第一次加强免疫
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第一次加强免疫. 实验目的 1. 掌握多克隆抗体的应答特点 2. 理解加强免疫的作用和必要性 3. 加强动物技能. 实验原理. 体液免疫的一般规律 在抗原诱导下,浆细胞产生的抗体经淋巴液和血液流向全身,血液中抗体的浓度随应答时间的持续而增高。在初次接受抗原刺激中,机体发生 初次应答 ,再次接受相同抗原刺激,机体产生二次应答或称 回忆应答 。. 初次应答和再次应答的特点和比较. 加强免疫的作用和必要性. 再次应答,增加抗体量 增强抗体的亲和力. 材料和试剂. 试剂: LDL 抗原溶液 ( 或牛血清白蛋白 ) , 弗氏不完全佐剂

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Presentation Transcript


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第一次加强免疫

  • 实验目的

    1.掌握多克隆抗体的应答特点

    2.理解加强免疫的作用和必要性

    3.加强动物技能


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实验原理

  • 体液免疫的一般规律

    在抗原诱导下,浆细胞产生的抗体经淋巴液和血液流向全身,血液中抗体的浓度随应答时间的持续而增高。在初次接受抗原刺激中,机体发生初次应答,再次接受相同抗原刺激,机体产生二次应答或称回忆应答。


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初次应答和再次应答的特点和比较


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加强免疫的作用和必要性

  • 再次应答,增加抗体量

  • 增强抗体的亲和力


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材料和试剂

  • 试剂:LDL抗原溶液(或牛血清白蛋白), 弗氏不完全佐剂

  • 材料:注射器,研钵,消毒棉球


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实验步骤

  • 免疫乳剂的制备(注射器法)

    取抗原溶液(基础免疫的2/5)1ml(浓度为0.5mg/ml)+弗氏不完全佐剂1ml制备成油包水状态.

  • 免疫

    将制成的乳剂吸入注射器,在兔子背部及颈部皮下多点注射,每点约0.2ml.


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实验二 免疫凝集试验


Agglutination

凝集反应(agglutination)

  • 是指颗粒性抗原,例如细菌、红细胞、螺旋体、细胞性抗原,或可溶性抗原(或抗体)与载体颗粒结合成致敏颗粒后,与相应的抗体(或抗原)在适量的电解质存在的条件下,经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集现象。


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凝集反应的特点

  • 颗粒性抗原

  • 致敏颗粒

    (可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合)

  • 电解质的存在

  • 肉眼可见的凝集现象


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凝集反应的发生分两阶段:

①抗原抗体的特异结合

②出现可见的颗粒凝集


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凝集反应的类型

玻片凝集试验:ABO血型

直接凝集试验

试管凝集试验:外斐试验,肥达试验

正向间接凝集试验

反向间接凝集试验

间接凝集抑制试验

间接凝集试验

协同凝集试验

间接血凝试验

胶乳凝集试验

明胶凝集试验


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  • 根据凝集反应中抗原的性质,反应的方式分为:

    ①直接凝集反应

    ②间接凝集反应


Direct agglutination

直接凝集反应(direct agglutination)

细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原,在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集,称为直接凝集反应。参加反应的颗粒性抗原称为凝集原(agglutinogen),抗体称为凝集素(agglutinin) 。


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玻片法:(定性)

  • 细菌鉴定

  • ABO血型的鉴定

    试管法:(半定量)

  • 肥达试验(Widal test)--伤寒

  • 外斐试验(Weil-Felix test)--立克次体

  • 交叉配血试验


Indirect agglutination

间接凝集反应(indirect agglutination)

  • 将可溶性抗原(或抗体)先吸附或偶联与免疫无关大小适当的颗粒性载体的表面,使之成为致敏载体颗粒,然后与相应抗体(或抗原)作用,在适宜的电解质存在的条件下,出现特异性凝集现象,称间接凝集反应(indirect agglutination)或被动凝集反应(passive agglutination)。其敏感度高于直接凝集反应和沉淀反应。


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常用载体:

  • RBC

  • 聚苯乙烯胶乳(polystyrene latex)

  • 明胶颗粒

  • 活性炭

  • 皂土(bentonite)

  • 火棉胶


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间接凝集反应分类依据

  • 根据致敏载体用的是抗原(正向)或抗体(反向)

  • 根据载体(RBC,胶乳,明胶)

  • 根据凝集反应的方式(间接凝集试验,间接凝集抑制试验,协同凝集试验)


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间接反应的常见类型

  • 间接凝集试验

  • 间接血凝试验

  • 胶乳凝集试验

  • 明胶凝集试验

  • 间接凝集反应的应用


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1、(正向)间接凝集试验


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2 反向间接凝集试验


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3、间接凝集抑制试验


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本次实验内容

  • 一、第一次加强免疫

  • 二、ABO血型鉴定


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实验目的与要求

玻片凝集法-ABO血型鉴定

  • 掌握凝集反应的原理与类型

  • 掌握玻片凝集法操作与结果判断

  • 熟悉ABO血型鉴定的原理与操作


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实验原理

  • 根据IgM类特异性血型抗体与红细胞上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理,用已知IgM类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应(室温),若出现凝集想象,表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原,从而判断和鉴定被检者的血型。


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实验材料与方法

  • 试剂:抗A血清,抗B血清

  • 材料:玻片,采血针,消毒干棉球,酒精棉球等


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实验方法与步骤

1、标记玻片:取玻片一张,一分为二,分 别标记为抗A,抗B。

2、采血:用酒精棉球消毒被检者左手无名指或中指内侧,用采血针刺破皮肤,用干棉球擦去第一滴血,稍加挤压,使其流出第二滴血,分别滴到玻片上抗A、抗B的标记处。


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3、加抗血清:滴加抗A,抗B血清于玻片血滴上。

4、混匀:前后左右摇动,观察有无血细胞凝集出现。

5、结果:记录受检者红细胞凝集情况及血型鉴定结果


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ABO血型结果判断


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试管凝集试验(介绍)

  • 多用于半定量试验,原则上是用定量抗原悬液与一系列倍比稀释的受检血清混合,在保温静置后观察结果,以判定受检血清中有无相应抗体及其效价。

  • 常有肥达试验,外-斐试验,交叉配血试验等。


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思考题

  • 凝集试验有哪些?可用于检测的原理是什么?


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