انگل هاي نوپديد

2. انگل هاي نوپديد

3. مقدمه • تاکنون حدود 1415 ارگانيسم عفونی شناخته شده اند که می توانند انسان را آلوده کنند. از ميان آنها 217 ويروس و پريون، 538 باکتری و ريکتزيا، 307 قارچ، 66 تک ياخته و 287 کرم هستند. • 868 عدد (61%) از اين ارگانيسم ها زئونوز هستند و 175 گونه پاتوژن مرتبط با بيماری هايی هستند که امروزه نوپديد ناميده می شوند. • از بين اين پاتوژن های نوپديد 132 ارگانيسم (75%) زئونوز بوده، يعنی پاتوژن های زئونوز 2 برابر بيشتر از انواع غير زئونوز مرتبط با بيماری های نوپديد هستند.

4. بيماری های انگلی نوپديد کاذبPsudo-emergent parasitoses • به بيماری هايی اطلاق می شود که فراوانی افزايش يافته آنها در انسان عمدتا“ به علت تکامل ابزارهای تشخيصی است.

5. بيماری های انگلی نوپديد واقعیTruly-emergent parasitoses • به بيماری هايی اطلاق می شود که اخيرا“ شواهدی بر افزايش انسيدانس آنها حاصل شده و يا دلائلی مبنی بر افزايش انسيدانس آنها در آينده نزديک وجود دارد. • Zoonotic transmission • Anthroponotic transmission

6. بيماری های انگلی بازپديدRe-emergent parasitoses • به بيماری هايی اطلاق می شود که قبلا“ در پاتولوژی انسان شناخته شده اند اما اکنون فراوانی، شيوه انتقال و يا تظاهرات بالينی آنها به ميزان قابل ملاحظه ای تغيير کرده است.

7. Taxonomy • Kingdom: Protozoa • Phylum: Apicomplexa • Class: Sporozoasida • Subclass: Coccidiasina • Suborder: Eimeriorina • 1) Family: Eimerridae Genus: Cyclospora – Isospora • 2) Family: Sarcocystidae Subfamily: Sarcocystinae Genus: Sarcocystis Subfamily: Toxoplasmatinae Genus: Toxoplasma • 3)Family: Cryptosporidiidae Genus: Cryptosporidium

8. کوکسيديا • ايزوسپورا بلی ايزوسپوريازيس • کريپتوسپوريديوم کريپتوسپوريديوزيس • سيکلوسپورا کايتاننسيس سيکلوسپوريازيس

9. ايزوسپورا بلی (Isospora belli) • مونوگزنوز اجباری بوده و تمام مراحل تکثير جنسی و غير جنسی آن در روده باريک انسان مشاهده می شود. فاز خارج روده ای ندارد. • راه انتقال: مدفوعی- دهانی و فرم آلوده کننده اووسيست (Disporic-tetrazoic) • ميزبان اصلی: انسان • ميزان شيوع: بسيار پايين (اولين مورد انسانی در سال١٣٣٠ در ايران گزارش شده است). از انگل های فرصت طلب در بيماران مبتلا به ايدز است. • علائم بالينی: تهوع، دردهای شکمی، اسهال، افزايش تعداد اجابت مزاج، مدفوع چرب و رنگ پريده ژيارديا (استئاتوره) • درمان: TMP-SXT

11. کريپتوسپوريديوم (Cryptosporidium) • عامل گاسترانتريت حاد و خود محدود در کودکان و افراد با ايمنی سالم وکارا • عفونت پايدار وکشنده در بيماران با نقائص ايمنی • از انگل های فرصت طلب در بيماران مبتلا به ايدز است • دارای انتشار جهانی است • عوامل مستعد کننده: سن، وضعيت ايمنی بدن، آب و هوا، مسافرت، شغل، وضعيت بهداشتی و تغذيه، تماس با حيوانات

