动物细胞工程

《细胞工程》二轮复习 X 植物细胞工程植物组织培养：植物细胞工程的,原理是. 植物体细胞杂交：原理是. 细胞工程的基础，原理是. 动物细胞培养：动物细胞工程动物细胞融合：原理是. 不增殖但可产生抗体的与不产生抗体但可增殖的融合成既无限增殖又可产生单克隆抗体的。单克隆抗体：细胞核移植：原理是. 体细胞的克隆：原理是. 永州市第四中学阳青海2012-3-19 基础细胞的全能性细胞膜的流动性和细胞的全能性动物细胞工程细胞的增殖细胞膜的流动性浆细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞的细胞核的全能性动物细胞的细胞核的全能性

植物细胞工程 植物的组织培养（是植物细胞工程的基础）一、植物的组织培养的原理是。植物的组织培养细胞的全能性遗传信息具有某种生物全部的任何一个细胞都具有发育成的潜能，也就是说，每个生物细胞都具有的特点概念完整生物体全能性细胞的全能性该物种原因生物每一个细胞都都包含有所特有的全套。遗传物质（基因或遗传信息）受精卵分裂不分裂 ›卵细胞›精子›体细胞；的细胞›的细胞；动物细胞的全能性受到，但动物具有全能性大小细胞核限制外植体 ①离体状态（离体细胞、组织或器官称为） ②一定的营养物质（水、无机盐、氨基酸、蔗糖等） ③植物激素: (促进根发育)、 (促进芽发育) ④适宜的外界条件（温度、pH、氧气、光照、等）条件生长素细胞分裂素无菌条件

植物体细胞分离素 >生长素愈伤组织离体组织器官细胞芽胚状体发育脱分化再分化细胞分离素 ≈生长素根细胞分离素 <生长素不需光需要光 • 二、植物的组织培养 • 1、原理：. • 2、培养基： • ①名称：. • 种无机盐、有机营养成分（氨基酸、维生素、蔗糖提供和）、植物激素（生长素促进 • 的发育、细胞分裂素促进的分化）琼脂（作为）。 • 3、植物组织培养的过程 • ①植物组织培养的一般过程植物细胞的全能性 MS固体培养基 14 营养调节渗透压芽根凝固剂

②体植物组织培养的流程图 。 ③菊花的组织培养的实验操作。 ④花药培养产生花粉植株的两种途径 4、植物体细胞离体培养属于生殖；植物的花药离体培养属于生殖。 5、植物组织培养的应用植物繁殖的新途径如微型繁殖、作物脱毒（因根尖或茎尖作外植体，不带且操作）、人工种子（种皮、胚状体和人工胚乳组成）；作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用、基因工程育种）；细胞产物的工厂化生产（蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱等）花药中的花粉（单核期的花粉）花药中的花粉（单核期的花粉）脱分化脱分化再分化分化诱导诱导胚状体愈伤组织移栽移栽丛芽丛芽生根生根植物组织→形成愈伤组织→长出丛芽→生根→移栽成活制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培无性有性病原体无菌

例1下图是植物组织培养的简 略图表示.据此回答: (1)①表示,它能被培养成为④的根本原因是。 (2)②表示,它与①相比分化程度，全能性。 (3)若想制作人工种子,应该选用。人工种子的⑤要求。 (4)若①是花药,则④是，继续对其使用处理可获得正常植株，该育种方法称为。 (5)若①是胡萝卜根尖细胞，则培养成的④的叶片的颜色是,这说明根尖细胞。 (6)若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物——紫草素，培养将进行到（填编号）。 (7)若培育转基因油菜应表达载体导入细胞中。 ⑤ ⑥ ⑦ 离体的植物器官组织或细胞植物细胞的全能性愈伤组织高低 ③ 透水通气易降解单倍体植株秋水仙素纯合单倍体育种绿色含有与叶绿体形成相关的基因 ② ①

