实验十三卵磷脂的提取及其组成鉴定

实验十三卵磷脂的提取及其组成鉴定 • 一、实验目的 • 学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。 • 巩固抽滤等基本操作。 • 主讲教师：

二、基本原理 • 卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中含量较高，约8％。可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到。卵磷脂可在碱性溶液中加热水解，得到甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱，可从水解液中检查出这些组分。其分离提取的流程如下：

完全水解 O O C H OH 2 R R C C HO C H O 2 1 + HO OH HO C H OH P C H C H N ( C H ) 2 2 2 3 3 OH－ OH OH OH 卵磷脂彻底水解的产物是什么？答：磷酸脂肪酸甘油胆碱

三、仪器和药品 • 仪器：研钵布氏漏斗蒸发皿棉花 • 药品：熟鸡蛋黄 20％NaOH溶液 10％Pb(AC)2 1％CuSO4溶液硫酸 95％乙醇氯仿丙酮碘化铋钾溶液

四、实验步骤 • 1．卵磷脂的提取（1）取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入10ml 95％乙醇研磨，再加入10ml 95％乙醇充分研磨，减压过滤(应盖满漏斗)，布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移入研钵中，再加10ml 95％乙醇研磨，减压过滤，滤干后，合并二次滤液，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发皿内。 • （2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物。 • （3）冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解。 • （4）在搅拌下慢慢加入15ml丙酮，即有卵磷脂析出， • 搅动使其尽量析出（溶液倒入回收瓶内）。

2．卵磷脂的水解及其组成鉴定 • （1）水解：取一支干燥大试管，加入提取的一半量的卵磷脂，并加入5ml 20％氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，并用玻棒加以搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在玻璃漏斗中用棉花过滤。滤液供下面检查用。 • （2）检查 • 脂肪酸的检查：取棉花上沉淀(滤饼)少许，加1滴20％氢氧化钠溶液与5ml水，用玻棒搅拌使其溶解，在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄清液，以硝酸酸化后加入10％醋酸铅2滴，观察溶液的变化 • 甘油的检查：取试管一支，加入1％硫酸铜溶液1ml(二十滴)，2滴 • 20％氢氧化钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成，再加入1ml水解液 • 振摇，观察所得结果。 • 胆碱的检查：取水解液1ml，滴加硫酸使其酸化（以pH试纸试之）加入1滴克劳特试剂（碘化铋钾溶液），有砖红色沉淀生成。

[注释] • 1. 第一次减压过滤，因刚析出的醇中不溶物很细以及有少许水份， • 滤出物浑浊，放置后继续有沉淀析出，需合并滤液后，以原布氏 • 漏斗（不换滤纸）反复滤清。 • 2. 蒸去乙醇时，可能最后有少许水份，需搅动加速蒸发，务使蒸干。 • 3. 黄色油状物干后，蒸发皿壁上沾的油状物一定要使其溶于氯仿中，否则会带入杂质。 • 4. 搅动时，析出的卵磷脂可粘附于玻棒上，成团状。 • 5. 加热时，会促使胆碱分解，产生三甲胺的臭味。 • 6. 加硝酸酸化，脂肪酸析出，溶液变浑浊，加醋酸铅有脂肪酸铅盐生成，浑浊进一步增强。 • 7. 生成的氢氧化铜沉淀．因水解液中的甘油与之反应，生成甘油铜，沉淀逐步溶解。 • 8. 克劳特试剂为含有KI－BiI3复盐的有色溶液，与含氮碱性化合物如胆碱生成砖红色的沉淀。

思考题： • 1．蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理？ • 2．卵磷脂可以皂化，从结构分析应作 • 何解释？ • 3．卵磷脂可作乳化剂，这是为什么？ • 4．为什么实验中要进行减压过滤？ • 操作时应注意哪些地方？

R1-COO-CH2 R2-COO-C—H CH2 —O—P—O—R OH O +- + - R= —CH2CH2-N(CH3)3 OH 为：卵磷脂 HO-CH2CH2-N(CH3)3 OH 胆碱 Question 5卵磷脂彻底水解的产物是什么？ R1 常为饱和脂肪酸如C16，C18 1 2* 3 R2 常为不饱和脂肪酸如花生四烯酸

CO2-CH2 CO2-CH CH2O O + -P-O-CH2CH2-N(CH3)3 O 非极性端疏水端，亲油端 H-OH 由于甘油磷脂分子中磷酸部分还有一个可以电离的H+，而胆碱或胆胺部分又有碱性基团，故甘油磷脂以偶极离子的形式存在。极性端疏油端，亲水端 H OH- - 磷脂分子中同时具有疏水基和亲水基。正是由于这种特点，使得磷脂类化合物在细胞中起着重要的生理作用。

实验十三 卵磷脂的提取及其 组成鉴定