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Lattato deidrogenasi

Lattato deidrogenasi. La lattato deidrogenasi ( LDH o latticodeidrogenasi ) è un enzima citoplasmatico con un'ampia distribuzione nei tessuti, dove catalizza l'interconversione del lattato a piruvato.

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Lattato deidrogenasi

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Presentation Transcript

  1. Lattato deidrogenasi La lattato deidrogenasi (LDH o latticodeidrogenasi) è un enzima citoplasmatico con un'ampia distribuzione nei tessuti, dove catalizza l'interconversione del lattato a piruvato.

  2. La lattato deidrogenasi è un tetramero con subunità appartenenti a due diversi tipi H ed M che, combinandosi fra loro in modo vario, danno origine a cinque diversi isoenzimi: LDH 1 e LDH 2 sono elevati nel cuore e negli eritrociti, LDH 4 e LDH 5 sono elevati nel fegato e nel muscolo. Tipo composizione localizzazione LDH1 HHHH miocardio, globuli rossi, rene LDH2 HHHM miocardio, globuli rossi LDH3 HHMM cervello rene LDH4 HMMM muscolo, fegato, globuli bianchi LDH5 MMMM muscolo scheletrico, fegato Questa specificità tissutale, rende il dosaggio della lattato deidrogenasi di grande interesse clinico per valutare la sede di un ipotetico danno tissutale.

  3. SAGGI CONTINUI • Sono più accurati e meno laboriosi di quelli discontinui • Per lo più usano metodi spettrofotometrici • SAGGI DIRETTI E + S  E + P(prodotto colorato - cromoforo o fluorescente – fluoroforo) Esempio: + NADH Piruvato Lattato Deidrogenasi (LDH) + NAD+ Lattato

  4. SAGGIO ENZIMATICO • Condizioni: • cinetica di ordine zero rispetto a S (velocità della reazione indipendente da S) • variazioni di S o P lineari nel tempo (cinetica temporale) • se S>>>Et la Legge di Michaelis e Menten: • Vo=K [Et] [S] / Km + [S] • ci assicura che Vo è direttamente proporzionale a [Et]

  5. Per rivelare e quantificare l’attività di un enzima in un campione biologico • Ci si avvale delle proprietà degli enzimi: • della specificità di azione • della proporzionalità tra Vel di reazione catalizzata e concentrazione dell’E nel miscuglio di • reazione (in condizioni di S saturante, vel ordine zero). • Si segue la reazione nel tempo e si registra l’Assorbanza nella zona di variazione costante • (tratto lineare) prendendo un intervallo di tempo Δt e si rileva ΔA. • ΔA/ Δt= è una misura della velocità della reazione enzimatica espressa come variazione di • assorbanza al minuto da cui si ricava l’attività enzimatica espressa come U/ml • Si devono calcolare le µmol di S trasformate in P al minuto = unità di attività enzimatica • Applico la legge di Lambert & Beer : • ΔA= ε ΔC l ε = coefficiente di estinzione molare • l=1 • ΔC = ΔA/ ε • Micromoli di S trasformate al minuto (per litro di miscuglio di incubazione) = Unità di attività • enzimatica

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