白细胞检验
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白细胞检验. 白细胞计数. 原理. 用白细胞稀释液,将血液稀释一定倍数并破坏红细胞后,滴入计数池中,在显微镜下计数一定范围内的白细胞数,经换算即可求得每升血液中各种白细胞的总数。. 器材. 质量控制. 一、误差. 技术误差: 由于操作不正规或器材不精确造成的误差。这种误 差通过主观努力可以避免或显著减小 。 器材不符合要求 采血部位不当 稀释倍数不准 充液不当 血液发生凝固. 固有误差:. 包括计数域误差、吸管误差和计数室误差。 在计数室内计数的面积越大,计数的细胞越多,计数室和吸管使用的次数越多,误差越小。

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Presentation Transcript


原理

用白细胞稀释液,将血液稀释一定倍数并破坏红细胞后,滴入计数池中,在显微镜下计数一定范围内的白细胞数,经换算即可求得每升血液中各种白细胞的总数。




一、误差

  • 技术误差:由于操作不正规或器材不精确造成的误差。这种误 差通过主观努力可以避免或显著减小 。

  • 器材不符合要求

  • 采血部位不当

  • 稀释倍数不准

  • 充液不当

  • 血液发生凝固


固有误差:

  • 包括计数域误差、吸管误差和计数室误差。

  • 在计数室内计数的面积越大,计数的细胞越多,计数室和吸管使用的次数越多,误差越小。

  • 若细胞数太低(<3 × 109/L),可数8个大方格,或降低稀释倍数;若细胞数太高(>15 × 109/L),可适当增加稀释倍数。


二、有核红细胞的影响

校正公式:

 校正后的血细胞数/L=X × 100/(100+Y)

X:校正前的白细胞数

Y:白细胞分类计数时,计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞。


  • 例:某病人白细胞计数结果为5 × 109/L,白细胞分类计数时,计数100个白细胞的同时发现20个有核红细胞,请问该病人真正的白细胞计数结果为多少?

  • WBC=5 × 109 × 100/(100+20)/L =4 × 109/L


.常规考核标准(RCS)

  • RCS(routine checking standard)

  • RCS =(四大格的所见白细胞最大值-最小值)/四大格所见白细 胞平均值*100%

  • 白细胞≤4 × 109/L者,RCS<30%

  • 白细胞(4.1-14.9)× 109/L者, RCS<20%

  • 白细胞≥15 × 109/L者,RCS<15%



血细胞分析仪法:操作简单、效率高、重复性好适合于大批量的标本

集中监测

缺点:仪器昂贵,准确性取决于仪器的性能及工作状态,使用前需进行仪器

的校准,坚持日常质控

显微镜计数法:操作简单、费用低廉,试用于基层医疗单位及分 散就诊

缺点:费时,重复性差,结果的准确性取决于操作者的技术水平,

作为仪器检验的校准


Differential count dc
白细胞分类计数Differential Count ( DC)


.外周血五种白细胞

  • 中性粒细胞 : 中性杆状核粒细胞 中性分叶核粒细胞

  • 嗜酸性粒细胞

  • 嗜碱性粒细胞

  • 单核细胞

  • 淋巴细胞


.中性粒细胞形态

  • 细胞呈圆形,直径10-15um

  • 细胞质丰富,呈粉红色,含较多细小、均匀、密集的针尖样的染淡粉红色的中性颗粒

  • 细胞核为深紫红色,染色质致密成块状,粗糙 核最窄处>1/3最宽处中性杆状核粒细胞

  • 核最窄处<1/3最宽处中性分叶核粒细胞


嗜酸性粒细胞

  • 细胞呈圆形,直径13-15um;

  • 胞核多为两叶,呈眼镜状,也可偶见分叶的,染色质粗糙染紫红色 胞浆内充满粗大、整齐、均匀、排列紧密的橘红色嗜酸性颗粒。


嗜碱性粒细胞

  • 细胞呈圆形,直径10-12um;

  • 细胞核常被颗粒遮盖,核着色较淡,模糊不清。 胞质量较少,呈淡红色,含少量粗大但大小不均、排列不规则,分布不均匀的紫黑色嗜碱性颗粒。


单核细胞

  • 细胞呈圆形或不规则型,直径15-25um。 核大,呈不规则圆形、肾形、马蹄形或不规则分叶,染色质细致疏松如网状,染色质和副染色质对比明显,染紫红色。 胞浆丰富,染淡蓝或灰兰色,呈毛玻璃样半透明,含大量细小、灰尘样的紫红色嗜天青颗粒。