三、植物体细胞杂交 1、原理: 。 2、图解如右,过程如下： (1)原生质体的制备【①过程为除去，方法是，所用的酶是】 (2)原生质体融合【②过程是诱导原生质体融合.物理法包括、振动、、电刺激等；化学法一般用聚乙二醇()作为诱导剂来诱导细胞融合.③过程是原生质体融合后再生出的过程,这是成功的标志】 (3)杂种细胞的筛选和培育【体细胞融合成功后，既有AB型细胞，还能形成两种融合细胞，但只有细胞是植物体细胞杂交所形成的杂种细胞】 (4)杂种植株的鉴定 3、意义：克服的障碍，大大扩大了可用于杂交的亲本组合范围 A B A 细胞膜的流动性和细胞的全能性 B 细胞壁酶解法纤维素酶和果胶酶离心失重 PEG 细胞壁原生质体融合 AA型和BB型 AB型远缘杂交不亲和

四、植物细胞工程的实际应用 是快速高效实现种苗繁植培育优良植物品种的植物组织培养技术概念微型繁殖技术高效性繁殖速度快 1植物繁殖的新途径优点保持种苗的优良遗传特性不受自然生长季节的限制作物脱毒原理微生物病原体在植物体内通过输导组织传播,而植物的分生区一般不感染病毒,用分生区的细胞进行组织培养,就能得到大量的脱毒苗作物脱毒作物脱毒材料：分生区如茎尖、芽尖等的细胞进行植物组织培养作物脱毒方法：作物脱毒结果作物脱毒苗植物组织培养所得的胚状体或根芽最外面套上人工充满人工胚乳,具有发育成新植株的种子概念人工种子人工种皮：可透水、可透气、可降解可加适量的养分、无机盐、有机碳源以及农药、抗生素、植物生长调节剂、有益菌等人工胚乳结构胚状体：相当种子的胚发育成新植株的结构基础

例2下面为植物组织培养过程流程图解,以下相关叙述不正确的是例2下面为植物组织培养过程流程图解,以下相关叙述不正确的是 B A.上述过程中脱分化发生在b步骤,在此过程中植物激素发挥了重要作用 B.再分化发生在d步骤，是愈伤组织重新分化成根或芽等器官的过程 C.从叶组织块到种苗形成的过程说明植物叶片细胞具有全能性 D.人工种子可以解决有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题例3右图示某植物的培育过程,请据图判断下列说法中错误的是 A A.A→F不能体现细胞的全能性 B.C中是高度液泡化的薄壁细胞 C.植株A和F中的染色体组数不同 D.植株F一般不能直接应用于生产

例4下图是“白菜-甘蓝”杂种植株的培育过程.下列说法正确的是例4下图是“白菜-甘蓝”杂种植株的培育过程.下列说法正确的是 D A.植物体细胞杂交技术已经能使杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良性状 B.愈伤组织是由排列紧密的薄壁细胞组成 C.上述过程中包含着有丝分裂，细胞分化和减数分裂等过程 D.“白菜-甘蓝”杂种植株具有的性状是基因选择性表达的结果例5图示为一人工种子.下列与人工种子培育过程的有关叙述中不正确的是 D A.人工种子一般是用离体的植物细胞通过组织培养技术获得 B.胚状体是由愈伤组织再分化而成,离体细胞只有形成愈伤组织才能表现出全能性 C.同一批次的人工种子可以保证具有相同的基因型 D.胚状体是由未分化的，具有分裂能力的细胞构成

植物的材料① 诱导出愈伤组织② 动物的胚胎细胞培养⑤ 去壁的原生质体③ 电激融合④ 融合的胚胎⑥ 分裂形成胚胎⑦ 将胚胎移植到代孕母体子宫内⑧ 动植物的杂交种出生⑨ 例6自然界中有一种含有叶绿体的原生动物-眼虫,这说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活.某同学提出问题“动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？”他尝试设计出下列具体的实验方案.结合实验方案回答: 实验原理:根据眼虫的特点,动物细胞和植物细胞之间在理论上是可以实现杂交的.实验步骤如下： (1)①中选的植物材料细胞中,必须有的细胞器是. 叶绿体纤维素酶 (2)③过程所用的酶是和 . 果胶酶病毒 (3)④过程除了用电激之外,还可以用、等做诱导因素。聚乙二醇 (4)⑤过程动物细胞体外培养需要满足的条件是、、、。无菌、无毒的环境气体环境营养温度和pH (5)在整个实验过程中,要强调所用器械的灭菌和实验人员的无菌操作, 原因是: 防止其他微生物与培养物竞争营养和防止其他微生物产生的有害物质导致培养物迅速死亡

