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黑龙江生物科技职业学院

黑龙江生物科技职业学院. 生物制药技术. 生物分离技术. 主讲人：张爱华. 实训六、卵磷脂的制备及鉴定. 1. 目的要求. 2. 2. 实验原理. 3. 材料用具. 操作方法. 4. 5. 注意事项. 5. 目的要求. 熟悉从蛋黄中制备卵磷脂的原理. 掌握卵磷脂的制备基本操作及鉴定技术. 原理. 卵磷脂及其他脂质可溶于乙醇被抽提，用丙酮从粗 卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质 和胆固醇分离开来。可利用金属盐沉淀剂将卵磷 脂从溶液中分离出来 。. 用紫外分光光度计扫描其在 90-400nm 的

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Presentation Transcript

  1. 黑龙江生物科技职业学院 生物制药技术 生物分离技术 主讲人：张爱华

  2. 实训六、卵磷脂的制备及鉴定 1 目的要求 2 2 实验原理 3 材料用具 操作方法 4 5 注意事项 5

  3. 目的要求 熟悉从蛋黄中制备卵磷脂的原理 掌握卵磷脂的制备基本操作及鉴定技术

  4. 原理 卵磷脂及其他脂质可溶于乙醇被抽提，用丙酮从粗 卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质 和胆固醇分离开来。可利用金属盐沉淀剂将卵磷 脂从溶液中分离出来 。 用紫外分光光度计扫描其在90-400nm的 吸收光谱，可测得卵磷脂的紫外最大吸收峰。 卵磷脂紫外最大吸收峰在215nm波长。

  5. 材料用具 新鲜鸡蛋、卵磷脂对照品、GF254硅胶板 离心机、旋转蒸发仪、布式漏斗、抽滤瓶、 真空干燥箱、层析缸、紫外分光光度计、 钳锅

  6. 试剂 （1）无水乙醇、95%乙醇、0.1%乙醇 （2）10%氯化锌溶液； （3）2%氯仿溶液； (4)丙酮(冰)； (5)甲醇； (6)碘

  7. 操作方法 鸡蛋卵黄 2倍于卵黄体积的95％乙醇 混 合 搅 拌 减压 蒸馏 (45℃) 至干 离心机 3000r/min 15 min 沉淀物 提取3次 取上清液 1.粗提（一）

  8. 操作方法 粘壁的黄色油状物质 加 入 丙 酮 石油醚洗下 分离出沉淀物 抽滤 40℃真空干燥30min 1.粗提（二）

  9. 操作方法 干燥的 卵磷脂 粗品 约10% 乙醇 粗提液 加无水 乙醇 加相当于卵磷脂质量的 10％的氯化锌水溶液 室 温 搅 拌 0. 5h 加入冰丙酮 (4℃)洗涤 白色蜡 状的 精卵 磷脂 搅拌1h 用丙酮 复研洗 分离 沉淀物 2.精制

  10. 操作方法 卵磷脂 样品 氯仿：甲醇：水 (65：25：4)展开 GF254硅胶板层析 碘蒸气 显色 卵磷脂 对照品 氯仿：甲醇：水 (65：25：4)展开 GF254硅胶板层析 3.薄层色谱分析

  11. 操作方法 卵磷脂 样品 0.1％ 乙醇 溶液 溶于无水乙醇 90-400nm的 吸收光谱 测得卵磷脂的紫外最大吸收峰 紫外分光光度计扫描 4.紫外吸收光谱测定

  12. 注意事项 1.碘蒸气显色时，应保证层析干燥， 碘蒸气量不可过浓 2.紫外吸收光谱测定时样品与 对照品溶液浓度应相同

  13. 思考题 1．讨论影响卵磷脂得率的主要因素。 2．根据紫外吸收光谱分析所制备的卵磷脂的纯度 。

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