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基因工程思考题

基因工程思考题. 1. 什么是基因克隆，其一般步骤怎样？ 2. 什么是 PCR ？ PCR 的过程怎样？ PCR 的反应体系中应具备怎样的条件？ PCR 与基因克隆不同在些方面？ 3. PCR 可以在几小时内完成，基因克隆要一周或更长时间，为什么基因克隆仍然被人们使用 ? 4. 简述获得目的基因的常见方法有哪些？ 5. 天然质粒有哪些特征？作为克隆载体的质粒需要具备哪些典型的特征？简述 pBR322 质粒的结构特征 6. 简述蓝白斑筛选的基本原理和应用 7. 什么叫 cos 位点，与质粒载体相比 λ 噬菌体载体有何特殊优势？.

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Presentation Transcript

  1. 基因工程思考题

  2. 1. 什么是基因克隆，其一般步骤怎样？ 2. 什么是PCR ？ PCR 的过程怎样？ PCR 的反应体系中应具备怎样的条件？ PCR与基因克隆不同在些方面？3. PCR可以在几小时内完成，基因克隆要一周或更长时间，为什么基因克隆仍然被人们使用? 4. 简述获得目的基因的常见方法有哪些？ 5. 天然质粒有哪些特征？作为克隆载体的质粒需要具备哪些典型的特征？简述pBR322质粒的结构特征 6. 简述蓝白斑筛选的基本原理和应用 7. 什么叫cos位点，与质粒载体相比λ噬菌体载体有何特殊优势？

  3. 8. 比较质粒、 λ噬菌体、 柯斯质粒、YAC载体可以转载的基因大小。 9.什么叫基因打靶?试简述常规基因定位整合系统、基于噬菌体P1的Cre/lox定位重组系统的原理和种类 10. 制备细菌细胞的全部DNA时，用的是最简单的DNA纯化步骤怎样 11. 细菌细胞提取DNA时下列试剂主要作用是什么：溶菌酶；乙二胺四乙酸盐(EDTA)；十二烷基磺酸钠(SDS)；苯酚;1:1的苯酚与氯仿的混合物；链霉蛋白酶或蛋白酶K；核糖核酸酶； -20℃无水乙醇； 12. 质粒的提取 有哪两种类型的提取方法，试简述碱变性提质粒的原理和优点 13. 氯化铯密度梯度离心 分离DNA，RNA、蛋白质的顺序怎样，该方法能够代替苯酚提取和核糖核酸酶处理来对DNA进行纯化吗？

  4. 14. 提取质粒时，在细胞的密度达到了令人满意的程度后，一种蛋白质合成抑制物(例如氯霉素)被加入培养物中，并继续进行培养超过12h，其目的是什么？ 15. DNA操作酶根据其催化反应的类型分为哪5大类 16. 什么叫Klenow片段？它和DNA聚合酶I有什么差别？ 17. DNA分子被置于电场中时，它们就会朝着哪个极发生迁移？标准的电泳能否分离DNA?为什么？ 18. 简述凝胶电泳分离DNA的原理 19. 什么是部分酶切？在限制性图谱制作中有何作用？ 20. 黏末端和平末端哪个更容易正确连接？用哪3种方法之一可将正确的黏末端加到DNA片段上。

  5. 21. 重组DNA分子过程中，连接反应的混合物中可能有其他的DNA分子包括哪些类型？为什么通过克隆可以实现目的分子的纯化？ 22. 利用抗生素抗性基因的插入失活说明pBR322重组体的筛选过程 23. 解释下列名词： SD序列、寡聚核苷酸连杆、DNA连接酶、插入重组、置换重组、基因克隆载体、穿梭质粒、基因组文库、cDNA文库、DNA芯片、重组子 教材P52页：5、7、9、10、11

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