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Thème : Les caractéristiques du Cancer. La migration des cellules cancéreuses. BLACHE Kévin, ARMOIRY Manon, CHWIEJ Karen, EMOND Amandine, POURROY Roxanne Lycée Aristide Briand GAP 05. Problématique : Comment les cellules cancéreuses parviennent-elles à envahir les tissus voisins ?.

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Thème : Les caractéristiques du Cancer

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Presentation Transcript


Thème : Les caractéristiques du Cancer

La migration des cellules cancéreuses

BLACHE Kévin, ARMOIRY Manon, CHWIEJ Karen, EMOND Amandine, POURROY Roxanne

Lycée Aristide Briand GAP 05


Problématique : Comment les cellules cancéreuses parviennent-elles à envahir les tissus voisins ?

  • La modification d’un gène peut-il avoir une incidence sur la migration des cellules ?

  • Que produisent les cellules pour traverser la matrice extracellulaire ?


Mise en évidence de la migration des cellules par blessure/cicatrisation

Hypothèse 1 : La modification du gène Cdx1 a une incidence sur la migration des cellules ?

Expérience 1 : Test de blessure-cicatrisation

Cellules témoins

Cellules CDX1

Monocouche cellulaire


Blessure, lavages puis incubation

  • Incubation des plaques pendant 6h à 37°C.

Milieu nutritif +

Antiprolifératif : mitomycine (surnageant )

Blessure puis 5 lavages PBS

Cellules


CAT: cellules contrôles

Résultat du test de migration

6h

Cellules CDX 1

6h

Grossissement x40


Morphologie des cellules avant et après migration.

Cellules témoins

Incubation de 6h

Cellules CDX1

Incubation de 6h


Vitesses de migration

des cellules

µm/min

Cellules CDX1 1.5 fois plus rapides que les cellules contrôles !


Mise en évidence d’enzymes permettant la migration

  • Hypothèse 2 : c’est grâce à des enzymes libérées par les cellules qu’elles traversent la matrice extracellulaire.

  • Expérience 2 : Zymographie

    1. Séparation des protéines en fonction des masses molaires

    2. Mise en évidence de l’activité enzymatique


Préparation des gels de concentration et de séparation

Gel de concentration : Acrylamide

Gel de séparation : Acrylamide et gélatine

Gel de concentration

Gel de séparation


Électrophorèse

Légende :

1. Marqueurs masse molaire.

2. Test positif MMP-2.

3. Test négatif milieu seul.

4. Sn cellules non tumorales.

5. Sn cellules tumorales invasives.

6. Sn cellules CDX1.

7. Surnageant (sn) cellules contrôles.

1

2

3

4

5

6

7

Gel de concentration

Gel de séparation


Traitement des gels

  • Séparation des gels de concentration et de séparation .

  • Lavages du gel de séparation avec une solution de triton/CaCl2.

  • Incubation 18h à 37°C avec une solution de travail dont la concentration en triton est inférieure à la première.

  • Coloration des gels pour observer la gélatine consommée par les enzymes (noir amido et rouge ponceau).


Résultat après coloration

1 2 3 4 5 6 7

1. Marqueurs masse molaire.

2. Test + MMP-2.

3. Test - milieu seul.

4. Sn cellules non tumorales.

5. Sn cellules tumorales invasives.

6. Sn cellules CDX1.

7. Sn cellules contrôles.


Interprétation des résultats

  • Apparition d’une décoloration pour l’enzyme MMP-2 => Dégradation de la gélatine.

  • Apparition de deux taches blanches pour les cellules tumorales => Deux enzymes différentes

  • Cellules CDX1, absence de trace => Quantité d’enzymes insuffisante.


Conclusion

  • Sous l’influence d’un gène modifié => accélération de la migration.

  • Production de différentes enzymes pour dégrader la matrice extracellulaire dans les cellules tumorales invasives (mais pas de mise en évidence pour les CDX1).

  • Perspectives : pourrions nous supprimer ces enzymes pour limiter l’invasion des cellules cancéreuses ? Comment le mettre en œuvre ?


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