(6)在⑤⑥过程中,通常要添加血清,原因是: ① ③ ④ ⑤ 杂种植物幼苗白菜细胞 ② 甘蓝细胞由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚,通常加入血清、血浆等一些天然成分以补充培养基所缺的营养. 动物细胞培养 (7)如果让动植物杂交种批量培养生产,可以用技术。 (8)动植物杂交种细胞是否有细胞壁？.理由是: 无因为胚胎在母体子宫中完成胚胎发育例7白菜、甘蓝的基因型分别为AaBB、ccDd.“白菜-甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种,它具有生长期短和耐储藏等优点.下图是“白菜-甘蓝”的培育过程示意图;请回答下列问题：纤维素酶和果胶酶 ⑴在上述过程中,实现①②过程常用的物质为. ⑵如果将已去除细胞壁的植物细胞放入等渗溶液中,细胞形. ⑶过程③叫做技术,该过程的诱导方法有物理法和化学法两大类过程。若用化学法,所用化学试剂名称,该过程中获得的融合细胞的基因型。圆球原生质体融合聚乙二醇(PEG) AAaaBBBB AaBBccDdccccDDdd

新物种 生殖隔离（4）体细胞杂交育种的优点:打破,创造. （5）尚未解决的问题:还不能让杂种植物按照人们的要求表现出的性状。亲代例9某株名贵花卉用种子繁殖会发生性状分离.为了防止性状分离并快速繁殖,可以利用该植物的一部分器或组织进行离体培养,发育出完整的植株。进行离体培养时不应采用该植株的 A、茎尖 B、子房壁 C、叶片 D、花粉粒 D 例8在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中,下列哪一项条件是不需要的？ A、适宜的营养物质 B、适宜的温度 C、消毒灭菌 D、适宜浓度的生长激素例10有关全能性的表述中,不正确的是 A受精卵在自然条下能使后代细胞形成完整个体,因此全能性最高 B.生物体内细胞由于分化全能性不能表达 C.卵细胞和受精卵一样,细胞未分化,全能性很高 D.植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性 D C

例11下图为植物体细胞杂交过程示意图.据图回答.例11下图为植物体细胞杂交过程示意图.据图回答. (1)步骤①是,最常用的方法是。 (2)步骤②一般常用的化学试剂是,目的是。 (3)在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中,运用的技术手段是，其中步骤④相当于，步骤⑤相当于。 (4)植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株.使能够在新的植物体上有所表现,其根本原因:. (5)杂交亲本A和B都是二倍体,则杂种植株为倍体 (6)从理论上讲,杂种植株的育性为.若运用传统有性杂交方法能否实现？。并说明理由。因此，这项研究对于培养作物新品种方面的重大意义在于。 (7)利用植物体细胞杂交的方法培育作物新品种过程中,遗传物质的传递是否遵循孟德尔的遗传规律？为什么？。去掉细胞壁分离出有活力的原生质体酶解法聚乙二醇（PEG）诱导不同植物体细胞的原生质融合植物组织培养脱分化再分化远缘杂交亲本的遗传特征杂种植株获得双亲的遗传物质四可育不能因为不同生物物种之间存在生殖隔离克服远缘杂交的不亲和的障碍，大大扩展了用于杂交的亲本组合范围不遵循。因为在生物进行有性生殖的过程中，才遵循孟德尔的遗传规律，而植物细胞杂交育种的过程不属于有性生殖。

例12野生马铃薯品种的植株具较强抗病、抗虫、抗盐碱、抗寒能力,但块茎不能食用.用野生马铃薯与马铃薯的体细胞杂交,培育出了生活能力强的杂交马铃薯。据图分析回答问题：例12野生马铃薯品种的植株具较强抗病、抗虫、抗盐碱、抗寒能力,但块茎不能食用.用野生马铃薯与马铃薯的体细胞杂交,培育出了生活能力强的杂交马铃薯。据图分析回答问题： (1)①过程植物细胞原生质体的分离需经过酶解,其中“酶解”所用的酶应该包括.去细胞壁的作用防止细胞壁阻碍原生质体的,去壁后的原生质体呈.这种去壁法称为. (2)②过程可用聚乙二醇(PEG),其目的是. (3)请用文字和箭头表示出④⑤技术过程的实验流程：此过程可以看出杂种植物细胞也具有. (4)原生质体成功的标志是原生质体再生出.可以取样,通过实验来鉴别是否已经再生. 再分化脱分化愈伤组织幼苗融合细胞纤维素酶、果胶酶融合球形酶解法诱导原生质体融合具有全能性细胞壁植物细胞的质壁分离与复原细胞壁

(5)若要培养抗盐杂种植株应在分化培养基中加入溶液;(5)若要培养抗盐杂种植株应在分化培养基中加入溶液; ③④过程所用培养基的生长素和细胞分裂素分别促进的发育. (6)植物体细胞杂交培养成的杂种植株是育的，而且一个新物种因为它与两个亲本植株存在。植物体细胞杂交育种的优点打破了，培育出新物种。但杂种植株有很多基因控制形状. (7)植物体细胞杂交的原理是；而骨髓瘤细胞与浆细胞融合成能产生单抗的杂交瘤细胞的原理是；动物细胞培养的原理是。 (8)若A植物染色体组成为2A+X1X1,B植物染色体组成为2B+X2X2，杂种植株的染色体组成是。 (9)杂种细胞代谢类型是,④表示,⑤表示. 较高浓度的盐根和芽是可生殖隔离生殖隔离不能表达细胞膜的流动性和植物细胞的全能性细胞膜的流动性细胞的增殖 2A+ 2B+X1X1+X2X2 异养需氧型脱分化再分化

动物细胞工程 动物或动物器官(分裂能力) 剪碎、用胰蛋白酶或处理,使细胞分散单个细胞、制成、转入培养液中原代培养：将动物组织消化后的培养。细胞贴壁、抑制重新用或胶原蛋白酶处理，使细胞分散单个细胞、制成细胞悬液、转入培养液中传代培养：的细胞重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。代以内，保持细胞正常的型代，部分细胞的细胞核型发生变化一、动物细胞培养 1、原理：. 2、过程：如右图 3、条件： ①无菌无毒(培养液和所有培养用具无菌处理; 培养液加; 定期更换) ②适宜温度(36.5+0.5℃) 和PH(7.2-7.4) ③全面的营养及血清 (补充合成培养基中所缺的营养成分) ④气体环境:空气 (氧气是细胞代谢所必需的) ＋ (调节PH) 强细胞增殖胚胎幼龄胶原蛋白酶细胞悬液初次抗生素接触培养液胰蛋白酶贴满瓶壁二倍体核 10 95% 10-50 细胞株 10-50代的细胞群称为；50代以后的细胞群称为. 5%CO2 细胞系

4、应用： ①生产制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 ②提供基因工程细胞③检测物质，判断某种物质的。 ④用于生理、病理、药理等方面的研究⑤移植治疗供体细胞细胞培养供体细胞重组细胞重组胚胎代孕母亲克隆动物胚胎移植电刺激融合分裂、发育注入去核卵母细胞采集卵母细胞去核培养到MII中期 ①克隆动物的性别与亲本相同 ②克隆动物的性状与供核亲本相同蛋白质受体有毒毒性二、体细胞克隆（核移植） 1、原理：. 2、过程如下图 3、应用①加速家畜改良进程，促进繁殖②保护物种，增加存活数量③转基因动物作为，生产医用④转基因动物作为异种移植的⑤人的核移植胚胎干细胞诱导分化形成的组织、器官用于组织器官的。动物细胞核的全能性优良畜群遗传生物反应器濒危蛋白供体移植供核基本

三、单克隆抗体的制备（配以图解） 1、所用基本技术:和.2、单克隆抗体的概念和特点 ①概念:由杂交瘤细胞增殖形成的细胞群所产生分泌的抗体， ②特点:性质单一、强、高的特点。 3、单克隆抗体的制备步骤 ①正常小鼠的处理即注射特定的，以产生。 ②动物细胞的融合(原理:细胞膜的 ;融合的方法有、和促融) ③杂交瘤细胞的筛选(第一次筛选出,第二次筛选出能产生的杂交瘤细胞) ④单克隆抗体的提取小鼠培养细胞注射特定. 浆细胞 (效应B细胞) 细胞人工诱导细胞融合多种细胞选择培养基筛选细胞选择能产生所需抗体的杂交细胞瘤群体外培养注射到小鼠内腹水中提取培养液中提取单克隆抗体单克隆抗体动物细胞培养动物细胞融合骨髓瘤一个抗原特异性化学灵敏度骨髓瘤免疫抗原杂交浆细胞杂交瘤流动性物理法灭活的病毒化学法杂交瘤细胞腹腔特定抗体