小淋巴细胞

  • 细胞呈圆形,直径6-10um。

  • 核呈圆形,偶见凹陷,染色质粗糙致密成块,染色质和副染色质界线不清。 胞质量少,仅在核的一侧出现一线天蓝或深蓝色胞浆,甚至完全不见。


大淋巴细胞

  • 细胞呈圆形,直径10-15um。

  • 核呈圆形或椭圆形,常偏于一侧,染色质致密呈块状,但要比小淋巴细胞略为疏松,紫红色。 胞质丰富,呈透明天蓝色,常有少量大而稀疏的紫红色嗜天青颗粒。


.白细胞分类计数原理

(一).电阻抗法

   通过微孔的血细胞所产生的脉冲信号幅度与血细胞体积成正比。白细胞脉冲信号的大小由被计数细胞在溶血液中的大小决定。


REL

NO

WBC

小细胞

大细胞

中间细胞

fl

R1

R2

R3

R4

白细胞体积分布直方图


(二).容量、电导、光散射(VCS)白细胞分类法

根据流体力学原理使用鞘流技术,使溶血后液体内剩余白细胞逐个通过检测器接受VCS三种技术的同时检测。

Coulter Maxm血细胞分析仪


  • 体积(volume V):细胞体积的大小

  • 电导性(conductivity C): 细胞核与细胞质的比例、 颗粒的大小和密度

  • 光散射(scatter S): 检查细胞膜表面特征和内部结构。光散射对细胞颗粒的结构和密度的区分能力强,粗颗粒产生的光散射比细颗粒强。


淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统

采用电阻抗法(测量细胞体积)和射频(检测细胞核和颗粒密度)的联合检测。

细胞悬浮液中加入溶血剂使红细胞溶解,白细胞形态改变不大。当这些细胞通过检测系统时,同时进行直流和射频两种电流的检测。

以DC(细胞大小)信号为横坐标 ;以RF(核及颗粒的密度)为纵坐标

结果将细胞分成淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞三个群体。


电阻法检测原理

射频检测原理


手工分类计数方法

  • 1、制作血片并染色,干燥后待用

  • 2、低倍镜观察白细胞的数量、分布和染色情况

  • 3、选择血涂片体尾交界处染色良好的部位,用油镜分类100-200个细胞

  • 4、记录五种白细胞的细胞数


一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。

四.镜检部位


  • 白细胞总数<一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。3×109/L,分类50-100个细胞 白细胞总数>15×109/L,分类200个细胞 其间的白细胞数,分类100个细胞


一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。.记录方法

  • 手工完全记录法:将所见的白细胞按其分类用“正”或“++++”的方法记录至所需总数

  • 手工半记录法:用上法记录除中性粒细胞以外的各种白细胞,同时默记总数至所需细胞数

  • 分类记数器法


一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。.白细胞计数及分类计数的临床意义

  • 分裂池:原、早、中

  • 成熟池:晚、杆

  • 储备池:杆、分

  • 循环池:血液循环

  • 边缘池:附着

骨髓

外周血


(一)、生理变化一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。

1.年龄

2.日间变化:

3.运动、疼痛、和情绪的影响

4.妊娠和分娩

结论:白细胞计数波动在30%以下,在临床诊断上无意义,

只有通过定时和反复观察才有意义。


(二)一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。.病理变化

1. 中性粒细胞增多

急性感染、严重组织损伤、急性中毒、急性大出血

白血病或恶性肿瘤。

2. 中性粒细胞减少

某些感染、某些血液病、慢性粒化损伤、自身免疫

性疾病、脾功能亢进。


  • (二)一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。.病理变化

  • 淋巴细胞增多

  • 某些病毒、细菌感染、某些慢性感染、淋巴细胞

  • 白血病

  • 淋巴细胞减少

  • 接触放射线及应用肾上腺皮质激


一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。.嗜酸性粒细胞直接计数

  • 原理:

  • 用嗜酸性粒细胞稀释液将血液稀释一定倍数,同时破坏红细胞和大部分其它白细胞,并将嗜酸性粒细胞着色,然后滴入细胞计数池中,计数一定范围内嗜酸性粒细胞数,即可求得每升血液中嗜酸性粒细胞数。


临床意义一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。:

1. 生理变化:

兴奋刺激 (交感兴奋)

下丘脑

释放ACTH 肾上腺皮质 单核—巨噬

(产生肾上腺皮质激素) 吞噬分解E

骨髓产生和释放E受抑制


2. 一般体积小的细胞分布在头部和体部比较多;而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多,异常大的细胞在片尾末端出现,所以在体尾交界处观察细胞。病理变化:

  • 增多:过敏性疾病、寄生虫病、某些传染病、皮 肤病、某些恶性肿瘤、某些血液病

  • 减少:长期使用肾上腺皮质激素,某些传染病早期。

    3.还可用于观察急性传染病、大手术和烧伤病人预后

    测定肾上腺皮质功能和脑垂体前叶功能。


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