经口急性毒性试验
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经口急性毒性试验. 实验原理. 在 24 小时内一次或多次给予受试化学物,观察和了解实验动物产生的急性毒性及其强度、中毒死亡特征以及可能原因。 根据受试物引起实验动物死亡与染毒剂量之间的剂量 - 反应关系,计算半数致死量 ( LD 50 ) 。. 实验目的. ◆ 掌握化学物毒性评价试验方法 ◆ 掌握经口灌胃技术 ◆ 学习中毒症状观察方法。. 实验内容. 试验动物的选择和性别鉴定。 试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 急性毒性试验常用染毒途径和方法。 急性毒性反应的观察和 LD 50 计算。. 材料和试剂. 实验动物 :健康小鼠

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经口急性毒性试验

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Presentation Transcript


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经口急性毒性试验


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实验原理

在24小时内一次或多次给予受试化学物,观察和了解实验动物产生的急性毒性及其强度、中毒死亡特征以及可能原因。

根据受试物引起实验动物死亡与染毒剂量之间的剂量-反应关系,计算半数致死量( LD50)。


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实验目的

◆ 掌握化学物毒性评价试验方法

◆ 掌握经口灌胃技术

◆ 学习中毒症状观察方法。


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实验内容

  • 试验动物的选择和性别鉴定。

  • 试验动物的称重、编号以及随机分组方法。

  • 急性毒性试验常用染毒途径和方法。

  • 急性毒性反应的观察和LD50计算。


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材料和试剂

  • 实验动物:健康小鼠

  • 器 材:小鼠灌胃针、电子天平

  • 动物体重计、外科剪刀和镊子

  • 试 剂:受试物


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实验动物编号的标记方法

  • 颜料涂擦被毛编号法(常用于大小鼠):

    红色:0.5%中性红或品红溶液

  • 黄色:3-5%苦味酸溶液(水)

  • 80-90%苦味酸酒精饱和溶液

  • 咖啡色:2%硝酸银

  • 黑色:煤焦油的酒精溶液


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实验动物编号的标记方法

单 色 法

大小鼠标记方法(单色法n<10)


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实验动物编号的标记方法

单色法标记原则:单色法编大于10的号码时,我们规定顺时针旋转,后一位必需大于前一位数,例如:可以编,12,13,14……19,但不能编10,11,20,21,22,30,31,32,33,等,以此类推。100以内最大能编89号。

大小鼠标记方法(单色法n>10)


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实验动物编号的标记方法

双 色 法

大小鼠标记方法(双色法n<10)


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实验动物编号的标记方法

红色表示十位数:

头部染红色为10 左前肢为20 左腰部为30 黄色表示个位数。

大小鼠标记方法(双色法n>10)


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实验动物编号的标记方法

其它标记方法

  • 烙印编号法;

  • 体内埋号编号法;

  • 耳孔编号法;

  • 挂牌编号法;


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实验动物

预实验

秤体重

确定大致的

LD0和LD100

编号

分组

(随机数字表法)

组数和剂量

灌胃操作

中毒症状观察和死亡纪录

计算LD50

实验步骤


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lgLD100 – lgLD0

d =

n-1

确定组距的方法

式中:d---为组距

n---为设计时确定的剂量组数


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急性毒性实验记录

受试物 名称: 提供单位:染毒剂量:mg/kg 染毒途径:

动物种属品系: 动物来源: 合格证号: 室温: 相对湿度:

组别

染毒剂量

(mg/kg)

动物编号

性别

体重

(g)

染毒时间

症状

及出现时间

死亡时间

体重记录(g)

……


Ld 50

LD50的计算—寇氏法

寇氏法

  • Karber法或平均致死量法,是依据剂量对数与死亡率呈S型曲线所包括的面积推导出死亡率为50%的剂量;

  • 此法简单,准确率高,但实验设计要求每个染毒组实验动物数相同,各计量组距呈等比级数,死亡率呈常态分布,最低剂量组死亡率<20%,最高剂量组>80%。


Ld 501

LD50的计算—寇氏法

计算公式:

lgLD50=1/2Σ(Xi + Xi+1)(Pi+1 - Pi)

式中: (Xi + Xi+1) ---- 为相邻两个试验组剂量之和

(Pi+1 - Pi) ---- 为相邻两组死亡率之差。

各组剂量为等比级数时简化为

lgLD50=Xm - d/2Σ(pi+1 + pi)

式中Xm为最高剂量对数;d为相邻两组剂量对数之和。


Ld 50 95

LD50标准差和95%可信限计算方法

Pi(1- Pi)

SlgLD50=d Σ

n- 1

式中: Pi ---- 死亡率,

n ---- 每组动物数

LD5095%可信区间=Lg-1(lgLD50±1.96S lgLD50


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急性毒性评价

根据实验动物的中毒症状、出现死亡的时间和LD50,参照化学物质毒性分级标准,评价受试物的急性毒性大小及毒性特征。


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注意事项

  • 灌胃染毒时要求动物保持空腹状态,因此染毒前应禁食(不禁水)6~10小时。灌胃后至少2~3小时后才能喂食。油剂比水溶液要求限制喂食的时间更长些。

  • 相同剂量的受试物,若以不同浓度给药,死亡情况会有所不同。常用的方法是将受试物体积固定,根据实验设计的剂量将受试物配制成不同浓度的溶液进行灌胃。

  • 通常灌胃体积以体重的1%~2%计算,最多不超过3%,即每100g体重溜胃l~2ml,最多不超过3ml。根据实际经验得出的各种实验动物灌胃量的极限是:小鼠0.5~1ml,大鼠4~5m1。


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思考与讨论

急性毒性资料在评价环境

污染物毒性中的意义?


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Thank You!


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