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实验三 细菌的培养技术

实验三 细菌的培养技术. 实验目的要求. 1. 掌握基础培养基的制备及消毒灭菌技术； 2. 掌握细菌培养的接种方法，进一步熟悉无菌操作技术； 3. 掌握细菌的一般培养法；并学会细菌生长现象的观察。. 实验内容. 一、培养基的制备. 1 、培养基的概念： 是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。 2 、培养基的营养物质： 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类、水。 3 、培养基的其它成分： 凝固剂、抑制剂、指示剂。. （一）基本知识. 4 、培养基的种类和用途. （ 1 ）按用途分类：.

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实验三 细菌的培养技术

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  1. 实验三细菌的培养技术

  2. 实验目的要求 • 1.掌握基础培养基的制备及消毒灭菌技术； • 2.掌握细菌培养的接种方法，进一步熟悉无菌操作技术； • 3. 掌握细菌的一般培养法；并学会细菌生长现象的观察。

  3. 实验内容 一、培养基的制备 • 1、培养基的概念：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。 • 2、培养基的营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类、水。 • 3、培养基的其它成分：凝固剂、抑制剂、指示剂。 （一）基本知识

  4. 4、培养基的种类和用途 （1）按用途分类： • 基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板； • 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板； • 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA）； • 选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板； • 增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤； • 厌氧培养基：用于培养厌氧菌。

  5. （2）按物理性状分类： • 液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。 • 半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。 • 固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。

  6. （二）实验器材 • 常用玻璃器材：培养皿、试管、烧杯、三角烧瓶、玻棒等。 • 培养基的成分：普通琼脂培养基、蛋白胨、牛肉浸膏、NaCl、琼脂粉等。 • 称量工具：普通天平、电子天平。 • 灭菌器材：高压蒸汽灭菌锅、干烤箱等。 • 培养基的制作：无菌室、超净工作台。

  7. 干烤箱 用途： 适用于玻璃器皿、油剂、粉剂等的灭菌； 温度160~170℃，时间2h。

  8. 高压蒸汽灭菌器

  9. 超净工作台

  10. （三）实验方法 1.常用玻璃器材的准备:清洗、灭菌2.培养基制备的一般程序 称量 培养基灭菌方法 溶化 ★ 基础培养基：121.3℃高压蒸汽灭菌15分钟 分装 ★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 灭菌 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 倒平板 保存 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌

  11. （1）液体培养基的制作 • 成分: 牛肉浸膏（0.2g） 蛋白胨（0.5g） 氯化钠（0.25g） 50mldH2O等。 • 程序： 称量;熔化;分装(试管);灭菌;保存

  12. 2.半固体培养基：在肉汤中加入0.2%～0.5%的琼脂即成。50ml肉汤中0.2g琼脂粉。2.半固体培养基：在肉汤中加入0.2%～0.5%的琼脂即成。50ml肉汤中0.2g琼脂粉。 程序：称量；熔化；分装(试管)；灭菌；保存

  13. 3.固体培养基：在肉汤中加入2%～3%的琼脂即成；或直接用营养琼脂粉配置。3.固体培养基：在肉汤中加入2%～3%的琼脂即成；或直接用营养琼脂粉配置。 平板制作程序：称量3.5g琼脂粉配100ml固体培养基。 称量；熔化；分装(三角烧瓶)；灭菌；倒平板；保存 试管斜面制作程序： 称量；熔化；分装(试管)；灭菌；斜置；保存

  14. 二、细菌接种法 （一）实验器材 • 菌种：金黄色葡萄球菌培养物、白色葡萄球菌培养物、大肠杆菌培养物、枯草杆菌培养物、变形杆菌培养物； • 培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液体培养基、半固体培养基； • 实验器材：接种环、接种针、酒精灯、记号笔、试管架等。 • 以上菌种每人一种，以上培养基每人一套

  15. 细菌接种的要求 无菌操作 • 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。 • 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 • 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 • 标本的采集 • 无菌试管、烧瓶的使用

  16. 接种工具 • 常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。 图－6

  17. （二）接种方法 细菌接种的基本程序 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境

  18. 1.细菌的琼脂平板分离划线接种法 • 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物； • 培养基：固体平板培养基； • 用途 ：该法主要是借助划线而将混杂的细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。

  19. 细菌的分离—平板划线法 • 1.分区划线法： • 2.连续划线法：

  20. （1）分区划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环

  21. （2）连续划线法

  22. 2. 细菌的纯种接种法 当细菌分离成纯种后，常需要接种到相关的培养基中，以测试其各种生物学性状。一般可用斜面、半固体、液体培养基来检验细菌的培养特性，相应培养基的接种方法有三种。 • 琼脂斜面接种法 • 液体接种法 • 半固体接种法

  23. （1）琼脂斜面接种法 • 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物； • 培养基：斜面固体培养基； • 用途：扩增细菌、保存菌种；或用于观察其某些生化特性。

  24. 琼脂斜面培养基接种法

  25. （2）液体接种法 • 菌种：葡萄球菌或大肠埃希菌、枯草杆菌等普通琼脂培养物； • 培养基：液体培养基； • 接种方法：液体接种法。 • 从斜面菌种接入液体培养液；从液体培养液接入液体培养液； • 用途：扩增细菌，用于观察细菌的生长特性或测定其生化特性。

  26. （3）半固体穿种接种法 • 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物； • 培养基：半固体培养基 • 接种方法：穿刺接种法。用接种针垂直地穿入培养基中心至底部；然后沿着原接种线将针拔出。 • 用途：检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。

  27. 三、细菌培养法 （一）实验器材：恒温培养箱 （二）实验方法 • 一般培养（需氧培养）： • ★培养温度： 35~37℃ • ★培养时间：18～24h 将已接种好细菌的培养基置于35~37℃的恒温培养箱中，经18~24h培养后，观察细菌生长现象。 • 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱 • 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等

  28. 细菌在固体培养基中的生长现象 • 菌落： • 定义：指单个细菌在平板培养基上37℃18-24h的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌集团。 • 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 • 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） • 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。

  29. 菌落与菌苔

  30. 菌落（R型） 菌落（S型） 菌苔

  31. 菌落的形态特征有助于细菌的鉴别

  32. 细菌在液体培养基中的生长现象 • 混浊：大多数细菌 • 沉淀：多见于链状排列的细菌 • 菌膜：多见于需氧菌

  33. 细菌在半固体培养基中的生长现象 • 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 • 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。

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