Th me les caract ristiques du cancer
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Thème : Les caractéristiques du Cancer. La migration des cellules cancéreuses. BLACHE Kévin, ARMOIRY Manon, CHWIEJ Karen, EMOND Amandine, POURROY Roxanne Lycée Aristide Briand GAP 05. Problématique : Comment les cellules cancéreuses parviennent-elles à envahir les tissus voisins ?.

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Thème : Les caractéristiques du Cancer

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Presentation Transcript


Th me les caract ristiques du cancer

Thème : Les caractéristiques du Cancer

La migration des cellules cancéreuses

BLACHE Kévin, ARMOIRY Manon, CHWIEJ Karen, EMOND Amandine, POURROY Roxanne

Lycée Aristide Briand GAP 05


Probl matique comment les cellules canc reuses parviennent elles envahir les tissus voisins

Problématique : Comment les cellules cancéreuses parviennent-elles à envahir les tissus voisins ?

  • La modification d’un gène peut-il avoir une incidence sur la migration des cellules ?

  • Que produisent les cellules pour traverser la matrice extracellulaire ?


Th me les caract ristiques du cancer

Mise en évidence de la migration des cellules par blessure/cicatrisation

Hypothèse 1 : La modification du gène Cdx1 a une incidence sur la migration des cellules ?

Expérience 1 : Test de blessure-cicatrisation

Cellules témoins

Cellules CDX1

Monocouche cellulaire


Th me les caract ristiques du cancer

Blessure, lavages puis incubation

  • Incubation des plaques pendant 6h à 37°C.

Milieu nutritif +

Antiprolifératif : mitomycine (surnageant )

Blessure puis 5 lavages PBS

Cellules


Th me les caract ristiques du cancer

CAT: cellules contrôles

Résultat du test de migration

6h

Cellules CDX 1

6h

Grossissement x40


Th me les caract ristiques du cancer

Morphologie des cellules avant et après migration.

Cellules témoins

Incubation de 6h

Cellules CDX1

Incubation de 6h


Th me les caract ristiques du cancer

Vitesses de migration

des cellules

µm/min

Cellules CDX1 1.5 fois plus rapides que les cellules contrôles !


Th me les caract ristiques du cancer

Mise en évidence d’enzymes permettant la migration

  • Hypothèse 2 : c’est grâce à des enzymes libérées par les cellules qu’elles traversent la matrice extracellulaire.

  • Expérience 2 : Zymographie

    1. Séparation des protéines en fonction des masses molaires

    2. Mise en évidence de l’activité enzymatique


Pr paration des gels de concentration et de s paration

Préparation des gels de concentration et de séparation

Gel de concentration : Acrylamide

Gel de séparation : Acrylamide et gélatine

Gel de concentration

Gel de séparation


Th me les caract ristiques du cancer

Électrophorèse

Légende :

1. Marqueurs masse molaire.

2. Test positif MMP-2.

3. Test négatif milieu seul.

4. Sn cellules non tumorales.

5. Sn cellules tumorales invasives.

6. Sn cellules CDX1.

7. Surnageant (sn) cellules contrôles.

1

2

3

4

5

6

7

Gel de concentration

Gel de séparation


Traitement des gels

Traitement des gels

  • Séparation des gels de concentration et de séparation .

  • Lavages du gel de séparation avec une solution de triton/CaCl2.

  • Incubation 18h à 37°C avec une solution de travail dont la concentration en triton est inférieure à la première.

  • Coloration des gels pour observer la gélatine consommée par les enzymes (noir amido et rouge ponceau).


R sultat apr s coloration

Résultat après coloration

1 2 3 4 5 6 7

1. Marqueurs masse molaire.

2. Test + MMP-2.

3. Test - milieu seul.

4. Sn cellules non tumorales.

5. Sn cellules tumorales invasives.

6. Sn cellules CDX1.

7. Sn cellules contrôles.


Interpr tation des r sultats

Interprétation des résultats

  • Apparition d’une décoloration pour l’enzyme MMP-2 => Dégradation de la gélatine.

  • Apparition de deux taches blanches pour les cellules tumorales => Deux enzymes différentes

  • Cellules CDX1, absence de trace => Quantité d’enzymes insuffisante.


Conclusion

Conclusion

  • Sous l’influence d’un gène modifié => accélération de la migration.

  • Production de différentes enzymes pour dégrader la matrice extracellulaire dans les cellules tumorales invasives (mais pas de mise en évidence pour les CDX1).

  • Perspectives : pourrions nous supprimer ces enzymes pour limiter l’invasion des cellules cancéreuses ? Comment le mettre en œuvre ?


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