INFORME Endonucleasas de Restricción Utilizadas en Biotecnología STEFANI BRILLY AREVALO NAVARRO

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL INFORME: Endonucleasas de Restricción Utilizadas en Biotecnología Integrantes: Arévalo Navarro, Stefani Brilly Docente: Dr. Hebert Hernán Soto Gonzales Ilo, Moquegua, Perú 2022

2. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental INFORME: Endonucleasas de Restricción Utilizadas en Biotecnología Biotecnología Asesor: Dr. Hebert Hernán Soto Gonzales Responsables: Arevalo Navarro, Stefani Brilly VII Ciclo Ilo, Moquegua, Perú 2022

3. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL INTRODUCCION Una enzima de restricción es una proteína aislada a partir de bacterias que cortan secuencias de ADN en sitios específicos de la secuencia, lo que produce fragmentos de ADN con una secuencia conocida en cada extremo. El uso de enzimas de restricción es sumamente importante para determinados métodos de laboratorio, tales como la tecnología de ADN recombinante y la modificación genética. (Genome.gov, 2022) En la actualidad el análisis de estas enzimas de restricción es de fácil manejo, ya que existen diferentes programas bioinformáticos, siendo una de estas BioLabs, que permiten manejar, editar y analizar las enzimas elegidas, permitiéndonos conocer a profundidad cada una de ellas. 1.OBJETIVOS 1.1. OBJETIVO GENERAL - Realizar un levantamiento de 30 endonucleasas de restricción 1.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS - Conocer que es una enzima de restricción - Escoger 30 enzimas endonucleasas de restricción - Analizar las características de cada enzima endonucleasas de restricción - Analizar las funciones de cada enzima endonucleasas de restricción 2.MARCO TEÓRICO - ¿QUÉ SON LAS ENZIMAS? Las enzimas son los directores de orquestra de nuestras células (y de las de los otros seres vivos), pues se encargan de ordenar, dirigir y estimular a todos los otros componentes celulares para que desarrollen su parte en la “obra”.

4. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Las enzimas son moléculas intracelulares que activan cualquier ruta metabólica de la fisiología de un organismo. Es decir, todas aquellas reacciones bioquímicas para que la célula (y el conjunto de células) se mantenga viva, obtenga energía, crezca, se divida y se comunique con el entorno son posibles gracias a estas moléculas activadoras. En este sentido, las enzimas son proteínas que actúan como catalizadores biológicos, cosa que significa, básicamente, que aceleran (para que sucedan rápidamente) y dirigen (para que sucedan en el orden correcto) todas aquellas reacciones de conversión de un metabolito a otro, que es en lo que se basa el metabolismo. Sin estas enzimas, las reacciones metabólicas serían demasiado lentas (y algunas ni siquiera podrían existir) y/o no ocurrirían en el orden adecuado. Intentar que alguna reacción metabólica suceda sin acción de la enzima que la controla sería como intentar prender un petardo sin encender su mecha con un mechero. En este sentido, el mechero sería la enzima. (Prieto, 2020). - ¿CÓMO FUNCIONAN LAS ENZIMAS? Una enzima es una proteína, lo que significa que es, en esencia, una sucesión de aminoácidos. Existen 20 aminoácidos distintos y estos pueden unirse con combinaciones increíblemente variadas para dar lugar a “cadenas”. En función de cómo sea la serie de aminoácidos, la enzima adquirirá una estructura tridimensional concreta, cosa que, junto con la clase de aminoácidos que contenga, determinará a qué metabolitos puede unirse. En este sentido, las enzimas disponen de lo que se conoce como zona de unión, una región de unos pocos aminoácidos con afinidad por una molécula concreta, que es el sustrato de la reacción bioquímica que estimula. Cada enzima tiene una zona de unión diferente, por lo que cada una atraerá a un sustrato (o metabolito inicial) concreto. IMAGEN 1. Enzimas Una vez el sustrato se ha enganchado a la zona de unión, como este está incluido dentro de una región mayor conocida como sitio activo, empiezan a estimularse las transformaciones químicas. En primer lugar, la enzima modifica su estructura tridimensional para englobar perfectamente el sustrato en su interior, formando lo que se conoce como complejo enzima/sustrato.

5. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Una vez se ha formado, la enzima realiza su acción catalítica (después veremos cuáles pueden ser) y, consecuentemente, las propiedades químicas del metabolito que se ha unido cambian. Cuando la molécula obtenida es diferente a la inicial (el sustrato), se dice que se ha formado el complejo enzima/productos. Estos productos, a pesar de que proceden de una transformación química del sustrato, ya no tienen las mismas propiedades que este, por lo que no tienen la misma afinidad por la zona de unión de la enzima. Esto provoca que los productos salgan de la enzima, listos para realizar su función en la fisiología de la célula o preparados para funcionar como sustrato de otra enzima. - CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS 1.Oxidorreductasas Las oxidorreductasas son enzimas que estimulan las reacciones de oxidación y reducción, conocidas “popularmente” como reacciones redox. En este sentido, las oxidorreductasas son proteínas que, en una reacción química, permiten la transferencia de electrones o de hidrógeno de un sustrato a otro. Pero, ¿qué es una reacción redox? Una reacción de oxidación y reducción es una transformación química en la que un agente oxidante y un agente reductor se alteran mutuamente su composición química. Y es que un agente oxidante es una molécula con la capacidad de sustraer electrones a otra sustancia química conocida como agente reductor. (Prieto, 2020) 2.Hidrolasas

6. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Las hidrolasas son enzimas que, a grandes rasgos, tienen la función de romper enlaces entre moléculas mediante un proceso de hidrólisis en el cual, como podemos deducir por su nombre, está involucrada el agua. En este sentido, partimos de una unión de dos moléculas (A y B). La hidrolasa, en presencia de agua, es capaz de romper esta unión y obtener las dos moléculas por separado: una se queda con un átomo de hidrógeno y la otra con un grupo hidroxilo (OH). Estas enzimas son imprescindibles en el metabolismo, pues permiten la degradación de moléculas complejas en otras de más sencilla asimilables para nuestras células. Existen muchos ejemplos. Para enumerar algunos nos quedamos con las lactasas (rompen los enlaces de la lactosa para dar lugar a glucosa y galactosa), las lipasas (degradan los lípidos complejos en grasas más simples), las nucleotidasas (degradan los nucleótidos de los ácidos nucleicos), las peptidasas (degradan las proteínas en aminoácidos), etc. (Prieto, 2020) 3.Transferasas Las transferasas son enzimas que, como su propio nombre indica, estimulan la transferencia de grupos químicos entre moléculas. Son distintas a las oxidorreductasas en el sentido que estas transfieren cualquier grupo químico excepto el hidrógeno. Un ejemplo son los grupos fosfato. Y a diferencia de las hidrolasas, las transferasas no forman parte del metabolismo catabólico (degradación de moléculas complejas para conseguir simples), sino del anabólico, que consiste en gastar energía para sintetizar, a partir de moléculas simples, moléculas más complejas. (Prieto, 2020) 4.Ligasas Las ligasas son enzimas que estimulan la formación de enlaces covalentes entre moléculas, los cuales son el “pegamento” más fuerte de la biología. Estos enlaces covalentes se establecen entre dos átomos, los cuales, al unirse, pasan a compartir electrones. Esto hace que sean uniones muy resistentes y especialmente importantes, en el ámbito celular, para establecer las uniones entre los nucleótidos. Estos nucleótidos son cada una de las piezas que conforman nuestro ADN. De hecho, el material genético es “simplemente” una sucesión de moléculas de este tipo.

7. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL En este sentido, una de las ligasas más conocidas es la DNA ligasa, una enzima que establece los enlaces fosfodiéster (un tipo de enlace covalente) entre los distintos nucleótidos, impidiendo que haya roturas en la cadena de ADN, cosa que tendría consecuencias catastróficas para la célula. (Prieto, 2020) 5.Liasas Las liasas son enzimas muy similares a las hidrolasas en el sentido que su función es la de romper enlaces químicos entre moléculas y que, por lo tanto, son pieza fundamental de las reacciones catabólicas, pero en este caso, las liasas no requieren de la presencia de agua. Además, no solo son capaces de romper enlaces, sino de formarlos. En este sentido, las liasas son enzimas que permiten estimular reacciones químicas reversibles, por lo que de un sustrato complejo se puede pasar a uno más simple rompiendo sus enlaces, pero también se puede pasar de este sustrato sencillo a otra vez el complejo volviendo a establecer su unión. (Prieto, 2020) 6.Isomerasas Las isomerasas son unas enzimas que ni rompen enlaces ni los forman y que tampoco estimulan la transferencia de grupos químicos entre moléculas. En este sentido, las isomerasas son proteínas cuya acción metabólica se basa en alterar la estructura química de un sustrato. Cambiando su forma (sin añadir grupos químicos ni modificando sus enlaces), se puede conseguir que una misma molécula desempeñe una función totalmente distinta. Por lo tanto, las isomerasas son enzimas que estimulan la obtención de isómeros, es decir, nuevas conformaciones estructurales de una molécula que, gracias a esta modificación de su estructura tridimensional, se comportan de forma diferente. (Prieto, 2020) - ¿CÓMO SE CORTA Y PEGA EL ADN? En la clonación de ADN, los investigadores hacen muchas copias de un fragmento de ADN específico, como un gen. En muchos casos, la clonación consiste

8. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL en introducir el gen en un fragmento de ADN circular llamado plásmido que puede copiarse en bacterias. ¿Cómo se pueden unir fragmentos de ADN de diferentes fuentes (como un gen humano y un plásmido bacteriano) para hacer una sola molécula de ADN? Un método común utiliza enzimas de restricción y ADN ligasa. Una enzima de restricción es una enzima que corta ADN y que reconoce sitios específicos en él. Muchas enzimas de restricción hacen cortes escalonados en o cerca de su sitio de reconocimiento y producen extremos sobresalientes de cadena sencilla. Si dos moléculas de ADN tienen extremos complementarios, la enzima ADN ligasa puede unirlos. El ADN ligasa sella el espacio entre las moléculas para formar un solo fragmento de ADN. Las enzimas de restricción y el ADN ligasa se suelen usar para insertar genes y otros fragmentos de ADN en plásmidos durante la clonación de ADN. (Khan Academy, 2022) - ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Las enzimas de restricción son una herramienta primordial para la ejecución de diversos ensayos útiles en investigación clínica, desde la determinación de polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (restriction fragment length polymorphism, RFLP), así como en la construcción de vectores con ADN recombinante y clonación de secuencias de ADN provenientes de humano, virus, bacterias y demás microorganismos de interés para la generación de conocimiento o para su aplicación en el área de la medicina. Entre las enzimas que modifican los ácidos nucleicos se encuentran las nucleasas, es decir, aquellas capaces de cortar los enlaces fosfodiéster que unen los nucleótidos de una cadena de ácidos nucleicos. Las nucleasas se denominan endonucleasas si son capaces de cortar el enlace fosfodiéster en nucleótidos localizados dentro de la cadena del ácido nucleico, y reciben el nombre de exonucleasas si cortan los enlaces fosfodiéster de los nucleótidos en los extremos de las cadenas. Así, existen 3’exonucleasas las que escinden enlaces en el extremo 3’ de la cadena, y 5’exonucleasas que rompen enlaces fosfodiéster en el extremo 5’ de la cadena. Las enzimas de restricción presentan actividad endonucleasa, son de origen bacteriano y cortan los enlaces fosfodiéster del ADN en una secuencia específica

9. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL denominada secuencia diana. El uso de estas enzimas como herramienta biotecnológica surgió de la necesidad de cortar las largas cadenas de ADN genómico para manipularse y analizarse en fragmentos más pequeños. El empleo de las enzimas de restricción y otras enzimas que modifican ácidos nucleicos, como la ligasa, permitió desarrollar la metodología del ADN recombinante. Estas endonucleasas se denominan enzimas de restricción debido a que restringen la permanencia de un ADN exógeno en la célula bacteriana que produce dicha enzima. Las enzimas de restricción empleadas con más frecuencia en la metodología del ADN recombinante suelen reconocer una secuencia única de 4 a 8 nucleótidos, donde realizan el corte. (Mhmedical, 2022) - ORIGEN DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Las endonucleasas de restricción forman parte de la maquinaria con la que cuenta la bacteria para defenderse de infecciones virales. El ADN de la bacteria que produce la enzima de restricción no se ve afectado por su propia enzima, ya que las bacterias metilan determinadas secuencias a su propio ADN para diferenciarlo del ADN viral por medio de una enzima metiltransferasa en bases específicas, que generalmente son las reconocidas por sus propias enzimas de restricción. (Mhmedical, 2022) - CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN De acuerdo a su función las enzimas de restricción se han clasificado en tipo I, II, III. •Tipo I Las enzimas que pertenecen a este grupo reconocen una secuencia específica de nucleótidos y hacen un corte aleatorio en la doble cadena en cualquier secuencia del ADN y a una distancia aproximada de 1000 pb del sitio de corte; además tienen

10. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL la función de metilar su propio genoma. Estas enzimas necesitan adenosín trifosfato (ATP) para moverse a lo largo de la molécula de ADN desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio de corte. (Mhmedical, 2022) •Tipo II Son enzimas que reconocen secuencias específicas y hacen el corte de la doble cadena de ADN en el mismo sitio de reconocimiento. Estas enzimas sólo tienen actividad de restricción no de metilación y son las utilizadas en ingeniería genética, ya que cortan el ADN en secuencias específicas reconocidas. Requieren Mg2+ como cofactor y no requieren de ADN. Las secuencias dereconocimiento de estas enzimas son palindrómicas, es decir, son secuencias que se leen igual en las dos cadenas de ADN. (Mhmedical, 2022) •Tipo III Estas enzimas reconocen una secuencia específica y cortan el ADN de doble cadena fuera de la secuencia diana (aproximadamente de 25 a 27 pares de bases corriente abajo del sitio de reconocimiento). Tienen, al igual de las de tipo I, actividad de metilasa y requieren de ATP para desplazarse a lo largo de la molécula de ADN. (Mhmedical, 2022) ✓Características de las enzimas de restricción tipo III - APLICACIONES DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Las enzimas de restricción son una herramienta básica en clonación e ingeniería genética; se utilizan, entre otros fines, para hacer mapas de restricción de plásmidos o IMAGEN 2. Características de las enzimas de restricción tipo III genomas. Un mapa de restricción se define como la serie de fragmentos que se generan por el corte con determinada(s) enzima(s), específicos en tamaño (y secuencia) y que permiten emplearlos para la caracterización de dicho ADN. Esta herramienta es sumamente importante para la clonación con vectores. También, en estudios de determinación de polimorfismos, como la técnica de RFLP, según se presente o no el sitio de corte de una enzima de restricción, se puede establecer la variante alélica, ya que el peso molecular del fragmento o fragmentos de ADN generado(s) permitirá la

11. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL caracterización de la secuencia. Asimismo, la construcción de moléculas de ADN recombinante implica el obvio empleo de las enzimas de restricción para definir y delimitar las secuencias que se insertarán en el constructo recombinante. De la misma manera, el corte de ADN genómico que suele ser, según el organismo, del orden de millones de pb, es más manipulable cuando es digerido por estas enzimas en fragmentos más pequeños. Esto permite un manejo adecuados sin el riesgo de degradación y manipulación lación para la construcción de bibliotecas genómicas, que se discuten en el capítulo de vectores de clonación. (Mhmedical, 2022) - TIPOS DE CORTES PRODUCIDOS POR LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Los cortes que realizan las enzimas de restricción sobre la cadena de ADN pueden generar dos estructuras o formas: cohesivas o romas. Los cortes cohesivos, también llamados pegajosos, se generan porque la enzima corta en cada cadena de ADN entre nucleótidos localizados en posiciones diferentes respecto al eje de simetría de la secuencia de diana. Estos cortes generan extremos monocatenarios en un segmento de 3 a 5 bases de longitud, por lo que en esta fracción la falta de cadena complementaria facilita su interacción con otro fragmento en monocadena con secuencia complementaria. Los extremos así generados propician la unión específica entre segmentos diferentes de ADN, pero cortados por la misma enzima, lo que origina condiciones idóneas de unión específica para la producción de ADN recombinante. Los extremos romos se generan porque la enzima corta en ambas cadenas de ADN sobre un mismo eje, por lo que dichos extremos son de doble cadena, y la unión entre fragmentos de ADN con extremos romos es más inespecífica, ya que no depende de la complementariedad de regiones monocadena. - FAMILIAS DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Una familia de enzimas de restricción está formada por aquellas que no necesariamente reconocen la misma secuencia diana, pero producen extremos cohesivos similares. Un ejemplo de familia es: BamHI y BclII, que reconocen las

12. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL secuencias diana 5’GGATCC3’ y 5’AGATCT3’, respectivamente, pero que generan extremos cohesivos idénticos: 5’GATC3’. Esta característica favorece que dos fragmentos cortados con estas enzimas puedan recombinarse de manera específica gracias a la complementariedad de sus bases en los extremos cohesivos generados. (Mhmedical, 2022) - FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Entre los factores que más afectan la actividad de las enzimas de restricción se encuentran: •La pureza biológica del ADN. Contaminación de la muestra con otros ADN impide el buen funcionamiento de las enzimas. •Los contaminantes como detergentes y estabilizadores (docedil sulfato de sodio –SDS–, ácido etilendiaminotetraacético –EDTA–), ya que concentraciones elevadas de sales y detergentes inhiben la actividad enzimática. •Modificaciones en el pH y temperatura de incubación. Variaciones leves en estos parámetros inhiben enormemente la actividad de las enzimas.

13. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL •El grado de metilación del ADN, ya que algunas enzimas son inhibidas por metilación en ciertas secuencias. (Mhmedical, 2022) - CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y CONSERVACIÓN DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Las enzimas de restricción, al igual que muchas otras proteínas, pueden disminuir su vida media y en consecuencia su actividad, al ser conservadas y manejadas de forma inadecuada fuera de su rango ideal de temperatura; deben conservarse a -20ºC, así que para evitar su congelamiento y su consecuente pérdida de actividad son diluidas en un volumen determinado de glicerol. Para usarlas se requiere un contenedor que asegure la menor variación de temperatura posible. (Mhmedical, 2022) - EFICIENCIA EN EL USO DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Las hojas de instrucciones o insertos que facilita el proveedor incluyen las características y descripción de las condiciones óptimas de actividad de las enzimas de restricción disponibles comercialmente. Dichas condiciones están ajustadas para el volumen de reacción requerido, de acuerdo a la tecnología que se requiere aplicar. Se debe tener en cuenta la temperatura óptima de acción, presentación comercial de la enzima (unidades de enzima por microlitro), tiempo de incubación, así como los posibles requerimientos de aditivos, como albúmina, ATP, etcétera. (Mhmedical, 2022) 3.MATERIALES Y MÉTODOS 3.1.MATERIALES - Laptop - Página BioLabs - Internet

14. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL 3.2.MÉTODOS Este es el método para tener las 30 endonucleasas aleatoriamente de la página BioLabs: - Buscamos en Google la página BioLabs. Entramos a la página BioLabs. Vamos a Applications & Products, luego a Product Categories y al final a Restriction Endonucleases. Una vez dentro le damos clic a Product Listing. - - -

15. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Bajamos y encontramos las Endonucleasas, donde escogeremos 30 para los OBJETIVO: OBJETIVO GENERAL: OBJETIVO ESPECIFICO:

16. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL DESARROLLO Restriction Endonucleas es N ° Código Información

17. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen Acc65I clonado de Acinetobacter calcoaceticus 65 (SK Degtyarev). Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: 1 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción: A, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN de pBC4 en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37°C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl 2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 10 % NEBuffer™ r2.1: 75 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 25 % Compatibilidad de diluyente •Diluyente A Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 100 mM DTT Acc65I

18. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml BSA Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor 65°C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : Bloqueada por algunas combinaciones de superposición Metilación de CpG: Bloqueada por algunas combinaciones de superposición Isosquizómeros Asp718I KpnI KpnI-HF PRODUCTOS RELACIONADOS NOTAS DEL PRODUCTOS 1.Acc65I es un neoesquizómero de KpnI. 2.Puede exhibir actividad estelar en NEBuffer 2.1. 3.Bloqueado por algunas combinaciones de superposición de dcm y algunas combinaciones de superposición de metilación de CpG. Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen ApeKI de Aeropyrum pernix K1 (ATCC 700893). Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción: A, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción ApeKI 2

19. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 μg de ADN λ en 1 hora a 75 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 75°C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl 2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 25 % NEBuffer™ r2.1: 50 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 10 % Compatibilidad de diluyente Diluyente B Búfer de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 300 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 500 µg/ml BSA 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor No Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: Bloqueada por superposición

20. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Isosquizómeros TseI Actividad a temperatura @37°C: 10% PRODUCTOS RELACIONADOS NOTAS DEL PRODUCTOS 1.ApeKI es un isosquizómero de TseI. 2.ApeKI es una enzima de restricción altamente termoestable que puede sobrevivir a temperaturas de hasta 95°C. A esa temperatura, la vida media de la enzima es de 20 minutos. 3.Para las enzimas que no se pueden inactivar con calor, recomendamos usar una columna para la limpieza (como el kit de limpieza de ADN y PCR Monarch® ) o ejecutar la reacción en un gel de agarosa y luego extraer el ADN (recomendamos el kit de extracción de gel Monarch ) , o realizando una extracción con fenol/cloroformo. 4.Bloqueado por metilación de CpG superpuesta. Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen AvrII de Anabaena variabilis UW (E. Rosenvold). Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: AvrII 3 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción: A, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO Definición de unidad

21. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ (digerido con HindIII) en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl. Condiciones de reacción 1X Tampón rCutSmart™ Incubar a 37°C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 100 % NEBuffer™ r2.1: 50 % NEBuffer™ r3.1: 50 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad de diluyente •Diluyente B • Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 300 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 500 µg/ml Albúmina recombinante Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor No Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: No sensible Isosquizómeros AspA2I BlnI XmaJI PRODUCTOS RELACIONADOS

22. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL NOTAS DEL PRODUCTOS 1.Se escinde para producir una extensión CTAG 5' que se puede ligar de manera eficiente a fragmentos de ADN generados por NheI, SpeI o XbaI. 2.Para las enzimas que no se pueden inactivar con calor, recomendamos usar una columna para la limpieza (como el Monarch® PCR & DNA Cleanup Kit ), o ejecutar la reacción en un gel de agarosa y luego extraer el ADN (recomendamos la extracción en gel Monarch ). Kit ), o realizando una extracción con fenol/cloroformo. 3.No es sensible a la metilación de CpG, dcm o dam. Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen BaeGI clonado de Bacillus aestuarii GG790 (X. Pan) Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: BaeGI 4 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 μg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37°C

23. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl 2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 75 % NEBuffer™ r2.1: 75 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 25 % Compatibilidad de diluyente •Diluyente A Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml BSA Glicerol al 50 % DTT 1 mM pH 7,4 a 37 °C Inactivación de calor 80°C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: No sensible Isosquizómeros BseSI BstSLI PRODUCTOS RELACIONADOS NOTAS DEL PRODUCTOS 1.BaeGI es un isosquizómero de Bme1580I. 2.No es sensible a la metilación de CpG, dcm o dam.

24. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL BanII Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen BanII clonado de Bacillus aneurinolyticus (IAM 1077) Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: 5 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un volumen de reacción total de 50 µl. Condiciones de reacción 1X Tampón rCutSmart™ Incubar a 37°C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 100 % NEBuffer™ r2.1: 100 % NEBuffer™ r3.1: 50 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad de diluyente •Diluyente A Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml BSA Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C

25. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Inactivación de calor 80°C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: No sensible Isosquizómeros Eco24I EcoT38I FriOI HgiJII+ PRODUCTOS RELACIONADOS NOTAS DEL PRODUCTOS 1.No es sensible a la metilación de CpG, dcm o dam. 2.la actividad estelar puede resultar de una digestión prolongada. Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen BceAI clonado de Bacillus cereus 1315 (C. Nkenfou) Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: BceAI 6 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO Definición de unidad

26. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN de pBR322 en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37°C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl 2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 100 % NEBuffer™ r2.1: 100 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad de diluyente •Diluyente A Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml BSA Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor 65°C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: Bloqueada Isosquizómeros BcefI+ PRODUCTOS RELACIONADOS

27. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL NOTAS DEL PRODUCTOS 1.Puede exhibir actividad estelar en NEBuffer 1.1, 2.1 y CutSmart Buffers. 2.Bloqueado por metilación de CpG. 3.la actividad estelar puede resultar de una digestión prolongada, una alta concentración de enzimas o una concentración de glicerol >5% Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen BcoDI clonado de Bacteroides coprocola DSM 17136. Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: BcoDI 7 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 μg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X Tampón rCutSmart™ Incubar a 37°C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 50 % NEBuffer™ r2.1: 75 % NEBuffer™ r3.1: 75 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad de diluyente •Diluyente B

28. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM 200 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml BSA 50 % Glicerol pH 7,4 a 37 °C Inactivación de calor No Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: Deteriorada por algunas combinaciones de superposición Isosquizómeros Alw26I BsmAI BstMAI PRODUCTOS RELACIONADOS NOTAS DEL PRODUCTOS 1.BcoDI es un isosquizómero de BsmAI. 2.Para las enzimas que no se pueden inactivar con calor, recomendamos usar una columna para la limpieza (como el kit de limpieza de ADN y PCR Monarch® ) o ejecutar la reacción en un gel de agarosa y luego extraer el ADN (recomendamos el kit de extracción de gel Monarch ) , o realizando una extracción con fenol/cloroformo. 3.Deteriorado por algunas combinaciones de metilación de CpG superpuestas.

29. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL BCLI Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen BclI de Bacillus caldolyticus (A. Atkinson). Reactivos suministrados Lossiguientes reactivos se suministran con este producto: 8 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para digerir 1 µg de ADN λ ( dam - ) en 1 hora a 50°C en un volumen de reacción total de 50 µl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 50°C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl 2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 50 % NEBuffer™ r2.1: 100 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 75 % Compatibilidad de diluyente •Diluyente A • Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml BSA Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C

30. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Inactivación de calor No Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : Metilación de dcm bloqueada : No sensible Metilación de CpG: No sensible Isosquizómeros BclI-HF FbaI Ksp22I Actividad a temperatura @37°C: 50% PRODUCTOS RELACIONADOS NOTAS DEL PRODUCTOS 1.Se escinde para dejar una extensión GATC de 5' que se puede ligar de manera eficiente a los fragmentos de ADN generados por BamHI, BglII, MboI, Sau3AI y BstYI. 2.Esta enzima está bloqueada por la metilación de la presa. Se puede encontrar más información en Dam-Dcm y CpG Metilación. 3.Para las enzimas que no se pueden inactivar con calor, recomendamos usar una columna para la limpieza (como el kit de limpieza de ADN y PCR Monarch® ) o ejecutar la reacción en un gel de agarosa y luego extraer el ADN (recomendamos el kit de extracción de gel Monarch ) , o realizando una extracción con fenol/cloroformo. Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen BglII de Bacillus globigii (ATCC 49760). Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: BglII 9

31. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de BglII requerida para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un volumen de reacción total de 50 µl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37°C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl 2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 10 % NEBuffer™ r2.1: 10 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: <10 % Compatibilidad de diluyente •Diluyente A Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml BSA Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor

32. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL No Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: No sensible PRODUCTOS RELACIONADOS NOTAS DEL PRODUCTOS 1.No es sensible a la metilación de CpG, dcm o dam. Fuente del producto Una cepa de E. Coli que porta el gen Bsp1286I clonado de Bacillus sphaericus (IAM 1286) Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: Bsp128 6I 1 0 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en 50 µl de tampón de reacción. Condiciones de reacción 1X Tampón rCutSmart™ Incubar a 37°C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM 100 µg/ml Albúmina recombinante

33. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 25 % NEBuffer™ r2.1: 25 % NEBuffer™ r3.1: 25 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad de diluyente Diluyente A Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 400 µg/ml Albúmina recombinante Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor 65°C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: No sensible Isosquizómeros MhlI SduI PRODUCTOS RELACIONADOS NOTAS DEL PRODUCTOS 2.Bsp1286I reconoce seis secuencias distintas, GGGCCC, GAGCCC (complemento GGGCTC), GTGCCC (complemento GGGCAC), GAGCAC, GTGCAC y GAGCTC (complemento GTGCTC).

34. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL 3.No sensible a dam, dcm o metilación de CpG de mamíferos. 4.la actividad estelar puede resultar de una concentración de glicerol >5% Las enzimas de restricción de alta fidelidad (HF) tienen una actividad del 100 % en el tampón rCutSmart; la simplicidad de un solo búfer significa un procesamiento de muestras más sencillo y optimizado. Las enzimas HF también exhiben una actividad estelar drásticamente reducida. Todas las enzimas HF están calificadas para Time-Saver y, por lo tanto, pueden cortar el ADN del sustrato en 5-15 con la flexibilidad de digerir durante la noche sin degradarse a ADN. Diseñadas teniendo en cuenta el rendimiento, las enzimas de restricción HF son completamente activas en una gama más amplia de condiciones, lo que minimiza los productos fuera del objetivo y ofrece flexibilidad en el diseño experimental. Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen BclI clonado y modificado de Bacillus caldolyticus (A. Atkinson). Reactivos suministrados BclI- HF 1 1 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Productos de endonucleasas de restricción de alta fidelidad (HF®), Endonucleasas de restricción B, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo. Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción. PROPIEDADES Y USO

35. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Bpu10I Fuente del producto Dos cepas de E. coli que portan las subunidades clonadas de Bpu10I de Bacillus pumilus 10 (SK Degtyarev) Reactivos suministrados 1 2 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones:Digestión de enzimas de restricción. PROPIEDADES Y USO

36. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL PI-SceI 1 3 La inteína que codifica PI-SceI está presente en el gen VMA ATPasa Saccharomyces cerevisiae (1,5). El gen ha sido modificado para expresión independiente en E. coli utilizando un sistema de expresión de polimerasa de ARN T7 (2). Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen VMA1 ATPasa de Saccharomyces cerevisiae (J. Thorner). Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 1 μg de plásmido de control linealizado con pBSvdeX XmnI en 3 horas a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Suplemento 1X NEBuffer™ PI-SceI con BSA purificado Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ PI-SceI 10 mM MgCl 2 1 mM DTT 10 mM Tris-HCl 100 mM KCl (pH 8,6 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 10 % NEBuffer™ r2.1: 10 % NEBuffer™ r3.1: 10 %

37. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Tampón rCutSmart™: 10 % Compatibilidad de diluyente Diluyente B Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 500 µg/ml BSA Glicerol al 50 % NaCl 300 mM pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor 65°C durante 20 minutos BsiHK AI Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen BsiHKAI clonado de Bacillus stearothermophilus (PC Shaw) Reactivos suministrados 1 4 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Digestión de enzimas de restricción. PROPIEDADES Y USO

38. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL PRODUCTOS RELACIONADOS PstI 1 5 PstI tiene una versión de alta fidelidad PstI- HF® (NEB #R3140). Las enzimas de restricción de alta fidelidad (HF) tienen una actividad del 100 % en el tampón rCutSmart; la simplicidad de un solo búfer significa un procesamiento de muestras más sencillo y optimizado. Las enzimas HF también exhiben una actividad estelar drásticamente reducida. Todas las enzimas HF están calificadas para Time-Saver y, por lo tanto, pueden cortar el ADN del sustrato en 5 a 15 minutos con la flexibilidad de digerir durante la noche sin degradación del ADN. Diseñadas teniendo en cuenta el rendimiento, las enzimas de restricción HF son completamente activas en una gama más amplia de condiciones, lo que minimiza los productos fuera del objetivo y ofrece flexibilidad en el diseño experimental. Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen PstI de Providencia stuartii 164 (ATCC 49762). Reactivos suministrados

39. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Los siguientes reactivos se suministran con este producto PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de PstI requerida para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un volumen de reacción total de 50 µl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37°C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl 2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 75 % NEBuffer™ r2.1: 75 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 50 % Compatibilidad de diluyente Diluyente C Búfer de almacenamiento NaCl 250 mM 10 mM Tris-HCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml BSA

40. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL 50 % Glicerol 0,15 % Triton® X-100 pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor 80°C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: No sensible Isosquizómeros BspMAI PstI-HF CviAII Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen CviAII del virus Chlorella PBCV-1 (JL Van Etten). Reactivos suministrados 1 6 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción CG, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción

41. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL PROPIEDADES Y USO PvuII 1 7 PvuII tiene una versión de alta fidelidad PvuII- HF® (NEB #R3151 ). Las enzimas de restricción de alta fidelidad (HF) tienen una actividad del 100 % en el tampón rCutSmart; la simplicidad de un solo búfer significa un procesamiento de muestras más sencillo y optimizado. Las enzimas HF también exhiben una actividad estelar drásticamente reducida. Todas las enzimas HF están calificadas para Time-Saver y, por lo tanto, pueden cortar el ADN del sustrato en 5 a 15 minutos con la flexibilidad de digerir durante la noche sin degradación del ADN. Diseñadas teniendo en cuenta el rendimiento, las enzimas de restricción HF son completamente activas en una gama más amplia de condiciones, lo que minimiza

42. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL los productos fuera del objetivo y ofrece flexibilidad en el diseño experimental. Fuente del producto Una cepa de E.coli que porta el gen PvuII de Proteus vulgaris (ATCC 13315). Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto: PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un volumen de reacción total de 50 µl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37°C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl 2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 50 % NEBuffer™ r2.1: 100 %

43. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad de diluyente Diluyente B Búfer de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 300 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 500 µg/ml BSA 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor No Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: No sensible Isosquizómeros PvuII-HF BtgZI Fuente del producto Una cepa de E.coli que porta el gen BtgZI clonado de Bacillus thermoglucosidasius (X. Pan) Reactivos suministrados 1 8 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción B Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Digestión de enzimas de restricción

44. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL PROPIEDADES Y USO SalI- 1 9 Las enzimas de restricción de alta fidelidad (HF) tienen una HF actividad del 100 % en el tampón rCutSmart; la simplicidad de un solo búfer significa un procesamiento de muestras más sencillo y optimizado. Las enzimas HF también exhiben una actividad estelar drásticamente reducida. Todas las enzimas HF están calificadas para Time-Saver y, por lo tanto, pueden cortar el ADN del sustrato en 5-15 con la flexibilidad de digerir durante la noche sin degradarse a ADN. Diseñadas teniendo en cuenta el rendimiento, las enzimas de restricción HF son completamente activas en una gama más amplia de condiciones, lo que minimiza los productos fuera del objetivo y ofrece flexibilidad en el diseño experimental.

45. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL NEB realiza controles de calidad extensivos en todas las enzimas de restricción estándar y de alta fidelidad (HF). A continuación, se muestran ejemplos de estudios de contaminación por nucleasas para algunas de nuestras enzimas de restricción HF. Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen SalI clonado y modificado de Streptomyces albus G (ATCC 49789) Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para digerir 1 μg de ADN λ (digerido con HindIII) en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X Tampón rCutSmart™ Incubar a 37°C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM

46. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 10 % NEBuffer™ r2.1: 100 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad de diluyente Diluyente A Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM Glicerol al 50 % 300 µg/ml BSA pH 7,5 a 25 °C Inactivación de calor 65°C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam : No sensible Metilación de dcm : No sensible Metilación de CpG: Bloqueada Isosquizómeros SalI Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen FseI clonado de la especie Eul1b de Frankia (NRRL 18528). 2 0 FseI

47. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Reactivos suministrados Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción CG, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO

48. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL EcoNI Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen EcoNI clonado de Escherichia coli CDC A-193 (ATCC 12041) Reactivos suministrados 2 1 Este producto está relacionado con las siguientes categorías: Endonucleasas de restricción CG, Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar tiempo Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones: Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción PROPIEDADES Y USO

49. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL SpeI- 2 2 Las enzimas de restricción de alta fidelidad (HF) tienen una HF actividad del 100 % en el tampón rCutSmart; la simplicidad de un solo búfer significa un procesamiento de muestras más sencillo y optimizado. Las enzimas HF también exhiben una actividad estelar drásticamente reducida. Todas las enzimas HF están calificadas para Time-Saver y, por lo tanto, pueden cortar el ADN del sustrato en 5-15 con la flexibilidad de digerir durante la noche sin degradarse a ADN. Diseñadas teniendo en cuenta el rendimiento, las enzimas de restricción HF son completamente activas en una gama más amplia de condiciones, lo que minimiza los productos fuera del objetivo y ofrece flexibilidad en el diseño experimental. NEB realiza controles de calidad extensivos en todas las enzimas de restricción estándar y de alta fidelidad (HF). A continuación, se muestran ejemplos de estudios de contaminación por nucleasas para algunas de nuestras enzimas de restricción HF. Fuente del producto Una cepa de E. coli que porta el gen SpeI clonado y modificado de la especie Sphaerotilus (ATCC 13923) Reactivos suministrados Los siguientes reactivos se suministran con este producto:

50. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL PROPIEDADES Y USO Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 μg de ADN de pXba-XbaI en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X Tampón rCutSmart™ Incubar a 37°C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 25 % NEBuffer™ r2.1: 50 % NEBuffer™ r3.1: 10 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad de diluyente Diluyente C Búfer de almacenamiento Tris-HCl 10 mM 250 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 0,15 % Triton® X-100 200 µg/ml BSA 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación de calor 80°C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación