Bacterias anaerobias esporuladas y no esporuladas
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Bacterias Anaerobias Esporuladas y no Esporuladas. Cátedra Microbiología General FACENA – UNNE 2010. Objetivo.

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Bacterias Anaerobias Esporuladas y no Esporuladas

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Presentation Transcript


Bacterias Anaerobias Esporuladas y no Esporuladas

Cátedra Microbiología General

FACENA – UNNE

2010


Objetivo

Conocer las principales características biológicas de los gérmenes anaerobios esporulados y no esporulados, su capacidad para producir infecciones, las posibilidades diagnósticas y las medidas profilácticas


AnaerobiosNo EsporuladosCaracterísticas generales

  • Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxígeno

  • Anaerobios estrictos: requieren un 0% de oxígeno para crecer

  • Anaerobios aerotolerantes: sobreviven hasta con 0,5% de oxígeno

  • Son exigentes para crecer, necesitan vitaminas y cofactores.

  • Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.

  • Producen infecciones oportunistas, generalmente endógenas.

  • Las infecciones generalmente son mixtas con bacterias aerobias.

  • Incluyen a varios géneros de cocos y bacilos, grampositivos y gramnegativos.


Bacterias AnaerobiasEfecto tóxico del oxígeno

  • Efecto tóxico directo

  • Formación de anión peróxido y superóxido

  • Oxidación de enzimas esenciales que contengan grupos SH-

  • Inhibición del metabolismo de flavoproteínas y NADH oxidasa

  • Imposibilidad para alcanzar potenciales redox bajos

  • Déficit o ausencia de catalasa y/o superóxido dismutasa (presente en aerotolerantes)


Factores de virulencia de bacterias anaerobias

  • Adherencia a las células

  • Polisacárido capsular

  • Endotoxina

  • Hialuronidasa, colagenasa, fibrinolisina, neuraminidasa

  • Exotoxinas


Flora Normal Anaerobia

  • Piel: la flora normal se limita a los folículos pilosos.

  • Boca y faringe: flora muy abundante. Las encías son un nicho muy importante. Se asocian con infecciones a nivel de cabeza y cuello.

  • Intestinos: hay 1.000 veces más anaerobios que aerobios. Degradan sales biliares, sintetizan vitaminas y se oponen a la colonización por otras bacterias. Se relacionan con infecciones abdominales.

  • Vagina: Predominan los Lactobacillus en condiciones normales. Alteraciones hormonales y tratamientos con antibióticos alteran la flora con sobrecrecimiento de otras bacterias (vaginosis). Se asocian con aborto séptico.


Flora normal anaerobia

Cavidad oral y TRS:

Bacilos gram-negativos: Porphyromonas Prevotella, Fusobaterium nucleatum – Cocos gram-positivos Actinomyces

100:1 (ANA/AER)

Piel:

Propionibacterium acnes

Peptostreptococcus

Tracto genital femenino:

Bacilos gram-negativos: Porphyromonas Prevotella bivia-disiens Cocos gram-positivos Lactobacillus - Clostridium

Colon

Bacilos gram-negativos: Bacteroides grupo fragilis– Cocos gram-positivos - Clostridium, Eubacterium, Bifidobacterium

1000:1 (ANA/AER)


Cocos Gramnegativos Anaerobios

Género Veillonella

V. parvula


Cocos Grampositivos Anaerobios

Género Peptostreptococcus

P. anaerobius

P. magnus

P. micros

P. asaccharolyticus


Bacilos Grampositivos Anaerobios

Género Actinomyces

A. israelii

A. odontolyticus

A. viscosus

Género Eubacterium

E. lentum

E. aerofaciens

Género Lactobacillus

L. cassei

L. bulgaricus

L. yoghurtii


Bacilos Grampositivos Anaerobios

Género Propionibacterium

P. acnes

P. propionicum

P. granulosum

P. avidum

Género Bifidobacterium

B. dansium

Género Mobiluncus

M. curtisii

M. mullieris


Bacilos Gramnegativos Anaerobios

Género Bacteroides

B. fragilis

B. thetaiotaomicron

Género Porphyromonas

P. gingivalis

P. endodontalis

Género Prevotella

P. melaninogenica

P. bivia

Género Fusobacterium

F. nucleatum

F. necrophorum


Características de las infecciones por Anaerobios

ENDOGENAS

  • Polimicrobianas

  • Relacionadas a mucosas

  • Sinérgicas


Características de las infecciones por Anaerobios

EXOGENAS

  • Clostridiales

  • No Clostridiales


Infecciones por anaerobios:

  • Odontógenas – Cabeza y cuello

  • Abdominales

  • Piel y partes blandas

  • Ginecológicas: vaginosis, abscesos vaginales, aborto séptico, etc

  • SNC: abscesos cerebrales, empiema subdural

  • Oseas


Infección por anaerobios: Factores predisponentes

  • Factores predisponentes:

    • Enfermedades vasculares

    • Shock

    • Traumatismos

    • Cirugías

  • Cuerpos extraños

  • Enfermedades malignas

  • Edema

  • Infecciones previas


Infecciones por anaerobios

Características

  • Olor pútrido de las secreciones purulentas

  • Proximidad a mucosas

  • Gas en el sitio de la infección

  • Necrosis tisular o gangrena

  • Tratamiento previo con aminoglucósidos (inactivos frente a anaerobios)

  • Infección secundaria a mordeduras animales o humanas

  • Paciente portadora de Dispositivo Intrauterino

  • Maniobras comprometedoras (cirugía abdominal o aborto provocado)

  • Evolución lenta de la enfermedad

  • Coloración negra de la herida

  • Gránulos de azufre (actinomycosis)

  • No desarrollo en aerobiosis de los microorganismos observados en el Gram.


Infecciones por anaerobios

  • Son polimicrobianas y endógenas, por lo tanto su etiología puede ser predecible de acuerdo a la localización.

  • El hallazgo de un patógeno determinado permite sospechar cual es el foco de infección

  • Las características de la muestra nos permiten sospecharlos.

  • Tratamiento basado en: debridamiento, drenaje y ATB


Infecciones por anaerobios

Prevención

  • Uso racional de los antimicrobianos

  • Tratamiento de las enfermedades de base

  • Minimizar el uso de técnicas invasivas

  • Disminuir el tiempo de internación

  • Tratar rápidamente las heridas profundas, especialmente las punzantes o secundarias a mordeduras humanas y de animales


Recolección,

transporte y

conservación de muestras


Muestras NO aptas para cultivo anaerobios

  • Heces o materiales que estén contaminados con contenido intestinal (excepción C. difficile)

  • Exudados vaginales o cervicales

  • Orinas tomadas por micción espontánea o sonda

  • Esputos, secreciones nasofaringeas o materiales tomados por broncoscopía sin protección.


Muestras aptas para cultivo anaerobios

  • Líquidos normalmente estériles: LCR, pleural, peritoneal, etc.

  • Muestras tomadas por punción a través de piel sana (Heridas, hematomas, colecciones, punción suprapúbica, etc.)

  • Muestras de endometrio, pulmón, etc., tomadas por biopsia o cepillos recubiertos.

  • Biopsias (de sitios sin flora habitual)


Transporte y conservación de muestras

  • Las muestras líquidas, purulentas y de volumen considerable pueden transportarse en tubos estériles.

  • Las colecciones claras o de volúmenes reducidos pueden inyectarse en frasquitos con tapón de goma y atmósfera inerte, sin introducir aire.

  • No es conveniente el sistema de transporte de muestras en jeringas, porque permite la difusión del oxígeno al interior de la muestra.

  • Los raspados, hisopados y piezas de tejido pequeñas pueden colocarse en tubos que contengan medio de Stuart, Cary-Blair, pre-reducido.

  • Las piezas de tejido con un volumen mayor a 1 cm3, pueden transportarse en recipientes estériles, sin conservantes.


Transporte de Muestras

  • Frascos para hemocultivos anaeróbicos

  • Jeringa y aguja con tapón de goma

  • (No se aconseja por cuestiones de bioseguridad)

  • Frascos con medios prerreducidos


Tiempo de transporte sugerido según: volumen, método de conservación y tipo de muestra


Conclusiones

  • Obtener las muestras en forma adecuada

  • Protegerlas de los efectos deletéreos del oxígeno

  • Mantenerlas a temperatura ambiente

  • Las mejores muestras son las obtenidas de cavidades cerradas a través de tejidos no contaminados


Bacterias anaerobias: Diagnóstico microbiológico

e identificación


Cultivo de anaerobios: Muestra

  • Características macroscópicas: aspecto, olor, fluorescencia, etc

  • Observación microscópica:

    flora polimicrobiana, leucocitos, orienta terapia empírica, etc.


