Studiju kurss
Download
1 / 21

4. laboratorijas darbs. Gela elektroforēze un plazmīdu DNS kartēšana. - PowerPoint PPT Presentation


  • 307 Views
  • Uploaded on

Studiju kurss Bioloģija (nebiologiem). Bloks Šūnas bioloģija, bioķīmija, ģenētika. 4. laboratorijas darbs. Gela elektroforēze un plazmīdu DNS kartēšana. Māris Lazdiņš [email protected] LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra. Gelelektroforēzes iekārta. Gelelektroforēzes iekārta.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about ' 4. laboratorijas darbs. Gela elektroforēze un plazmīdu DNS kartēšana.' - zuwena


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript

Studiju kurssBioloģija (nebiologiem)

BloksŠūnas bioloģija, bioķīmija, ģenētika

4. laboratorijas darbs.

Gela elektroforēze un

plazmīdu DNS kartēšana.

Māris [email protected]

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Gelelektroforēzes iekārta

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Gelelektroforēzes iekārta

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML



Kas ir elektroforēze?

Elektroforēzes pamatā ir lādētu daļiņu

pārvietošanās elektriskajā laukā.

+

+

+

Katods Anods

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforeze
Elektroforeze

 - potenciālu starpība starp elektrodiem (V)

l – attālums starp elektrodiem



lq

E – elektriskā lauka intensitāte (stiprums) =/l (V/cm)

F =EqF=ma a=F/m=Eq/m

+

+

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforeze1
Elektroforeze

Ja tas notiktu vakumā,

lādētās molekulas paātrinātos un ātri sasniegtu elektrodus.

Vidē, kurā parasti veic elektroforezi,

- viskozitātes dēļ,

- dēļ daudzām sadursmēm starp molekulām

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforeze2
Elektroforeze

daļiņu kustība ir apgrūtināta,

- tā notiek lēnāk,

- ir vairāk atkarīga no

- daļiņas lieluma un

- ģeometriskās formas.

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforeze3
Elektroforeze

Sfēriskas daļiņa viskozā vidē: v = Eq/6r

Tā kā molekulas viena no otras atšķiras ar savu

- lādiņu un

- izmēriem,

tad pēc noteikta laka elektriskā lauka iedarbībā tās būs veikušas atšķirīgus attālumus.

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforeze4
Elektroforeze

Matemātiskie vienādojumi labi apraksta molekulu pārvietošanos

viskozā cukuru šķīdumā,

bet nav viennozīmīgi attiecināmi uz gelelektroforezi.

Šeit papildus notiek gela struktūras un molekulu mijiedarbības.

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforezes v sture
Elektroforezes vēsture

+

Pirmās elektroforēzes tika

veiktas U veida caurulēs,

cukuru šķīdumos.

Pētāmo vielu sadalījuma

atšifrēšana bija sarežģīta un

sadalījums nestabils.

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforezes v sture1
Elektroforezes vēsture

Metodi 1937. gadā ieviesa

zviedru ķīmiķis

Arne Tiselius.

(1902 - 1971)

Panākumi tika atzinīgi novērtēti.

1948. gadā saņem Nobela prēmiju.

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforezes v sture2
Elektroforezes vēsture

Lai būtu vieglāk saglabāt vielu sadalījumu,

sāka lietot nesējus:

- papīru un

- cietes gelus.

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforezes v sture3
Elektroforezes vēsture

Taču arī šie nesēji deva diezgan nekvalitatīvu ainu.

Vēlāk kā optimālākie nesēji izrādījās:

- agarozes un

- poliakrilamīda geli.

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforeze nes jos
Elektroforeze nesējos

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Elektroforeze nes jos1
Elektroforeze nesējos

Zonālā ierobežojošā (restriktīvā) elektroforēze

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


Gelektroforeze
Gelektroforeze

Agarozes gels

Lietojams molekulām, kuru izmēri ir lielāki par 10 nm.

Lieto 2-0,5% .

1% poru izmērs 150 nm.

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML





Pie darba ?

LU Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas katedra ML


ad