预期的蛋白质功能 雌性动物雄性动物预期的蛋白质 ① ⑥ ⑦ 卵母细胞精子预期的蛋白质结构 ⑧ ⑨ ② 体外受精应有的氨基酸序列转基因动物 ③ 从动物细胞内获取相关蛋白质的核酸片段基因表达载体受体目的基因受精卵早期胚胎 ⑤ ⑩ ④ ⑥ 运载体例13上图是某种动物蛋白质工程的示意图，分析回答 (1)目前蛋白质工程中难度最大的是图中编号所示的过程,实现③过程的依据有、。 (2)若相关蛋白质的核核片段是从细胞质中获取的mRNA,则④过程包括和诱发突变，以获得所需的目的基因。 (3)⑤过程中对核苷酸序列有严格要求的工具酶是,基因表达载体除了目的基因外,还应用、、等 (4)为了获得较多的受精卵用于研究,⑥过程的处理方案是利用实现.若⑥过程所得到的卵母细胞是从卵巢中 ① mRNA与DNA间的碱基互补配对氨基酸对应的密码子反（逆）转录限制酶启动子终止子标记基因促性腺激素超数排卵

预期的蛋白质功能 雌性动物雄性动物预期的蛋白质 ① ⑥ ⑦ 卵母细胞精子预期的蛋白质结构 ⑧ ⑨ ② 体外受精应有的氨基酸序列转基因动物 ③ 从动物细胞内获取相关蛋白质的核酸片段基因表达载体受体目的基因受精卵早期胚胎 ⑤ ⑩ ④ ⑥ 运载体获得的,则应在体外受精前,将卵母细胞人工培养到减数第二次分裂期,如果是从雌性动物的获取的卵母细胞,则不需再成熟培养.同时采集的精子必需进行处理,才能顺利完成受精作用. (5)在进行⑩操作技术时,首先应对代孕亲本注射进行处理;所选择的胚胎为或进行移植； (6) 培育转基因动物实施⑥的导入目的基因的方法是。 (7)将干扰素中的一个半胱氨酸修改为丝氨酸可提高干扰素的稳定性和利于保存，所用的工程技术是工程.该工程的流程图为中输卵管精子获能促性腺激素桑葚胚同步发情囊胚显微注射法蛋白质

例14我国首例绿色荧 光蛋白转基因克猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答： ⑴过程①必需用到的酶是。 ⑵重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有启动子、终止子和才能构成一个完整的基因表达载体。 ⑶过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时,采用最多也最有效的方法是。然后还要通过技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上。 ⑷为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射促性腺激素的方限制性核酸内切酶（限制酶）标记基因显微注射技术 DNA分子杂交

法,做处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到法,做处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到期即可通过显微操作将其细胞核去除。(5)早期胚胎的培养液成分较复杂,除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、葡萄糖、核苷酸等营养成分,以及等物质.其中的葡萄糖的作用即可又可调节；所加的血清的作用是. (6)绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程属于生殖。 (7)为了获得基因型相同克隆荧光猪,进行胚胎分割移植，应选择发育良好、形态正常的胚或囊胚。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将进行均等分割。 (8)动物细胞培养或早期胚胎培养需置于含95％空气加5％CO2的混合气体的培养箱中进行培养,其中CO2的作用是。 (9)动物细胞培养或早期胚胎培养所用的培养基添加的能源（碳源）物质是,而不是. 超数排卵减数分裂第二次分裂中期血清提供能量(碳源)物质渗透压补充合成培养基中所缺的营养物质无性桑椹内细胞团维持培养液的pH 葡萄糖蔗糖

例15下图表示利用 胚胎干细胞(ES细胞)所做的一系列研究,据图分析回答： (1) 过程Ⅰ将胚胎干细胞置于γ射线灭活的鼠胎儿成纤维细胞的饲养层上并加入动物血清、抗生素等物质。在此过程中，饲养层的作用是,加入抗生素是为了，这对于研究细胞分化和细胞凋亡的机理具有重要意义。 (2)过程Ⅱ将带有遗传标记的ES细胞注入早期胚胎的囊胚腔，通过组织化学染色,用于研究动物体器官形成的时间、发育过程以及影响的因素,这项研究利用了胚胎干细胞具有的的特点。在哺乳动物早期发育过程中,囊胚的后一个阶段是。 (3)过程Ⅲ中将目的基因转入胚胎干细胞前需构建重组DNA分子，其目抑制胚胎干细胞分化防止杂菌污染发育的全能性原肠胚使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用

