الفحوص المعملية

الفحوص المعملية

لتشخيص الطفيليات فى المعمل عن طريق : الفحص الميكروسكوبى (لعينات البول – البراز – الدم) بعد تجهيز العينات بالطريقة السليمة والمناسبة الطرق السيرولوجية باستخدام الانتيجينات عن طريق الاليزا (ELISA)

الاجهزة المستخدمة للفحص: 1- فحص البول عن طريق الاجهزة الاتية:- سنترفيوج كهربائى او يدوى ويستعمل لترسيب الاملاح والبويضات الموجودة فى عينة البول بقوة الطرد المركزية. - ميكروسكوب بجميع مشتملاته (عدسة عينية او اثنين –

– عدسات شيئية تكبير 100، 40 , 10 بالاضافة الى مسرح متحرك ذاتيا بحيث يكون الميكروسكوب كهربائيا او ضوئيا او كلاهما معا - انابيب سنترفيوج وانابيب اختبار وشرائح زجاجية وغطاء للشريحة. - بعض المحاليل اللازمة (لفحص السكر والزلال والصفراء فى البول)

- فحص البراز عن طريق الاجهزة الاتية : - ميكروسكوب بجميع مشتملاته (عدسة عينية او اثنين – عدسات شيئية تكبير 100، 40 , 10 بالاضافة الى مسرح متحرك - شرائح زجاجية وغطاء للشريحة – موقد – وابور سبرتو – قلمايا – كاس مخروطى – مقياس كثافة محلول ملح – فلاسكة – مصفاة سلك ضيقة – اقماع زجاجية او صاج – ماصة باستير – مراود زجاج

- المحاليل اللازمة أ‌- محلول ملح مشبع: 1200 جم/مل 1 كجم + لتر ماء مقطر = كجم 1200 (تعويم) ب‌- محلول ملح مخفف: 7 جم ملح + لتر ماء مقطر = كجم 1700 ج- محلول ملح طبيعى : 8.5 – 9 جم ملح= لتر ماء مقطر (اللطخة) يجب تحضير المحاليل طازجة ولا تترك لفترة طويلة

اخذ العينات 1- عينات البول يجب اخذ العينة فى كوب بلاستيك نظيف تماما ثم توضع فى كأس مخروطى نظيف – ترقم الاكواب والكاسات – مع تفضيل عينة بول الصباح ان امكن – وتكون فى منتصف التبول ويجب فحص البول خلال فترة وجيزة وعدم تركها لمدة كويلة حتى لا تتخمر بفعل البكتريا.

1- عينات البراز تؤخذ العينة فى كوب بلاستيك او صاج نظيف تماما بغطاء محكم ويراعى وضع البيانات (الاسم والرقم) ينبه على المرضى بعدم خلط عينات البول مع البراز – تفحص فورا ولا تترك فترة طويلة.

تحضير العينات 1 البول : تدور عينة البول فى جهاز السنترفيوج بعض وضعها فى انابيب نظيفة ومرقمة وذلك لفحص الراسب للأملاح او البويضات. - يمكن ان تترك العينة فى الكأس لمدة اطول حتى يتم الترسيب ثم يفحص الراسب للبويضات والاملاح.

1- البراز :- هناك ثلاث طرق لتحضير العينات طريقة العينة المباشرة (اللطخة المباشرة) (DIRECT SMEAR) وتستخدم لتشخيص الطفيليات وحيدة الخلية البروتوزوا مثل (الاميبا – الجيارديا – وكذلك الطفيليات الاخرى)

وذلك عن طريق اخذ قطعتين صغيرتين من البراز فى حجم راس عود الكبريت من الجزء المدمم او الصديدى ان وجد فى البراز وان لم يوجد تؤخذ من اى مكان وذلك بمرود خشبى او زجاجى او بلاستيك ثم توضع على شريحة زجاجية القطعتين واحدة على احد الاطراف للشريحة وتكون ممزوجة بمحلول ملح طبيعى وذلك لفحص البروتوزوا (الطور الخضرى)

وعلى الطرف الاخر من الشريحة تمزج بمحلول الملح الطبيعى ويضاف 2 نقطة من محلول اليود المائى 2% وذلك لفحص الاكياس للبروتوزوا (الاميبا) والجيارديا.

طربقة التعويم (FLOATATION) تستخدم لفحص عينات البراز لمشاهدة البويضات خفيفة الوزن التى يمكن ان تعوم على السطح وذلك باستخدام محلول الملح المشبع والبويضات التى يمكن فحصها بهذه الطريقة هى (التينيا – الانكلستوما – التريكوكفالس – الاكسيورس – هـ نانا )

وذلك عن طريق اخذ قطعة براز فى حجم حبة الفول فى كوب معدنى وتذاب فى محلول ملحى مشبع كثافته 1200 جم/ مل بواسطة المرود الزجاجى ثم تصفى العينة بمصفاة سلك موضوعة على قمع مركب على فوهة فلاسكة مخروطية (قلماية) ويتم التصفية فى الفلاسكة مع اضافة الملح المشبع حتى وصوله الى فوهة الفلاسكة

ثم يوضع على فوهة الفلاسكة شريحة زجاجية وتترك لمدة نصف ساعة ثم ترفع الشريحة باحتراس وتقلب تحت الميكروسكوب

طريقة الترسيب (SEDIMENTATION) تستخدم لفحص الطفيليات التى تكون بويضاتها اثقل وزنا من محلول الملح المخفف وبالتالى تترسب مثل بويضات (البلهارسيا – الاسكارس – هـ نانا – استرونجلويدس – تريكوكفالس – هتروفيس ) وذلك عن طريق اخذ قطعة براز فى حجم حبة الفول فى كوب معدنى صغير 60 سم ويضاف محلول الملح المخفف وتذاب العينة بالمرود الزجاجى

ثم تصفى بواسطة المصفاة السلك الموضوعة على قمع زجاجى مخروطى وتترك لمدة نصف ساعة حتى يتم ترسيب البويضات حتى يؤخذ من الراسب بواسطة ماصة زجاجية غير مدرجة (باستير) بضع نقط وتوضع على شريحة زجاجية وتفحص بالميكروسكوب بعد وضع غطاء شريحة عليها.

