::.: Mecanismo del acortamiento de la longevidad asociado a la deleción

1. ::.: Mecanismo del acortamiento de la longevidad asociado a la deleción de la Glucógeno Fosforilasa (GPH1) en levadura: Posible participación de Gph1 en una vía de regulación de la supervivencia Saccharomyces cerevisiae en fase estacionaria . deja de dividirse y sobrevive un tiempo en ese estado (longevidad cronológica) . está fuertemente condicionada a la resistencia al stress oxidativo . cambia el patrón de expresión génica (vías de señalización) (escenas del capítulo anterior) . deleciones de enzimas del metabolismo de la glucosa . la falta de la glucógeno fosforilasa (GPH1) produce una cepacon menor longevidad, intolerancia al stress ...

2. ::. Metabolismo de glucosa en levadura efecto crabtree/warburg efecto pasteur

3. ::. Kinasas de la ‘señalización por glucosa’ Ras/Cyr/PKA Sch9 (homólogo de PKB/AKT) Tor(target of rapamycin) Snf(sucrose non fermenting, homólogo de AMPK) Longevidad cronológica ras2D y cyr1D, sch9D, tor1D (+) longevidad snf1D(-) longevidad sin glucosa  (-) actividad PKA (y Sch9) (-) fosforilación del activador transcripcional Msn2/4  translocación a núcleo

4. PLoS Biol 2007, 5(10): e261. ::. Kinasas de la ‘señalización por glucosa’ sin glucosa (-) actividad Tor  (-) fosforilación del activador transcripcional Msn2/4  puede translocar

5. ::. Kinasas de la ‘señalización por glucosa’ PLoS Genet 2008, 4(1): e13.

6. Nuestra contribución…

7. ::. Efecto de la deleción de GPH1 en la supervivencia en fase estacionaria Free Radic Biol Med 2008, 45:1446-56.

8. ::. Efecto de la deleción de GPH1 en la supervivencia en fase estacionaria Evolución en el t de ROS y de enzimas antioxidantes durante el envejecimiento cronológico Free Radic Biol Med 2008, 45:1446-56.

9. ::. Efecto de la deleción de GPH1 en la supervivencia en fase estacionaria Niveles de RNAm de SOD1/2 gph1D presenta (+) acumulación de ROS durante su supervivencia en fase estacionaria, lo que se correlaciona con la (-) de su supervivencia. gph1D posee en esta fase (-) la expresión de enzimas antioxidantes. Free Radic Biol Med 2008, 45:1446-56.

10. ::. Efecto de la deleción de GPH1 en la supervivencia en fase estacionaria Free Radic Biol Med 2008, 45:1446-56.

11. Cómo podría explicarse el efecto ‘regulatorio’ de Gph1 en la defensa a stress y la supervivencia?

12. complejo proteico conteniendo a Gph1, la subunidad activadora (Snf4) y las subunidades regulatorias (Sip1/2 y Gal83) de la quinasa Snf1.

13. ::. Kinasas de la ‘señalización por glucosa’ Snf1 complejo de 3 subunidades se activa en ausencia de glucosa (activa ó desreprime ‘genes metabólicos’) en mamíferos AMPK participa en la regulación del metabolismo energético y está involucrada en regulación de la proliferación y la apoptosis

14. la forma dimérica de Hxk2 interacciona con Reg1 e impide que sea desfosforilada por Glc7. switch de target: la fosfatasa desfosforila a Snf1 sin glucosa se fosforila Snf1 (+) actividad Snf1  (-) supresor transcripcional Mig1; (+) activadores transcripcionales (...)

15. ::. Kinasas de la ‘señalización por glucosa’ Snf1 y Snf4 se requieren para la señalización de Tor Snf1 activada fosforilaría a Msn limitando su entrada a núcleo (rol fisiológico?)

16. ::. Efecto de la deleción de SNF4 y GPH1 en la supervivencia en fase estacionaria Comparación de la longevidad en gph1D y snf4D gph1D y snf4D presentan (-) longevidad similar. ambas deleciones conducen a (+) acumulación de ROS durante la supervivencia en fase estacionaria.

17. Mig1-P Snf1 Mig1 SUC2 invertasa glucosa sacarosa ::. Efecto de la deleción de SNF4 y GPH1 en la supervivencia en fase estacionaria Comprobar la activación de la quinasa Snf1 en gph1D y snf4D durante la fase estacionaria gph1D y snf4D presentan (-) desrepresión. Gph1 podría participar en la activación del complejo de la quinasa Snf1. Esto explicaría su función regulatoria en la superivencia en fase estacionaria (respuesta a stress, etc). Free Radic Biol Med 2008, 45:1446-56.

19. ::. Escenas del próximo capítulo… P: Estudiando la vida, ¿ha encontrado usted un orden en el mundo? ¿hay una racionalidad que le sea inherente? R (Maturana): No hay una racionalidad en el mundo, no hay finalidad en él. Sólo hay un conjunto de interacciones... El mundo va a la deriva.

20. ::. CONICET-IPMont: Participación de Gph1 en la regulación de la supervivencia en fase estacionaria :…: ::.participación de Gph1 en la activación de Snf1? ::. cambios en la translocación de Snf1 y de Mig1 en respuesta a la deprivación de glucosa/nutrientes ante la disrupción del gen GPH1 MIG1-GFP gph1::LEU (pTL58_CalR-MARS/GFP-HDEL-pGPD ) SNF1-GFP gph1::LEU GAL83-GFP gph1::LEU :.:Gph1 en núcleo? Kap120? :.. localización de Gph1 en crecimiento exponencial y en fase estacionaria GPH1-GFP / GPH1-3GFP ::: es o no necesaria Kap120 para su localización y función en la regulación de Snf1 MIG1-GFP kap120::LEU GPH1-GFP kap120::LEU AK Lab (Montevideo, Marzo 2010)

21. ::. CONICET-IPMont:.: :.:Participación de Gph1 en la regulación de la supervivencia en fase estacionaria.:: acumulación de glucógeno (3 d, SC-1% glucose) WT MIG1-GFP gph1::LEU translocación de Mig1 SNF1-GFP gph1::LEU WT kap120D GAL83-GFP gph1::LEU Glc + des-represión de invertase (SUC2) en fase estacionaria 6 5 4 3 mg glc . (108 cells . h) -1 2 Invertase activity 1 0 w/o Glc WT snf1D gph1D kap120D AK Lab (Montevideo, Marzo 2010)

22. antiaging (Cabo Polonio, abril 2010)