(4)过程Ⅳ得到的小鼠畸胎瘤中里面全是软骨、神经管、横纹肌和骨骼等人类组织和器官.实验时,必须用X 射线照射去除（填器官名称）的小鼠，获得免疫缺陷小鼠，该过程研究的意义在于解决临床上供体器官不足和器官移植后免疫排斥等问题。胸腺

例16绿色荧光蛋白基因(GFP)被发现以来,一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白定位的理想标记.请根据图表回答下列问题。例16绿色荧光蛋白基因(GFP)被发现以来,一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白定位的理想标记.请根据图表回答下列问题。 (1)若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是TCGA,N端伸出的核苷酸的碱基序列是TGCA,则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶,再对进行切割。 (2)若对符合设计要求的重组质粒A进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开,请根据图表中的信息分析,若采用BamH1和Pst1酶切,可得到种DNA片段。 (3)检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上,可在荧光显微镜下观察GFP的表达,图中绿色荧光蛋白转基因克隆猪的转基因操作中的GFP既是也是。 (4)绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中涉及到多项现代生物技术,图中⑤⑥⑦过程属于技术,而⑨过程属于技术。例17有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下列为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题： HindⅢ和pstI Ti质粒 2 目的基因标记基因核移植胚胎移植

(1)若a、b分别是基因型为Hhrr、hhRr 两个烟草品种的花粉,且这两对基因分别位于两对同源染色体上.由于一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用,在光照强度大于800lx时都不能生长.要想从融合细胞的培养液中分离出基因型为HhRr的杂种细胞,较为简便的筛选方法是。 (2)若a、b表示两种植物体细胞，则由d细胞形成杂种植株的原理是,这种育种方法的优点是。 (3)若a、b分别为骨髓瘤细胞和效应B淋巴细胞，则d细胞特点是。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较,具有的特点。生产上一般不能通过直接培养浆细胞的方法生产单克隆抗体的主要原因是。 (4)下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。顺序是。大于800lx光照克服了远源杂交不亲和的障碍植物细胞的全能性既能无限繁殖，又能产生特定的抗体特异性强、灵敏度高、化学性质单一效应B细胞高度分化，不能增殖

例18下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：例18下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题： (1)图甲和图乙所示的过程中,都必须用到的动物细胞工程技术手段是。 (2)图甲中②过程常在诱导下完成,④过程与体外培养相比,其优点是。 (3)单克隆抗体能定向攻击癌细胞,主要是利用其。 (4)若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗？原因是。 (5)图乙过程的技术具有多种用途，但是不能 A、有选择地繁殖某一性别的家畜 B、繁殖家畜中的优良个体 C、用于保存物种 D、改变动物的核基因 (6)在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是 A、卵细胞大，便于操作 B、卵细胞含有的营养物质多 C、卵细胞的细胞质可使体细胞核全能性得到表达 D、重组细胞才具有全能性 动物细胞培养聚乙二醇(或灭活的病毒等) 不需特定的培养基,不需严格的外界环境条件特异性不是卵细胞细胞质的遗传物质也能控制某些性状 D C

左图右图例19左、右两图均是利用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤技术以制备出单克隆抗体。请观察上图两个方案,回答问题： (1)上面的图的方案不能达到预期效果,原因是没有将注入小鼠体内,无法获得。 (2) 单克隆抗体是指增殖产生的细胞群所分泌的化学性质单一、特异性强的抗体,其特点是特。 (3) 科学家用如左图所示来自的单克隆抗体治疗人体的肿瘤，往往会产生反应,人体将来自鼠的单克隆抗体当作予以清除. 右抗原产生单一抗体的B淋巴细胞一个杂交瘤细胞异性强、灵敏度高鼠排斥抗原

