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Thème : Les caractéristiques du Cancer

Thème : Les caractéristiques du Cancer. La migration des cellules cancéreuses. BLACHE Kévin, ARMOIRY Manon, CHWIEJ Karen, EMOND Amandine, POURROY Roxanne Lycée Aristide Briand GAP 05. Problématique : Comment les cellules cancéreuses parviennent-elles à envahir les tissus voisins ?.

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Thème : Les caractéristiques du Cancer

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Presentation Transcript

  1. Thème : Les caractéristiques du Cancer La migration des cellules cancéreuses BLACHE Kévin, ARMOIRY Manon, CHWIEJ Karen, EMOND Amandine, POURROY Roxanne Lycée Aristide Briand GAP 05

  2. Problématique : Comment les cellules cancéreuses parviennent-elles à envahir les tissus voisins ? • La modification d’un gène peut-il avoir une incidence sur la migration des cellules ? • Que produisent les cellules pour traverser la matrice extracellulaire ?

  3. Mise en évidence de la migration des cellules par blessure/cicatrisation Hypothèse 1 : La modification du gène Cdx1 a une incidence sur la migration des cellules ? Expérience 1 : Test de blessure-cicatrisation Cellules témoins Cellules CDX1 Monocouche cellulaire

  4. Blessure, lavages puis incubation • Incubation des plaques pendant 6h à 37°C. Milieu nutritif + Antiprolifératif : mitomycine (surnageant ) Blessure puis 5 lavages PBS Cellules

  5. CAT: cellules contrôles Résultat du test de migration 6h Cellules CDX 1 6h Grossissement x40

  6. Morphologie des cellules avant et après migration. Cellules témoins Incubation de 6h Cellules CDX1 Incubation de 6h

  7. Vitesses de migration des cellules µm/min Cellules CDX1 1.5 fois plus rapides que les cellules contrôles !

  8. Mise en évidence d’enzymes permettant la migration • Hypothèse 2 : c’est grâce à des enzymes libérées par les cellules qu’elles traversent la matrice extracellulaire. • Expérience 2 : Zymographie 1. Séparation des protéines en fonction des masses molaires 2. Mise en évidence de l’activité enzymatique

  9. Préparation des gels de concentration et de séparation Gel de concentration : Acrylamide Gel de séparation : Acrylamide et gélatine Gel de concentration Gel de séparation

  10. Électrophorèse Légende : 1. Marqueurs masse molaire. 2. Test positif MMP-2. 3. Test négatif milieu seul. 4. Sn cellules non tumorales. 5. Sn cellules tumorales invasives. 6. Sn cellules CDX1. 7. Surnageant (sn) cellules contrôles. 1 2 3 4 5 6 7 Gel de concentration Gel de séparation

  11. Traitement des gels • Séparation des gels de concentration et de séparation . • Lavages du gel de séparation avec une solution de triton/CaCl2. • Incubation 18h à 37°C avec une solution de travail dont la concentration en triton est inférieure à la première. • Coloration des gels pour observer la gélatine consommée par les enzymes (noir amido et rouge ponceau).

  12. Résultat après coloration 1 2 3 4 5 6 7 1. Marqueurs masse molaire. 2. Test + MMP-2. 3. Test - milieu seul. 4. Sn cellules non tumorales. 5. Sn cellules tumorales invasives. 6. Sn cellules CDX1. 7. Sn cellules contrôles.

  13. Interprétation des résultats • Apparition d’une décoloration pour l’enzyme MMP-2 => Dégradation de la gélatine. • Apparition de deux taches blanches pour les cellules tumorales => Deux enzymes différentes • Cellules CDX1, absence de trace => Quantité d’enzymes insuffisante.

  14. Conclusion • Sous l’influence d’un gène modifié => accélération de la migration. • Production de différentes enzymes pour dégrader la matrice extracellulaire dans les cellules tumorales invasives (mais pas de mise en évidence pour les CDX1). • Perspectives : pourrions nous supprimer ces enzymes pour limiter l’invasion des cellules cancéreuses ? Comment le mettre en œuvre ?

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