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Bilirubin

Bilirubin. Bilirubin 은 hemoglobin 의 분해물질  Reticuloendothelial cell ➡ hemoglobin ➡ Bilirubin ➡ Blood stream. Bilirubin ＋ Albumin ➡ Liver   Glucuronic acid ＋ Bilirubin ➡ glucuronide bilirubin (direct bilirubin) ➡ Bile .

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Bilirubin

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Presentation Transcript

  1. Bilirubin

  2. Bilirubin은 hemoglobin의 분해물질  Reticuloendothelial cell ➡ hemoglobin ➡ Bilirubin ➡ Blood stream Bilirubin ＋ Albumin ➡ Liver   Glucuronic acid ＋ Bilirubin ➡ glucuronide bilirubin (direct bilirubin) ➡ Bile Bilirubin의 배설과 glucronide bilirubin의 형성은 간 기능과 정상 적혈구의 붕괴 율에 따라 영향을 받는다. ◀Conjugate (direct/ posthepatic) bilirubin    ◀ Unconjugate(indirect / prehepatic) bilirubin

  3. ◀Conjugate (direct/ posthepatic) bilirubin    간기능, 황달분별, 조혈기능을 평가, 용혈, 담도계 폐쇄, 바이러스간염, 간경변증 등 interhepatic과 담석, 담낭  bilirubin이 20mg/dl 또는 이상이면 교환 수혈을 요한다. • water-soluble 으로 신장으로 배설 한다. ◀Hijmans van den Bergh ➡ bilirubin의 Diazo  측정법 고안   직접bilirubin은 diazo에 의하여 2분자의 azobilirubin B를 형성 간접bilirubin은 ethanol를 이용한 반응에서 azobilirubin A를 형성

  4. ◀Unconjugate(indirect / prehepatic) bilirubin 뇌세포의 손상, 간 실질세포의 손상, 용혈성 빈혈 G-6PD결핍증, 자가면역질환, 수혈부작용, 간세포기능장애   ( viral hepatis, Gilbert및 Crigler-NajjarSy)  UDP-GT(Uridine diphosphate glucuronosyl transferase) activity감소 conjugation에 장애가 생겨 mild unconjugated hyperbilirubinemia유발 • unconjugated bilirubin은 albumin과 결합한 상태로 존재. • 불용성(water-insoluble) 으로 신장으로 배설되지 못한다. •    unconjugated bilirubin의 증가는 간질환에서는 드믈며 단독으 • 로 상승할 경우 일차적으로는 hemolytic disorder를 의심.

  5. Method Ehrlich (1883) – Urine bilirubin (sulfanilic acid, sod nitrite) Meulengracht(1919) - 육안 비색법 Hijmans van den Bergh(1916) - Diazo reagent Malloy – Evelyn (1937) – Diazo / alcohol(acid) Jendrassik – Grof (1938) – Diazo/Caffein(alk) Michaelsson(1965) – dyphyllin / sod acetate(alk)

  6. ◀ Diazo시약 (diazotized sulfanilic acid) Methanol (Malloy-Evelyn법)  Caffeine-benzoate ( Jendrassik-Grof법) 직접 Bilirubin는 산성 용액중의 Diazo 시약에 의하여 적색. 간접Bilirubin은 methanol을 첨가 후 Diazo 시약을 가하면 적색 총Bilirubin을 측정하여 양 반응의 차를 간접 bilirubin을 산출

  7. Malloy - Evelyn (1937) – Diazo / alcohol(acid) ① Diazo-A 시약 ⇒ Sulfanilic acid 100㎎을 농 염산 1.5㎖에 용해 /   증류수100㎖. ② Diazo-B 시약 ⇒증류수 100㎖에 Sodium nitrite (NaNO2) 0.5g를 용해. ③ Diazo시약 ① Diazo-A 시약 10㎖ 와 ② Diazo-B 시약 0.3㎖를 혼합 사용. ④ 맹검용  시약 ⇒농 염산 1.5㎖에 증류수 100㎖을 가한다. ⑤ Methanol Bilirubin 제품의 분자 흡광계수가 60,000±1,6600(453㎚)의 범위내 사용.