12. کريپتوسپوريديوم (Cryptosporidium) • اندازه حدود ٤ تا ۶ ميکرون، فقط دارای ٤ عدد اسپوروزوئيت است، اسپوروسيست ندارد. • تا به حال ۱٩ گونه معتبر آن نام گذاری شده اند. گونه هايی که بيشتر انسان را آلوده می کنند: • C. hominisانتقال از انسان به انسان • C. parvumانتقال از حيوان به انسان (زئونوز است) • جايگاه زندگی:Intestinal ، Gastric ،Multisite

13. Life cycle

14. اشکال بالينی کريپتوسپوريديوزيس • روده ای • بدون علامت • حاد خود محدود • مزمن • انفجاری • تنفسی • کبدی - صفراوی

15. سيکلوسپورا کايتاننسيس • اووسيست با اندازه ۸-۱۰ ميکرون دارای ٢ اسپروسيست و در هر اسپوروسيست ٢ اسپوروزوئيت دارد (Disporic-Dizoic). زير نور اولتراويوله (U.V) دارای اتو فلورسنس بوده به رنگ آبی ديده می شود. • تاکنون ۱٧ اپيدمی از آن در آمريکا و کانادا گزارش شده است. در ايران ٢ گزارش داريم • راه انتقال: آب ومواد غذايی آلوده (سبزيجات، تمشک وحشی، ريحان و کاهو) • از انگل های فرصت طلب در بيماران مبتلا به ايدز است • علايم بالينی: تهوع، استفراغ، دل درد و اسهال مزمن که گاهی ۱ تا ٢ ماه طول می کشد. • درمان: TMP-SXT

16. تشخيص Modified Ziehl-Neelsen staining Auramin staining Monoclonal antibody Histological diagnosis(H&E staining) Immunological diagnosis(ELISA) TEM Mollecular method

18. روش های تغليظ • جداسازی کيست تک ياخته ها و تخم کرم ها بر اساس اختلاف در وزن مخصوص آنها • روش های رسوبی: در اين روش ها تخم ها و يا کيست های سنگين تر از محلول سوسپانسيون در عمق لوله تغليظ می شوند مثل روش فرمالين- اتيل استات • روش های شناور سازی يا فلوتاسيون: در اين روش ها با استفاده از يک مايع سنگين انگل های سبک تر را در سطح شناور می سازند مثل روش شيتر

19. روش تغليظ فرمالين – اتيل استات • مواد و وسايل لازم : فرمالين ۱۰درصد ، اتيل استات، ليوان يک بار مصرف، باگت چوبي، دستکش يک بار مصرف، تنظيف پارچه اي، سوآپ پنبه دار، لام و لامل، لوله سانتريفوژ مدرج، درپوش پلاستيکي، ميکروسکوپ، جالوله اي، قيف و دستگاه سانتريفوژ

20. روش کار • با استفاده از يک باگت چوبي حدود ٢ گرم از نمونه مدفوع را برداشته و در يک ليوان يکبار مصرف قرار دادهمی شود. در صورتيکه نمونه مدفوع حالت آبکي داشته باشد، حدود ۱ ميلي ليتراز آن داخل ليوان ريخته مي شود. ۱۰ ميلي ليتر فرمالين ۱۰ درصد به نمونه افزوده شده و نمونه به خوبي در آن حل مي گردد به طوريکه سوسپانسون يکنواختي تشکيل شود. يک قيف پلاستيکي يا شيشه اي برداشته، روي آن ٣ تا ٤ لايه تنظيف خيس شده گذاشته، قيف روي لوله سانتريفوژ قرارگرفته و محلول فوق پس از به هم خوردن مجدد با استفاده از قيف وارد لوله مي شود. • سپس ٣ ميلي ليتر اتيل استات افزوده شده، درب لوله با درپوش پلاستيکي مسدود گرديده و به مدت چند ثانيه به شدت تکان داده می شود. سپس درب لوله برداشته شده و لوله به مدت ۵ دقيقه در دور۱۵٠٠ تا ٢٠٠٠ سانتريفوژ می شود.