Gérmenes Anaerobios - Diagnóstico

Sospecha clínica

Toma de Muestra

Coloración de Gram

Siembra en Agar sangre con y sin ATB

Incubar 48 hs a 37ºC en anaerobiosis

Morfología colonial y Gram

Pruebas bioquímicas


Diagnóstico microbiológico:Cultivo

  • Utilizar medios frescos, recientemente preparados o pre-reducidos

  • Procesar rápidamente

  • Evaluar qué microorganismos buscamos para elegir el medio: suplementos específicos


Diagnóstico microbiológico:Medios

  • Medios sólidos NO selectivos: (Agar base enriquecido: Brucella, Columbia, Schaedler, etc)

    • Agar Base + Vit K (1 mg/ml) + Hemina (5 mg/ml) + sangre lacada al 5% (BHKA)

  • Medios sólidos selectivos:

    • BHKA + KAN (30 a 50 µg/ml)

    • BHKA + VAN (5 µg/ml)

  • Medios líquidos: Resguardo (“Backup”)

    • Caldo BHI, tioglicolato suplementado con cisteína, Vit K y hemina.


Cultivo de anaerobios: Atmósfera

  • Métodos para generar atmósfera anaerobia:

    • Mezcla de gases: Se utiliza una mezcla compuesta por 5-10% H2, 5-10% CO2 y 80 a 90% de N2,

    • Generadores comerciales: Hay diferentes sistemas comerciales:

      • Con catalizador (Gas Pack, BBL; Anaerobic Gas generator, Oxoid):BH4Na y ácido cítrico y una tableta de HCO3Na para generar H2 y CO2

      • Sin catalizador: mezcla de reactivos que fijan el O2 y generan CO2.

        ** Activados con agua: Anaerocult, Merck; Britania.

        ** Activan al contacto con el aire: Anaerogen, Oxoid; Key Scientific, Mitsubishi; Genbox, Biomerieux


Cultivo de anaerobios: Atmósfera

  • Sistemas de incubación:

    a)Jarras anaerobias

    b)Cámara anaerobia

    c)Bolsas anaerobias


Obtención de atmósfera anaerobia


Obtención de atmósfera anaerobia

Cámara Anaerobia


Cultivo de anaerobios: Incubación - Controles

  • Incubación:

    • al menos 48 hs a 35-37ºC, hasta 5 a 7 días.

    • Atmósfera anaerobia (< 1% O2)

  • Control de anaerobiosis

    • Indicadores de Ox-Red: resarzurina, azul de metileno

    • Recuperación de anaerobios estrictos:

      F. nucleatum, BGN pigmentados, etc.


Bacterias anaerobiasIdentificación


Identificación de Anaerobios: Limitaciones técnica

  • Bacterias fastidiosas

  • Requerimientos culturales especiales

    • Atmosfera (<1% O2)

    • Nutrientes

    • Tiempo de desarrollo

    • Metabolismo (algunos inactivos)


CULTIVO DE ANAEROBIOS: Identificación

Procedimiento a seguir con cada colonia:

Prueba de tolerancia

al oxígeno (CA)

(en agar chocolate en

Lata con vela)

Descripciónmacroscópica

Colonia

Coloración de Gram


2- Bacilos gram positivos:

Esporulados:

GlucosaCAMP reversa

GelatinaUrea

Lipasa Lecitinasa

Indol

No esporulados:

Catalasa

Nitrato

Indol

4- Cocos gram positivos:

SPS Indol

Nitrato Esculina

Catalasa Urea

3- Cocos gram negativos:

Nitrato

Fluorescencia (UV)

Tablas

Específicas

IDENTIFICACION PRESUNTIVA

Gram

1- Bacilos gram negativos:

Discos potencia especial :

Vc 5µg+ Cs 10µg + Ka 1000 µg

Indol

Bilis

Nitrato

Esculina

Catalasa


Identificación


IDENTIFICACION: CONCLUSIONES

  • Buena observación micro y macroscópica

  • Siempre hacer pruebas básicas de entrada

  • Utilizar pruebas rápidas en spot o enzimas preformadas (inóculo alto)

  • Asegurarse buen desarrollo en pruebas de crecimiento.


Anaerobios Esporulados


Características generales

  • Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxígeno

  • Resisten hasta 120ºC, la desecación y cambios de pH

  • Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.

  • Se los encuentra ampliamente distribuidos en el agua, el suelo y las plantas

  • Producen infecciones oportunistas.