طرق الفحص

البول : - يستخدم الشريط الكاشف للدم لفحص البول للبلهارسيا للسن المدرسى3-12 سنة اناث. 3-18 سنة ذكور وتؤكد ميكروسكوبيا للايجابية لكاشف الدم. فحص نوعى: - فحص طبيعى (اللون – المظهر – التفاعل – الكثافة النوعية – الكمية – الرائحة – الرواسب - القوام) - فحص كيميائى (السكر – الزلال – الصفراء)

- فحص ميكروسكوبى للرواسب (كرات دم حمراء – خلايا صديد – املاح- اسطوانات خلايا بشرية – طفيليات وخاصة بويضات البلهارسيا واحيانا الاكسيورس والتريكوموناس وطفيل الملاريا – بكتريا – خمائر وفطريات)

فحص نوعى وكمى : وذلك لعد بويضات البلهارسيا وتستخدم فى طرق التقييم فقط بطريقة النيكليو بور (التصفية الغشائية) – سنترفيوج

1- البراز :- فحص نوعى : بالطريقة السابقة فحص نوعى وكمى : طريقة الكاتو كاتس

طريقة كاتو كاتس (اللطخة السميكه) لفحص البراز للتحديد النوعى والكمى للبلهارسيا والطفيليات المعوية:

الادوات المستخدمه : شرائح زجاجية مسجل عليها كود الوحده والعينه وتاريخ العينه ، مصفاه شبك النيترل او المصفاه المعدنيه (105 ثقب فى البوصه) ، قطعه بلاستيك الكاتو (3 X 4 سم) قطرها 6 مم وارتفاعها 1.5 مم

ويملاء البراز المصفى وزن 41.7 ملجم لثقب الكاتو ومرود بلاستيك مشطوف الطرفين وسيليفون بلاستيك(X 3022مم) وصبغة مالاكيت جرين 3% وماء مقطر وجلسرين 100 % -

- وضع قطعة الكاتو البلاستيك فى وسط الشريحه بحيث يكون طولها 4 سم عمودى على عرض الشريحه 2.5 سم وذلك حتى يسهل رفعها بعد ملاء ثقب الكاتو.

تحضير صبغة المالاكيت جرين : ضع 100 سم ماء مقطر مع 3 جم (بدرة صبغة المالاكيت جرين المخففه 1% وتخلط مع 100 سم ماء مقطر مع 100 سم جلسرين 100% ويتم وضع قطع السليفون (22 X30 مم) فى المحلول لمدة لا تقل عن يوم واحد حتى يتشبع السيليفون.

بضغط شبكة النيترول او المصفاه المعدنيه على العينه الموجوده على ورق جرنال يظهر اعلى الشبكة براز مصفى.

بأستعمال المرود البلاستيك بزاويه 45 درجة ولا تستعمله بزاوية قائمه حتى لا تتلف البويضات للحصول على البراز المصفى وعدم التخلص من عينه البراز حتى يمكن اخذ عينه اخرى اذا التصقت السيليفون بالجرنال.

ملأ ثقب الكاتو بالبراز المصفى ومساواة البراز المرتفع عن ثقب الكاتو بالحرف الجانبى الطويل للمرود للتخلص من البراز الزائد .

وضع قطعة السيليفون المشبع على العينه باستخدام الملقاط بعد رفع قطعة الكاتو التخلص من الصبغة الزائده بسحب السيليفون عند فم الزجاجه من الخلف والامام عدة مرات حيث ان الصبغه الزائده تزيد دكانة العينه ويمكن زيادة قطرة من الجلسرين فى وجود العينه الجافه نسبيا اما العينه اللينه نتيجه الاسهال لا تصلح لأخذ العينه.

وضع قطعة الشريحه مقلوبه على ورق جرنال ويتم الضغط برفق على حافتى الشريحه وليس من المنتصف حتى يتم فردها جيدا بحيث تظهر حروف الجرنال من العينه.

عدل الشريحه بلطف حتى لا يفصل السيليفون ووضع الشريحه فى الشمس بضعة دقائق او حضانه درجة حرارتها 40 درجه او ترك العينه لمدة (1.5-2) ساعه وهذا حتى يتم تبخر الماء

ويعمل الجلسرين على ترويق العينه كما يعمل على تأكل الخلايا داخل البويضه والميراسيديم وتختفى بويضات الانكلستوما خلال ساعتين من تحضير العينه وتفحص ميكروسكوبيا بالتسلسل وكلما تترك العينه كلما ازدادت الصبغه

وتظل محتفظة بشكل البويضات بضعة اشهر خاصة فى بويضات البلهارسيا والديدان السوطيه وديدان الاسكارس ويجب الحذر من الذباب داخل المعمل حيث انه يأكل العينه.

عدد البويضات فى الجرام = عدد البويضات فى الشريحه 24 X حيث ان 1 جم = 1000 ملجم = 24 مرة وزن ثقب الكاتو بالبراز المصفى

الفحوص المعملية

الفحوص المعملية

Presentation Transcript