22. رنگ آميزي اسيد - فاست • پس از تثبيت لام با متانول از تکنيک ذيل - نلسون اصلاح شده، جهت رنگ آميزي استفاده می شود. پس از ريختن فوشين قليايي بر روي گسترش ها، به کمک حرارت سعي می شود در عين مشاهده بخار از سطح لام ها، رنگ به نقطه جوش نرسد. اين عمل به مدت ۵ دقيقه انجام می گيرد. سپس گسترش ها زير شير آب شستشو داده شده، در محلول رنگ بر اسيد-الکل (٣درصد) قرارگرفته، پس از زماني حدود ٣٠ ثانيه گسترش ها خارج شده و پس از شستشو زير شيرآب، به مدت ۱ دقيقه در محلولمتيلن بلو يا مالاشيت گرين قرارمي گيرند. سپس لام شسته شده و بعد از خشک شدن با درشت نمائي ۱٠٠٠ مورد بررسي قرار مي گيرد.

24. محلول کاربل – فوشين اصلاح شده • فوشين قليايی.................4 گرم • اتانول95%................20 ميلی ليتر • پودرفنل.....................8 گرم • آب مقطر.....................100 ميلی ليتر

25. رنگ متيلن بلو • متيلن بلو................3/0 گرم • اتانول 95%........... 30 ميلی ليتر • آب مقطر............... 100 ميلی ليتر محلول رنگ بر • اسيد کلريدريک................3 ميلی ليتر • الکل اتيليک 95....................97 ميلی ليتر

26. تغليظ به روش شيتر • حدود ۱ تا ٢ ميلي ليتر از مدفوع در لوله آزمايش ريخته شده و با افزودن سوکروز اشباع سه چهارم لوله پر ميشود به طوريکه تنها ۱ الي٢ سانتي متر بالاي آن خالي مي ماند. توسط يک باگت چوبي مخلوط کاملاً بهم مي خورد، سوسپانسيون يکنواختي از آن تهيه مي شود. لوله آزمايش به مدت ۱۰ دقيقه با دور ۱۰۰۰ سانتريفوژ شده و بعد با استفاده از يک پي پت پاستور مواد سطح لوله به لوله اي ديگر منتقل مي گردد. پس از ٢ بار شستشو با محلول PBS رسوب به محيط کشت بي کرومات پتاسيم ۵/٢ درصد منتقل مي شود.

27. روش تهيه محلول شيتر • شکر......................۵٠٠ گرم • آب مقطر ................٣٢۰ميلي ليتر • فنل ..................... ۶/۵ گرم • پس از حل نمودن شکر در آب ، فنل به آن افزوده مي شود.

43. Microsporidia • ميکروسپوريدياها انگل های اجباری درون سلولی هستند که قـادر به توليــد هاگ يا اسپور در ميزبان خود هستند. • اين انگل ها باعث آلودگی بسياری از حيوانات شده وامروزه به عنوان عامل بيماری در انسان به خصوص به عنوان عفونت فرصت طلب در مبتلايان به ايدز شناسايی شده اند. • اين گروه از انگل ها از سال 1857 مـــــــورد بررسی وشناسايی قــــــرار گرفتند. • ميکروسپوريداها حد فاصل پروکاريوت و يوکاريوت ها هستند: • شبيه يوکاريوت ها: هسته مشخص، غشاﺀ هســـــته، غشـــــــــاﺀ پلاسمـــايی • شبيه پروکاريوت ها: فاقد ميتوکندری، دستگاه گلژی، فقدان پراکــسی زوم و ريبوزوم S 70

44. Microsporidia • تاکنون ١۴٣ جنس و هزارو دويست گونه از ميکروسپوريديا ها تشخيـــــص داده شـــــده اند که در گروه وسيعی از حيوانات غير مهره دار و مهره دار انتـــشار دارند. • بعضی از گونه های اين انگل ها هر ساله خسارات فراوانی به صنعت کرم ابريشم و زنبور عسل وارد می سازند. • ميکروسپوريدياها در مدفوع 39% از مبتلايان به ايدز که دارای اسهـــــال مزمن بوده اند، يافت شده وبراساس گزارش ديگری 30 % مبتلايان به ايدز که دارای عفونت کريپتوسپوريديايی بوده اند همزمان به ميکروسپوريديا نيز آلودگی داشتند. • در مبتلايان به ايدز که تعداد سلو لهایCD4+,T آنها کمتر از 50 عدد در ميلی متر مکعب بوده است اين عفونت از شيوع بيشتری برخوردار است