脾 (4) 制备单克隆抗体的B淋巴细胞一般从(器官)中采集。制备单克隆抗体需要两次筛选：第一次筛选出，第二次筛选出。 (5) 大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。你选择的方法: . (6) 右图中②为过程，常用作为诱导剂。该细胞继承了，因此不仅能分泌特异性抗体，还有在体外培养条件下本领。该方案的目的是. (7)培养杂交瘤细胞的培养基按物理性质属于，其中加入的血清的作用是;同时细胞培养需要气体环境是. (8)培养杂交瘤细胞的培养液中的作用是为细胞代谢提供碳源（能源）并。 (9)工作人员在培养杂交瘤细胞的培养液中添加一些青霉素的作用是防止。 (10)动物细胞工程的基础是. 杂交瘤细胞能够产生单克隆抗体的杂交瘤大量生产选①，小规模生产选② 细胞融合灭活病毒（或PEG）双亲细胞的遗传物质大量增殖制备单克隆抗体液体培养基补充合成培养基所缺乏的营养成分 95%空气+5%CO2 葡萄糖调节渗透压细菌感染动物的细胞培养

人参切块 愈伤组织单细胞或多细胞团细胞分离诱导悬浮培养细胞的培养物收集培养物的干粉提取人参皂苷例20人参是一种名贵中药材,其有效成分主要是人参皂苷. 利用细胞培养技术生产人参皂苷的大致流程如下;请回答：灭菌 (1)配制诱导愈伤组织的固体培养基,分装后要进行,接种前,要对人参根进行。消毒 (2)用于离体培养的根切块,叫做.培养几天后发现少数培养基被污染,若是有颜色的绒毛状菌落,属于, 污染;若是有光泽的黏液状菌落,属于污染。外植体真菌(霉菌) 细菌果胶 (3)用少量酶处理愈伤组织,获取单细胞或小细胞团,在液体培养基中进行悬浮培养,可有效提高人参皂苷合成量。 (4)人参皂苷易溶于水溶性(亲水性)有机溶液,从培养物干粉中提取人参皂苷宜选用方法,操作时应采用加热。萃取水浴

例21回答下列有关植物组织培养的问题。 (1)用于植物组织培养的植物材料称为__________。外植体 (2)组织培养中的细胞,从分化状态转变为未分化状态的过程称为________________。去分化(脱分化) (3)在再分化阶段所用培养基中, 含有植物激素X和植物激素Y,逐渐改变培养基中这两种植物激素的浓度比,来分化细胞群的变化情况如下图所示。据图指出两种激素的不同浓度比与形成芽、根、愈伤组织的关系：未分化细胞群经分裂形成愈伤组织 1)当植物激素X与植物激素Y的浓度比等于1时； 2)； 3)。当植物激素X与植物激素Y的浓度比大干1时,未分化细胞群分化形成芽当植物激素X与植物激素Y的浓度比小于1时,未分化细胞群分化形成根促进细胞 (4)若植物激素Y是生长素,在植物组织培养中其主要作用是; 则植物激素X的名称是。 (5)生产上用试管苗保留植物的优良性状,其原因是。细胞分裂素的生长(伸长)、分裂和分化组织培养形成试管苗的过程属于无性生殖，后代不发生性状分离

例21紫草素是紫草细胞的代谢产物,可作为生产治疗烫伤药物的原料。用组织培养技术可以在生物反应器中通过培养紫草细胞生产紫草素.下图记录了生物反应器中紫草细胞产量、紫草素产量随培养时间发生的变化。例21紫草素是紫草细胞的代谢产物,可作为生产治疗烫伤药物的原料。用组织培养技术可以在生物反应器中通过培养紫草细胞生产紫草素.下图记录了生物反应器中紫草细胞产量、紫草素产量随培养时间发生的变化。 (1)在生产前,需先加入紫草细胞作为反应器中的“种子”.这些“种子”是应用组织培养技术,将紫草叶肉细胞经过________而获得的.这项技术的理论基是。脱分化 (4)植物组织培养的用途中不正确的是细胞的全能性 (2)从图中可以看出:反应器中紫草细胞的生长呈现_______规律;影响紫草素产量的因素是_________ 和______ 。 D A.快速繁殖　　 B.生产新品种 C.生产生物碱 D.生产白细胞介素－2 S型增长细胞数量细胞所处的生长期 (3)在培养过程中,要不断通入无菌空气并进行搅拌的目的是______ 和保证氧气供应充足使细胞与培养液充分接触

动 物 细 胞 工 程