  8. Procedure

  9. Standard curve

  10. Jendrassik – Grof (1938) – Diazo/Caffein(alk) HCl = 0.05mol/L Caffeine-benzoate buffer Caffein 50gm. sod, benzoate 75gm. sod, acetate-125gm. EDTA.Na 1.0gm/1L Diazo-A = sulfanilic acid 5.0gm, HCl 15.0ml, DW 1L⇒/10ml Diazo-B = Sodium nitrite 500mg, DW 100ml ⇒0.25ml 4% Ascorbic acid (200mg / 5ml DW) Fehling reagent – sod hydroxide 100g, sod tartrate 350g / 증류수 1L

  11. Procedure

  12. Michaelssonmodifiy method Alkaliazon Bilirubin Blue(AAB) Dyphylline reagent (TB정색) – dyphylline 20g, sod acetic acid 50g, DW 400ml / heating Buffer(DB정색)= Potassium chloride, Zinc sulfate. HCl Diazo-A = sulfanilic acid 5.0gm, HCl 15.0ml, DW 1L ⇒10ml Diazo-B = Sodium nitrite 500mg, DW 100ml ⇒0.25ml Fehling reagent – sod hydroxide 100g, sod tartrate 350g / 증류수 1L

  13. Alkaliazon Bilirubin Blue(AAB) 혼합 후 600nm에서 Reading

  14. Bilirubin의 산화 효소 (BOD) sodium citrate Citric acid 450/546nm

  15. Neonetalbilirubin test (Bilirubinometer) 1. 검사 원리 • 소량의 검체로 Bilirubin 자체의 색을 직접 분광 광도계로 측정한다 2. Oxy-Hemoglobin이 흡광 파장인 454nm에서 역시 흡광 력이 있다. 3. 540nm (oxy-Hb만 흡광력을 가지는) 에서oxy -Hb 값을 공제한다. 2.검체준비 Fresh serum, Heparin 처리된 capillary plasma 3.주의사항 빛에 약하므로 채혈즉시 측정한다 capillary tube 검체는 sun light에 직접 노출되면 1시간안에 bilirubin의 50% 이상이 감소. Lab light에서도 2-3시간 후에는 현저하게 감소 된다고 함.

  16. 용혈성 황달(hemolytic jaundice) Hemoglobin의 분해가 비정상적으로 높아져서 bilirubin이 간에서의 처리능력 이상으로 생성되는 경우에 일어나며 장으로 bilirubin 배설과 요로 urobilinogen 배설이 높아진다. Indirect(++)/blood Urobilinogen(++)/urine,feces 간 세포성 황달(hepatogenous jaundice) 독성물질(CCl4, chloroform, )이나 바이러스 등에 의해 간의 실질세포가 장해를 받아 간에서 bilirubin의 처리가 불가능할 때 일어난다. Indirect(++), Direct(++)/blood Urobilinogen(++) bilirubin(++)/ urine Crigler-Najjar , Gilbert , Dubin-Jonson 증후군 폐쇄성 황달(obstructive jaundice) 결석이나 암 때문에 간 담즙이 담낭으로 들어갈 수 없는 경우에 일어난다. Bilirubin은 glucuronate 접합체로 되어서 오줌으로 배설된다. bilirubin(++)/urine Direct(++)/blood

  17. 1) Bilirubin이 증가하는 경우 ① 간 전성 황달(Prehepatic Jaundice) : Indirect bilirubin 증가, urobilinogen 증가- 용혈성 황달 , - Shunt 고 Bilirubin 혈증 ② 간성 황달(Hepatic Jaundice) : Indirect bilirubin 증가, 그러나 간, 담도 폐쇄 로 direct bilirubin 이 증가하는 경우가 많음. - 간세포성 황달 - 간내 담즙 울체 ③ 간 후성 황달(Posthepatic Jaundice) - 폐쇄성 황달 : direct bilirubin증가 ④ 가족성 비용혈성 황달, 간세포로의 Bilirubin 이행장애, 포합 Bilirubin의 배설 장애 2) Bilirubin이 감소하는 경우 절대적인 의의는 없으나 용혈성 빈혈 이외의 심한 빈혈은 주로 hemoglobin 대사 가 저하되므로 Bilirubin 농도가 감소한다.

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