45. خصوصيات ميکروسپوراها • دارای سيکل جنسی و غير جنسی هستند و ماحصل سيــــــکل جنسی اسپور يا هاگاست. • اندازه اسپورهــــــا از ۱ تا۱٢ ميــــکرون متغير است ولـــــی ميکروسپوريدياهای انسانی ۱ تا٤ ميـــــــکرون اندازه دارند. • گرم مثبت هستند. • برای مطالعه ساختمان درونی آنها نياز به ميــــــــکروسکوپ الکترونی است. • تعداد هسته ها، تعداد پيچش فيلا مان ها، انـــــدازه اسپور، شکل اسپور در تعيين جنس و گونه اهميت دارند.

46. ساختمان اسپور • اگزوسپور يا ديواره ضخيم خارجی • اندوسپور با ديواره نازک • هسته: ۱تا٢عدد است + سيتوپلاسم • کيسه قطبی (polar sac) : فيلامان ها از آن خارج می شوند • واکوئل

47. Taxonomy • Kingdom: Protozoa • Phylum:Microspora • Class: Microsporea • Order: Microsporidia • Genus:1) Encephalitozoon: E. intestinales, E. hellem, E. cuniculi • 2) Nosema: N. connori, N. corneum, N. ocularum, N. bombycis, N. apis, N. branchiale • 3)Enterocytozoon: E. bieneusi, E. salmonis • 4)Vitaforma: V. cornea • 5)Pleistophora: P. ronneafiei • 6) Trachipleistophora: T. hominis, T.anthropopthera • 7)Microsporidium: M. africanum, M. ceylanensis • 8)Brachiola: B. algerae, B. vesicularum, B. connori

48. بيماريزايی • گرچه بعضی انواع ميکروسپوريديا احتمالا“ جزﺀ عوامــل شايــع عفونت های بدون علامت و يا خودمحدود شونده در نزد بيماران دارای سيستم ايمنی طبيعی معرفی شده اند ولی ابهامات فــراوانی در مورد بيماريزايی آنها وجود دارد. • ميکروسپوريديوزيسدربيماران دچار ايدز به مراتب شايعتراست. • اصولا“ علائم بالينی به محل استقرار انگل در بدن ميزبان بستگی دارد • عفونت های روده ای، چشمی، ميوزيت، تنفسی، کبدی-کليوی-صفراوی ومنتشر

49. بيماريزايی • عوامل ايجاد کننده عفونت هـــــای روده ای: انتــــــروسيتوزون بينئوزی، انسفاليتوزون اينتستيناليس • اين انگل ها به عنوان عوامل اصلی در ١۰ تا ۴۰ درصد از بيماران ايدزی مبتلا به اسهال مزمن شناسايی شده اند. • هر دو ارگانيسم در دستگاه صفراوی بيماران مبتــــــــلا بــه کوله سيستيت مشاهده شده اند. • انسفاليتوزون اينتستيناليس ممکن است در بدن منتشر شده وباعث ايجاد تب، سينوزيت و کلانژيت شود. • از بين عفونت های ايجاد شده توسط ميکروسپوريديا ها بيشترين ميــــــزان بروز مربوط به نوع روده ای است که در طی آن شاهد اسهال آبکی شديد و مداوم هستيم و تمايل به مزمن شدن داشته و می تواند کشنده باشد.

50. Clinical Manifestation Intestinal infection : Enterocytozoon bineusi Encephalitozoon intestinalis Ocular Infection : Nosema ocularum Vittaforma corneae- Enc.hellem Muscular Infection: TrachiPleistophra hominis Systemic Infection: Enc.intestinalis Enc.hellem-Enc.cuniculi- N.connori