1 / 4

DNA 片段的重组

DNA 片段的重组. 一、实验目的 通过本实验掌握 DNA 连接酶连接 DNA 的原理和操作方法，并了解影响连接酶作用的各种因素。 二、实验原理 T4 连接酶能催化双链 DNA 的 3’-OH 与 5’-P 末端之间生成磷酸二酯键，并能在不需要其他催化剂的条件下进行末端连接反应. 三、实验材料 已单酶切的 pBR322 质粒 DNA （或已单酶切的 实验六质粒 DNA ）、 T4 连接酶 四、实验步骤 取两个无菌离心管按如下顺序及要求操作：

steel-joseph
Download Presentation

DNA 片段的重组

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. DNA片段的重组

  2. 一、实验目的 通过本实验掌握DNA连接酶连接DNA的原理和操作方法，并了解影响连接酶作用的各种因素。 二、实验原理 T4连接酶能催化双链DNA的3’-OH与5’-P末端之间生成磷酸二酯键，并能在不需要其他催化剂的条件下进行末端连接反应

  3. 三、实验材料 已单酶切的pBR322质粒DNA （或已单酶切的 实验六质粒DNA）、T4连接酶 四、实验步骤 取两个无菌离心管按如下顺序及要求操作： ⑴ 加4ul的已酶切的质粒DNA，或加上次酶切的 pBR322 DNA 4ul。 ⑵ 加2ul的10×缓冲液（T4连接酶缓冲液） ⑶ 加无菌去离子水12ul或根据体积总数推算得6ul。 ⑷ 加T4 DNA连接酶2ul。 ⑸ 这样总反应体积20ul，振荡，离心3~5秒。 ⑹ 22ºC保温4小时，65度水浴10分钟。

  4. 五、作业 ⑴ 认真完成实验操作，为以后实验准备材料 ⑵ 分析可能影响连接酶作用的各种因素

More Related