  • Su acción se manifiesta por la producción de potentes exotoxinas.

  • Incluyen al género Clostridium con varias especies.

  • Las infecciones son muy típicas y el diagnóstico generalmente es clínico.


Anaerobios EsporuladosClasificación

  • Neurotóxicos

    • Clostridium tetani

    • Clostridium botulinum

  • Histotóxicos

    • Clostridium perfringens

    • Clostridium septicum

  • Enterotóxicos

    • Clostridium difficile

    • Clostridium perfringens


Clostridium tetani


Clostridium tetani

  • Se encuentran en el suelo e intestino del hombre y animales.

  • Las esporas ingresan a través de heridas.

  • Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina.

  • La forma vegetativa produce una exotoxina (tetanoespasmina).

  • La toxina difunde por vía neural hasta las neuronas motoras.

  • En SNC bloquea la liberación de glicina y GABA. A nivel periférico inhibe la liberación de acetilcolinesterasa dando como resultado la estimulación incontrolada de los músculos esqueléticos.

  • El paciente muere por parálisis de los músculos respiratorios.


Clostridium tetani


Clostridium tetani - Prevención

  • Se previene vacunando con el toxoide tetánico (Vacuna DPT o antitetánica sola).

  • Se aplica a los 2, 4 y 6 meses. Primer refuerzo a los 18 meses y segundo refuerzo al ingreso escolar. Cada 10 años deben aplicarse refuerzos. La embarazada debe vacunarse al 5to y 7mo mes de embarazo.

  • Deben lavarse perfectamente las heridas profundas, principalmente las producidas por material herrumbrado y las contaminadas con tierra o materia fecal.

  • En caso de heridas puede emplearse profilácticamente la antitoxina, la cual se administra en forma conjunta con la vacuna.


Clostridium botulinum


Clostridium botulinum

  • Se encuentran en la tierra y sedimentos acuáticos

  • La fuente más común de intoxicación es la ingestión de conservas o fiambres caseros.

  • Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina en el alimento y la forma vegetativa produce una exotoxina.

  • La toxina ingresa por vía digestiva y difunde por vía humoral hasta las neuronas motoras.

  • La toxina bloquea la liberación de acetilcolina dando como resultado una parálisis fláccida de los músculos esqueléticos.

  • El paciente muere por parálisis de los músculos respiratorios.


Clostridium botulinum


Clostridium botulinum - Prevención

  • Deben cumplirse estrictamente las normas de seguridad en la manipulación de los alimentos

    en la industria alimentaria.

  • Debe educarse a la población general respecto

    de los procedimientos seguros de envasado de los alimentos.

  • En caso de dudar del origen de los alimentos, deben calentarse 10 minutos a 100ºC para destruir la toxina.

  • No debe administrarse miel a lactantes menores de 1 año de edad (Botulismo del lactante).

  • No existe vacuna de aplicación universal.


Aplicaciones de la Toxina botulínica tipo A: BotoxIndicaciones terapeúticas

  • Espasticidad asociada con accidente cerebro vascular.

  • Tratamiento en pacientes con parálisis cerebral

  • Distonía cervical (tortícolis) en adultos

  • Blefarospasmo y espasmo hemifacial

  • Corrección del estrabismo

  • Tratamiento focalizado de la hiperhidrosis axilar.


Aplicaciones de la Toxina botulínica tipo A: BotoxIndicación cosmética

Corrección estética facial para remoción de arrugas glabelares.


Clostridium perfringens


Clostridium perfringens

  • Se encuentran en el suelo e intestino del hombre y animales.

  • La bacteria ingresa a través de heridas en forma endógena o exógena.

  • Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina.

  • La forma vegetativa produce varias exotoxinas

  • Las toxinas difunden por contigüidad produciendo necrosis tisular y abundante cantidad de gas.

  • La infección se manifiesta como gangrena gaseosa cuando afecta al tejido subcutáneo o como mionecrosis cuando afecta al tejido muscular

  • Con frecuencia debe amputarse el miembro afectado.


Clostridium perfringens


Clostridium perfringens


Clostridium perfringens - Prevención

  • No existe vacuna de aplicación universal.

  • Deben extremarse las medidas de asepsia durante las cirugías abdominales o al aplicar inyecciones intramusculares profundas.

  • Deben tratarse rápidamente con antibióticos las heridas contaminadas.

  • Cámaras hiperbáricas.


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