G: 4101C

1. Instituto Politécnico Nacional Centro de Estudios Científicos y Tecnológicos No. 6 “Miguel Othón de Mendizábal” BACTERIOLOGIA • Integrantes: • Alvárez Bonifacio Yeredid • Bello Reyes Saúl Joshafat • García Salinas Karen • Martínez Hernández Daniel • Mayen Bernal Viridiana • Quintero Andrés Fabiola Janet • Rosales Hernández Diana Carolina • Sandoval Rosas Eduardo COPROCULTIVO G: 4101C Fecha: 09 – Mayo - 2012 Profesor: Miguel Ángel Morales Gil

2. Importancia clínica. El médico, frente a un paciente que acude por presentar un cuadro diarreico, debe decidir cuál es la posible etiología y qué tipo de tratamiento debe dar, por lo que recurre al laboratorio a fin de obtener un diagnóstico microbiológico que permita realizar un abordaje racional de la enfermedad.

3. Diagrama de flujo para el diagnóstico de infecciones gastrointestinales. Materia fecal McConkey o EMB Caldo tetrationato Pruebas rápidas Tinción de Kinyoun Campy-Bap Agua peptonada Coproparistoscópico Seleccionar colonias y sembrar TSI, LIA y MIO Seleccionar colonias y sembrar en TSI, Hacer pruebas de acetato de plomo y de hidrólisis de hipurato TCBS Sulfito de bismuto, SS ó Verde Brillante Reacciones de aglutinación con sueros anti A, B, C y D de Shigella Seleccionar colonias amarillas y sembrar en TSI, LIA, MIO, caldo peptonado y arginina Seleccionar colonias y sembrar en TSI, LIA y MIO Identificación de quistes de protozoarios , huevecillos y larvas de helmintos Identificación de Coccidias Detección de Rotavirus Campylobacter Escherichia coli Tipificar con antisueros Tipificación de Salmonella con sueros anti A, B, C1, C2, D y E Reacción de aglutinación con suero anti Vibrio cholerae O1 Yersinia Adaptado de: Diagnóstico de Laboratorio de infecciones gastrointestinales. INDRE pp 205

6. AFECCIONES GASTROINTESTINALES La ingestión de patógenos causa muchas infecciones. Los términos utilizados más comúnmente para describir las enfermedades del tracto gastrointestinal son: Diarrea. Disentería.

7. DIVERSOS SINDROMES DIARREICOS Diarrea aguda liquida Diarrea crónica/ Mal absorción. Gastritis o atrofia gástrica. Diarrea con sangre Fiebre entérica.

9. ¿QUE ES EL COPROCULTIVO? • El coprocultivo (cultivo de heces), es un estudio cuyo propósito es buscar bacterias patógenas que causan un daño en el tracto intestinal. Este estudio permite aislar e identificar al agente causal de estas enfermedades.

10. MECANISMOS QUE CAUSAN LA DIARREA Toxinas 2) Invasión 3) Penetración de la pared intestinal

11. SINTOMATOLOGIA • Algunos síntomas que los pacientes con enfermedades infecciosas a menudo experimentan son: • FIEBRE • DESHIDRATACION • LETARGO

12. Toma de muestra • Para efectuar un coprocultivo pueden utilizarse las siguientes muestras: • Heces frescas • Hisopo rectal • Indicaciones para el paciente: • No es necesario el ayuno. • No se requiere dieta especial • No estar bajo tratamiento con antibióticos o tener más de 72 hrs de haber concluido el tratamiento. En caso de no ser posible ninguna de estas dos opciones, eespecificar en la solicitud del estudio que antibiótico se están tomando y cuantos días lleva haciéndolo.

13. Indicaciones para la toma y condiciones de la muestra • La toma de muestra se deberá realizar lo antes posible luego del comienzo de la enfermedad (preferiblemente dentro de los cuatro primeros días). • La recolección se efectúa en un recipiente de boca ancha estéril y con tapa de rosca. • Las muestras de consistencia formada deberán ser de 4-6 gramos (tamaño de una nuez), en caso de ser liquidas entre 5 y 1O ml. • Debe evitarse la contaminación con orina. • Si no se pueden enviar las muestras de manera inmediata se pueden refrigerar sin exceder 4 hrs. ya que a medida que la muestra fecal se enfría, la caída de pH llega a ser suficiente para inhibir el crecimiento de muchas especies Shigella y algunas de Salmonella.

14. Las muestras deben examinarse y cultivarse lo antes posible después de la recolección, si el cultivo se hace dentro de las dos horas después de tomada la muestra, no se requiere medio de transporte, pasado este periodo se recomienda usar el medio de transporte Cary & Blair, caldo selenito o Tioglicolato. • En general no se recomienda el uso de hisopados rectales pero pueden ser necesarios para obtener muestras fecales de neonatos o adultos mayores. • El hisopo rectal debe insertarse exactamente más allá del esfínter rectal, evitando el contacto directo con materia fecal en el recto. Estos hisopados deben inocularse de inmediato en medios de cultivo o colocarse en un sistema de transporte adecuado para impedir el desecamiento. • En pacientes en edad pediátrica que usan pañales las muestras deben ser tomadas preferentemente de sus glúteos y no del pañal seleccionando las partes mucosas, purulentas y/o sanguinolentas y colocarlas en frasco estéril.

