1 / 20

血红蛋白的凝胶过滤

实验五. 血红蛋白的凝胶过滤. 凝胶排阻层析 (gel exclusion chromatography). 分子筛层析 ( molecular sieve chromatography). 凝胶过滤 (gel filtration). Sephadex G 系列 以微生物产生的葡聚糖 Dextran 为原料 , 以环氧氯丙烷为交联剂 , 在碱性条件下交联而成的凝胶。. 葡聚糖凝胶系列 琼脂糖凝胶系列 聚丙烯酰胺凝胶系列. 分子筛凝胶是一种 不带电 的具有三维空间的 多孔网状结构 的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径 均匀一致 。. 葡聚糖. 混合物.

admon
Download Presentation

血红蛋白的凝胶过滤

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 实验五 血红蛋白的凝胶过滤

  2. 凝胶排阻层析 (gel exclusion chromatography) 分子筛层析 ( molecular sieve chromatography) 凝胶过滤 (gel filtration) Sephadex G 系列 以微生物产生的葡聚糖Dextran为原料,以环氧氯丙烷为交联剂,在碱性条件下交联而成的凝胶。 葡聚糖凝胶系列 琼脂糖凝胶系列 聚丙烯酰胺凝胶系列

  3. 分子筛凝胶是一种不带电的具有三维空间的多孔网状结构的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致。分子筛凝胶是一种不带电的具有三维空间的多孔网状结构的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致。 葡聚糖

  4. 混合物 流动相 流动相 层析柱 收集装置 流动相 样品用滴管小心滴加！！绝对不是图中所示直接倾倒！！！

  5. 不同分子大小的混合物在经过凝胶颗粒的时候......不同分子大小的混合物在经过凝胶颗粒的时候......

  6. 样品浓度 洗脱体积(Ve) 不同分子大小的混合物在经过凝胶颗粒的时候......

  7. 样品浓度 洗脱体积 凝胶过滤的应用 物质的分离纯化

  8. Ve=-b lgMW + c 洗脱体积 分子量 凝胶过滤的应用 分子量测定

  9. 凝胶过滤的应用 脱盐 • 为什么需要脱盐？ • 还有什么方法可以脱盐？ • 和其他方法相比凝胶过滤脱盐的优势和劣势是什么？

  10. 凝胶过滤的特点 根据分子量大小分离 条件温和 回收率高

  11. 本次实验原理 血红蛋白的凝胶过滤

  12. K3Fe(CN)6 FeSO4 O2 高铁血红蛋白 血红蛋白 还原型血红蛋白 氧合血红蛋白

  13. 20min 平衡 装柱注意事项 连续灌胶 层析柱垂直 不出截面 安装柱帽，检查是否通畅 先加1/4缓冲液 轻轻搅拌状态下倒入凝胶， 一次性连续灌胶至柱长四分之三。 灌胶 严防柱子脱水干裂 8-9drop/min 2-3cm缓冲液层保护 注意恒流泵的旋转方向

  14. 上样操作：调节好流速，平衡结束，加入滤纸片。待缓冲液面与胶面相齐，停止洗脱！滴加0.5cm高的还原层后，开始洗脱，至还原层液面与胶面相齐，滴加0.5cm高的缓冲液洗脱；再至液面与胶面相齐，停止洗脱！滴加0.5cm高的血样后，开始洗脱，至血样液面与胶面相齐，滴加0.5cm高的缓冲液洗脱至与胶面相齐后，再加0.5cm高的缓冲液洗脱至与胶面相齐后，则加2-3cm高的缓冲液，连上柱帽，连续洗脱。其间注意观察现象。上样操作：调节好流速，平衡结束，加入滤纸片。待缓冲液面与胶面相齐，停止洗脱！滴加0.5cm高的还原层后，开始洗脱，至还原层液面与胶面相齐，滴加0.5cm高的缓冲液洗脱；再至液面与胶面相齐，停止洗脱！滴加0.5cm高的血样后，开始洗脱，至血样液面与胶面相齐，滴加0.5cm高的缓冲液洗脱至与胶面相齐后，再加0.5cm高的缓冲液洗脱至与胶面相齐后，则加2-3cm高的缓冲液，连上柱帽，连续洗脱。其间注意观察现象。

  15. 还原型血红蛋白 氧合血红蛋白 硫酸亚铁 高铁血红蛋白

  16. 实验结束后保持层析柱洗脱状态即可 所有凝胶均回收,装凝胶的烧杯不用洗 凝胶时刻保存在液体环境中

  17. 附加思考题： 1、如何才能获得最佳实验结果呢？ 装柱？ 上样？ 流速？ 除了关键操作的到位，从技术的理论设计层面考虑有哪些因素是必须事先明确的？

  18. 2、分析筛层析的流动相选择需要考虑哪些因素？2、分析筛层析的流动相选择需要考虑哪些因素？ 根据你的考虑应该使用什么样的溶液？ 本次实验使用的是20mM的磷酸盐缓冲液， 你认为是否合适？

More Related