实验三免疫标记技术

实验三免疫标记技术 Immunolabelling Technique

实验内容 1.ELISA(双抗体夹心法)检测HBsAg 2.录像：免疫标记技术

免疫标记技术的主要特点： 高度特异性、高度灵敏性抗原抗体反应示踪物标记特异性灵敏性免疫技术 + 标记技术免疫标记技术= 酶荧光素同位素

酶免疫技术 基本原理利用酶催化底物反应的生物放大效应,提高特异性抗原-抗体反应检测敏感性的一种免疫标记技术。 Ag + AbE AgAbE + 底物呈色反应

酶免疫技术的基本特点： ①标记后保留酶和抗原(抗体)的活性； ②酶促反应的专一性，保证了特异性； ③底物反应的放大作用，提高了敏感性； ④酶标试剂保存稳定； ⑤操作简便，安全易行。

常用酶及其底物 1.辣根过氧化物酶(HRP) 常用底物： (1)邻苯二胺(OPD)：反应显橙黄色，应避光，致癌性。 (2)四甲基联苯胺(TMB)：反应后呈蓝色，无需避光，无致癌性, 但水溶性差。 2.碱性磷酸酶(AP) 常用底物对硝基苯磷酸酯(p-NPP)：产物为黄色。 AP灵敏性高与HRP，但不易获得纯品，稳定性较HRP差，且价高，故应用不如HRP普及。

酶联免疫吸附实验 enzyme linked immunosorbent assay （ ELISA ）

实验目的 1.掌握酶联免疫吸附实验的基本原理； 2.熟悉利用双抗体夹心法测定HBsAg。

Y Y ELISA(双抗体夹心法)检测HBsAg原理示意

HBV感染后的血清学指标: HBsAg, HBsAb 乙肝表面抗原，存在于HBV感染者的血清中,为感染指标之一。 HBeAg, HBeAb HBcAb(IgG,IgM)

实验材料 1.HBsAg诊断试剂盒 2.HBsAg阳性对照品，阴性对照品，待检品

实验步骤 1.将已包被的孔编号，分别加入阳性对照血清、阴性对照血清及待测血清各1滴→在各孔内加入酶标抗体1滴→37℃温育30分钟。 2.各孔分别加入洗涤液(加满)---甩掉,然后在吸水纸上吸干(倒扣在吸水纸上),反复3次。 3.各孔内加入底物液A、B各1滴，轻轻摇动混匀，室温反应15分钟。 4.各孔内加入终止液1滴，观察结果。

结果判定 1.若待检孔无色,与阴性对照相同,则判定为阴性； 2.若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为阳性； 3.若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照孔之间则判定为弱阳性。

注意事项 1.加样应加在板孔的底部，避免产生气泡并迅速完成； 2.洗涤必须彻底，防止产生假阳性； 3.温育的时间要严格控制。

完成实验报告实验三酶联免疫吸附实验 双抗体夹心法检测HBsAg 1.实验材料 2.实验步骤 3.实验现象 4.实验结果（只记录待测血清结果） 5.实验讨论

实验三 免疫标记技术