15. EXAMEN MACROSCÓPICO • Consistencia (solidas, diarreicas, liquidas) • Color; indica la abundancia y la calidad del flujo biliar. • Presencia de sangre, pus, moco. • Fragmentos de tejidos o restos alimenticios sin digerir • Olor

16. BACTERIAS CAUSANTES DE LA DIARREA

17. Esta bacteria ha sido incriminada en enfermedades infecciosas que afectan casi cualquier tejido y sistema orgánico humano. Cepas de E. coli que pueden producir gastroenteritis: E. coli enterotoxigenica (ETEC) E. coli enteropatógena (EPEC) E. coli enteroinvasiva (EIEC) E. coli enterohemorrágica (EHEC) E.coli enteroagregante (EAEC) E.coli difusamente adherente (DAEC) ESCHERICHIA COLI

19. Medios de cultivo apropiados para el crecimiento de E. coli.

20. SHIGELLA • Shigella es un bacilo gram negativo perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, que se encuentra estrechamente relacionada con el genero Escherichia, por sus propiedades bioquímicas, serológicas y por similitudes genéticas.

21. SS, Agar • Las colonias sospechosas de Shigella crecidas en AgarSalmonella-Shigella son transparentes, translúcidas u opacas y suelen ser lisas. En este medio las colonias de otros microorganismos que fermentan la lactosa (coliformes) son colonias rojizas y en muchos casos mucoides.

22. Sulfito Bismuto Agar • Sembrar por estría el material objeto de estudio o el procedente del caldo de enriquecimiento en este caso con caldo tetrationato. Incubar a 35±2ºC de 24 a 48 horas. • Shigellaflexneri ATCC 12022 Crecimiento (Nulo-escaso) Color ( Marrón)

23. SALMONELLA

24. Agar SS • No fermentadoras de lactosa (colonias incoloras). • Presentan colonias con centro negro. (productoras de Acido sulfúrico)

25. Agar Verde Brillante • Colonias de color rosa a blanco, opacas rodeadas por el rojo brillante del medio

26. Agar EMB • Las colonias de Salmonella y Shigella son translúcidas, de color ámbar o incoloras.

27. Es un bacilo Gram (-) curvo que posee un flagelo polar produce oxidasa y fermenta glucosa. VIBRIO

28. Gastroenteritis V. Cholerae es el prototipo de los síndromes diarreicos causados por la producción de toxinas coléricas.

29. Aislamiento en el Laboratorio Clínico Enriquecimiento de la muestra: • Agua peptonada Alcalina, pH 9.0, de 6-8 horas a 37° C Sembrado: • Medio de cultivo TCBS, mantener a 37°C y revisar entre las 18-24 horas. Seleccionar colonias de color amarillo para Vibrio Cholerae

30. V. Cholerae en medio TCBS

31. Vibrios no coléricos Además de V. Cholerae existen otras especies de vibrioscomo: • V. Parahemolyticus • V. Mimicus • V. Metschnikovil • V. Hollisae • V. Furnisae • V. Fluviales

32. Son las responsables de algunas afecciones como gastroenteritis, diarrea y linfadenitis mesentérica. Las bacterias patógenas de la Yersinia son: Y. enterocolitica Y. pseudotuberculosis Yersinia

33. CAMPILOBACTER • Morfología y características: Se trata de bacterias gram negativas, pequeñas (0.3-0.6 μm de diámetro, 0.5-5 μm de ancho), no esporuladas, con una forma distintiva curva o en espiral, con aspecto de vibrio, cuando se observan a partir de cultivos jóvenes; con más de 48 horas de incubación o tras prolongada exposición al aire adoptan una forma cocoide.

34. Los Medios más usados para su aislamiento son Skirrow, Butzler y Campy-BAP. Las colonias pueden apreciarse en las placas en 24-48 horas. Campylobacterjejuni Medio Butzler

35. IDENTIFICACION HASTA ESPECIE • La identificación hasta especie se realiza a partir de pruebas bioquímicas. • Para las bacterias que se encuentran en el coprocultivo normalmente estas pruebas se realizan con los siguientes medios de cultivo: • TSI • LIA • MIO • Citrato de sodio • Urea • Agar Hierro de Kligler • (La lectura e interpretación de las mismas se explican en los anexos correspondientes.)

38. Identificación Final Antisueros: Suero que contiene anticuerpos (inmunoglobulinas) específicos frente a un determinado antígeno o a varios o Suero animal o humano que contiene anticuerpos contra una enfermedad específica, que se utilizan para proporcionar inmunidad pasiva frente a dicha enfermedad. Los antisueros no dan lugar a la producción de anticuerpos. Anticuerpo: Molécula de inmunoglobulina específica de antígeno, producida por un clon de linfocitos B en respuesta a su estimulación por dicho antígeno concreto. • Antígeno: • Es una sustancia que se combinará con un anticuerpo a raves de sitios de unión específicos. • Sustancia capaz de reaccionar con las moléculas específicas propias de una respuesta inmunitaria, es decir, anticuerpos y receptores de linfocitos T.

39. Identificación Final El método tradicional para preparar antisueros ah sido inyectar el antígeno en un animal (cordero, conejo, caballo, cuyo, cabras, etc…). El animal genera entonces anticuerpos. • Los antisueros se inyectan a los animales para que estos se pongan en contacto con las bacterias y se generen anticuerpos (específicos para las bacterias que se inocularon en los animales). Posteriormente estos anticuerpos se extraen de la sangre de los animales para ser utilizadas en la identificación de bacterias aisladas de muestras biológicas. Cuando hay formación de precipitados da positivo a la bacteria estudiada.

40. ANTIBIOGRAMA DEL COPROCULTIVO En caso de encontrar algún agente patógeno es necesario realizar un antibiograma por el método de Bauer-Kirby.

41. Por su atención, ¡GRACIAS! : d