1 / 24

Špecifická humorálna imunita

Špecifická humorálna imunita. Imunológia – 2. blok. Špecifická humorálna imunita schopnosť organizmu reagovať na cudzorodý antigén špecifickou imunitnou odpoveďou protilátkového typu Protilátky : IgA IgD IgE IgG IgM. Stanovenie IgG radiálnou imunodifúziou (RID):.

valin
Download Presentation

Špecifická humorálna imunita

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Špecifická humorálna imunita Imunológia – 2. blok

  2. Špecifická humorálna imunita • schopnosť organizmu reagovať na cudzorodý antigén špecifickou • imunitnou odpoveďou protilátkového typu • Protilátky: IgA • IgD • IgE • IgG • IgM

  3. Stanovenie IgG radiálnou imunodifúziou (RID): Princíp: Molekuly IgG (v sére pacienta) difundujú z jamiek v agaróze do okolia a reagujú s protilátkou proti IgG, ktorá je inkorporovaná v agaróze. Výsledkom interakcie je precipitačný prstenec. Veľkosť prstenca zodpovedá množstvu stanovovanej protilátky (Ab) v sére. Pomocou štandardov možno zostrojiť kalibračnú krivku a odčítať množstvo IgG v sére pacienta.

  4. Materiál: preparáty RID, RID šablóny, milimetrový papier Postup: 1. Zmerať priemery prstencov séra a štandardov. 2. Zostrojiť kalibračnú krivku. 3. Vypočítať množstvo protilátky IgG v sére. RID je imunoprecipitačná metóda, založená na interakcii Ag-Ab, pri ktorej vzniká zrazenina. Pre obmedzenú citlivosť sa stanovuje IgG, IgA, IgM. Pre stanovenie nízkych hladín, ako sú IgD a IgE, nie je vhodná (tam RIA, ELISA).

  5. RID

  6. ELISA = enzymelinkedimmunosorbentassay • je viac typov (sendvičová, priama, nepriama,...) • buď sa dokazuje prítomnosť špecifických protilátok • alebo prítomnosť určitého antigénuvo vyšetrovanej • vzorke

  7. ELISA na detekciu protilátok IgE: Princíp:ELISA je sérologická metóda kvantifikácie Ag alebo Ab prostredníctvom kovalentne nadviazaného enzýmu (peroxidáza, alkalická fosfatáza) : množstvo farebného produktu sa stanoví fotometricky

  8. Pomôcky: 1. komerčné stripy (v jamkách adherovanémonoklo- nové protilátky + anti-IgE + blok 3% BSA) 2. premývací roztok 3. konjugát (Ab značená chrenovou peroxidázou) 4. substrát (H2O2 + indikátor farebnej zmeny = TMB) TMB = tetrametylbenzidín 5. STOP roztok (H2SO4) 6. vzorky séra

  9. Postup: 1. Do jamiek 50 μl séra a inkubovať 45 min. pri 37 °C. 2. Premyť 2 x 200 μl premývacieho roztoku a vytriasť dosucha. 3. Pridať 50 μl konjugátu a inkubovať 30 min pri 37 °C v termostate. 4. Ako krok 2. 5. Pridať 50 μl substrátu a čakať 2 min. na farebnú zmenu. 6. Pridať STOP roztok a zmerať absorbanciu na ELISA reader-i.

  10. IMUNOKOMPLEXY • väzba Ab-Ag • v nadbytku môžu indukovať zápal (ukladanie IK do steny • ciev, synovie kĺbov, glomerulov, plexuschorioideus a pod.

  11. Hodnotenie cirkulujúcich imunokomplexov (CIK): • Zmerať absorbanciu prázdnej mikroplatničky. • Zo vzorky pridať 20 μl do jamky A1 a B1. • Do A1 pridať 150 μl borátového tlmivého roztoku. • Do B1 pridať 150 μl polyetylénglykolu (PEG). • Premiešať a inkubovať 60 min. pri laboratórnej teplote. • Zmerať absorbanciu pri 450 nm. • Výpočet hodnoty CIK.

  12. Najprv vypočítať výslednú hodnotu absorbancie v danej jamke ako rozdiel absorbancie plnej jamky a prázdnej. POTOM: (výsledná hodnota B1 – výsledná hodnota A1) x 1000 Referenčné hodnoty:do 50

  13. Metóda IMUNOFIXÁCIE • pri gamaglobulinopatiách, Waldenströmovejmakroglobulinémii, myelómoch • netvoria sa niektoré imunoglobulíny v dostatočnom množstve, alebo je chyba v produkcii Ig reťazcov • detekcia a typizácia monoklonálnychAb alebo Ig v sére alebo moči • precipitácia viditeľná voľným okom • náhrada proteínovej elektroforézy, lebo je rýchlejšia, citlivejšia, jednoduchšie čitateľná a interpretovaná

  14. Detekcia autoprotilátokNepriamy imunofluorescenčný test • IFA je podobná ELISA metóde, môže sa stanovovať aj na sklíčku • na značenie sa používa fluorochróm (pri ELISE enzým, ktorý po pridaní substrátu indukuje farebnú zmenu) • fluorescenčný mikroskop

  15. Postup:1. Na sklíčko „potiahnuté“ antigénom sa kvapne sérum. 2. Inkubuje sa 30 min. vo vlhkej komôrke. 3. Premytie. 4. Aplikácia antisérakonjugovaného s fluorochrómom (napr. SwAHu/Ig). 5. ako krok 2 6. Premytie. 7. Odčítanie preparátu vo fluorescenčnom mikroskope.

  16. infikované bunky fluoreskujú na tmavom pozadí • IFA sa využíva pri niektorých infekciách, • autoimunitných ochoreniach (napr. štítnej žľazy,...)

  17. Ďakujem za pozornosť

More Related