л .


4154805
Изменения уровней ДЦЖК в плазме при различных пероксисомных заболеваниях

СС26:0

мкмоль/л

Рис. 1. Уровни содержания жирной кислоты С26:0 в плазме крови пациентов с различными наследственными пероксисомными заболеваниями и контрольной группы в мкмоль/л.


4154805

Изменения уровней ДЦЖК в плазме при различных пероксисомных заболеваниях

С24/С22

Рис. 2. Значение соотношения С24/C22 для пациентов с Х-сцепленной адренолейкодистрофией и контрольной группы.


4154805

Изменения уровней ДЦЖК в плазме при различных пероксисомных заболеваниях

СФитановойк-ты

мкмоль/л

Рис. 3. Уровни содержания фитановой кислоты в плазме крови пациентов с болезнью Рефсума, РТОХД первого типа и контрольной группы в мкмоль/л.


4154805

Нами показано, что концентрация длинноцепочечных жирных кислот в плазме контрольной группы не зависит от возраста в то время, как для фитановой и пристановой кислот корреляция прослеживается в определённой степени.

Верхний эталонный уровень для фитановой кислоты, равен 10 мкмоль/л, тогда как для пристановой - 3 мкмоль/л для пациентов в возрасте от 2-х лет и более.

Совместный анализ длинноцепочечных жирных кислот, пристановой и фитановой кислот является действенным методом для выявления больных с пероксисомными нарушениями, что особенно важно на ранних стадиях заболевания.


ad