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原位杂交实验方法

原位杂交实验方法. mRNA 原位杂交前实验准备. 1 ，无 RNA 酶水的处理 2 ，无 RNA 酶载玻片的处理 3 ，标本的防 RNA 酶的固定 4 ，探针的稀释和保存 5 ， DNA 探针需变性. 原位杂交溶液的配制. 1 ，预杂交液和杂交液的配制 2 ， 20Xssc ， 2Xssc ， 0.2Xssc 缓冲液的配制 3 ， 0.1mol PBS 缓冲液的配制 4 ， 0.1mol 枸橼酸缓冲液的配制 5 ， 0.1mol TBS 缓冲液的配制 6 ，复合消化液的配制 7 ，组织细胞打孔液的配制 8 ，杂交漂洗液 9 ，过氧化氢封闭液.

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Presentation Transcript

  1. 原位杂交实验方法

  2. mRNA 原位杂交前实验准备 • 1，无RNA酶水的处理 • 2，无RNA酶载玻片的处理 • 3，标本的防RNA酶的固定 • 4，探针的稀释和保存 • 5，DNA探针需变性

  3. 原位杂交溶液的配制 • 1，预杂交液和杂交液的配制 • 2，20Xssc， 2Xssc， 0.2Xssc缓冲液的配制 • 3，0.1mol PBS缓冲液的配制 • 4，0.1mol 枸橼酸缓冲液的配制 • 5，0.1mol TBS缓冲液的配制 • 6，复合消化液的配制 • 7，组织细胞打孔液的配制 • 8，杂交漂洗液 • 9，过氧化氢封闭液

  4. 探针设计方案 • 1，探针名称 ： • 2，适用种属： • 3，标记方式：3ˋDIG 5ˋFAM • 4，模板序列： • 5，探针序列：

  5. 探针杂交原理 • 1，组织细胞的通透 • 2，探针长度 • 3 , 探针浓度和杂交时间 • 4，杂交中的Tm值和杂交温度 • 5，杂交严格度 • 6，预杂交原理 • 7，杂交后处理

  6. A-石蜡切片mRNA原位杂交步骤 • 一，过氧化物酶显色系统 • 二，碱性磷酸酶显色系统 • 三，荧光显色方法

  7. B-冰冻切片mRNA原位杂交步骤 • 一，过氧化物酶显色系统 • 二，碱性磷酸酶显色系统 • 三，荧光显色方法

  8. C-细胞爬片或涂片mRNA原位杂交步骤 • 一，过氧化物酶显色系统 • 二，碱性磷酸酶显色系统 • 三，荧光显色方法

  9. 附录 • 1，DAB的配制和使用方法 • 2 NBT/BCIP的配制和使用方法 • 3，苏木素的配制和使用方法 • 4，核固红的配制和使用方法

  10. 流式细胞仪 • D-悬浮细胞的mRNA原位杂交细胞流式细胞仪步骤

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