实验三
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实验三 DIC 的造病和实验室检测 PowerPoint PPT Presentation


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实验三 DIC 的造病和实验室检测. 【 目的要求 】 1. 通过 DIC 动物模型的复制,了解 DIC 的病因及发 病机制。 2. 观察急性 DIC 各期血液凝固性的变化,并分析这 些变化的原因及其病理意义。 3. 了解 DIC 的诊断标准,熟悉常用的实验室检查指 标及其意义。. 【 实验动物 】 家兔,体重 1.5 ~ 2.0 kg 。 【 药品与器材 】 1% 普鲁卡因,血小板稀释液,兔脑匀浆, 4% 肝素。.

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实验三 DIC 的造病和实验室检测

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Presentation Transcript


Dic

实验三 DIC的造病和实验室检测


Dic

【目的要求】

1.通过DIC动物模型的复制,了解DIC的病因及发

病机制。

2.观察急性DIC各期血液凝固性的变化,并分析这

些变化的原因及其病理意义。

3.了解DIC的诊断标准,熟悉常用的实验室检查指

标及其意义。


Dic

【实验动物】

家兔,体重 1.5~2.0 kg。

【药品与器材】

1%普鲁卡因,血小板稀释液,兔脑匀浆,4%肝素。

兔手术台,显微镜,离心机,721 型分光光度计,水浴箱、手术器械,微量加样器,动脉插血小板计数板,注射器、肝素抗凝管、枸橼酸钠抗凝管等。


Dic

【实验步骤】

1.称重、麻醉和固定家兔

1%普鲁卡因作颈部局部麻醉,颈前正中切口。分

离家兔一侧颈总动脉,动脉插管,备放血用。

2.取肝素抗凝管和枸橼酸钠抗凝管各3个,分别做

好标记。


Dic

3. 正常血标本各项指标的的制备

■用玻璃纸,接兔血1滴,并立即取10l血放入2.0

ml血小板稀释液内充分混匀,作血小板计数。

■分别在肝素抗凝管内放入兔血1.5ml,在枸橼酸钠

抗凝管放入兔血3.5ml。迅速混匀后,离心、取上

层血浆,另置入干净小试管,并加上标记。

( 肝素抗凝所制备的血浆用以测定Fbg;枸橼酸钠

抗凝所制备的血浆用以测定PT和3P试验)


Dic

4. DIC的造病:取兔脑匀浆,以8ml/Kg体重剂量,

经耳缘静脉以1ml/min的速度匀速推注。

5. 兔脑匀浆注射完毕后,立即采集血样和30或45min

后采血样一次。进行BPC,PT测定,3P试验和

Fbg含量的测定。

【附录】

1. 血小板计数(BPC)

将试管内已稀释血液滴到计数板上静置10min,

用高倍镜计数。准确数出计数板中央l大方格的血

小板数,乘以2000就是每立方毫米的血小板数。


Dic

2.凝血酶原时间(Prothrombin Time简称PT)

■取被检血浆0.lml,置于试管内,37℃水浴预温。

■加入P试液0.2ml,并轻轻地侧动试管,至液体停止

流动或出现颗粒为止,记录PT测定值(秒)。

■重复3次测定,取平均值作为测定结果。

3.血浆鱼精蛋白副凝试验(3P试验)

■取被检血浆0.5ml,置于试管内,37℃水浴3min。

■加入硫酸鱼精蛋白液50l,混匀,37℃水浴15min。

观察有无白色纤维或凝块出现。

如纤维或凝块出现为阳性;无纤维或凝块为阴性。


Dic

测定光密度值

× 1000 = mg%

纤维蛋白原含量

0.5

4.纤维蛋白原定量(饱和氯化钠法)

■实验管:取血浆0.5ml,加入饱和NaCl 4.5ml,充分

混匀,置37℃水浴3min,取出后再次摇匀。

■对照管:取生理盐水0.5ml,加入饱和NaCl 4.5ml,

同上操作。

■选用波长520nm,以对照管试液调零点,然后测定

被检样品试液的光密度。


Dic

【思考题】

1.静脉注入兔脑浸液后为何能复制出家兔DIC模型?

试述其发生机制。

2.讨论急性DIC产生的原因、机制及各项结果间的

关系。

【注意事项】

1.采集抗凝血需掌握好血液与抗凝剂的比例。

2.注射兔脑匀浆前,做好第二次采血的准备工作。

3.静脉推注兔脑匀浆的速度快慢是实验成败的关

键,故密切注意动物的反应。


Dic

表2-3-1注入兔脑匀浆前后动物呼吸与状态观察

注兔脑匀浆前 注兔脑匀浆后

腹式呼吸

一般状态

表2-3-2 DIC实验指标的测定记录

项 目 注射前 注射后(立即) 注射后(30/60min)

BPC

PT(sec) 

3P试验

Fbg量

【实验结果记录】


Dic

血小板计数

10倍镜下

40倍镜下


Dic

凝血酶原时间测定

TF+ Ca2+ + 被检血浆,测定凝血时间,使凝血酶

原变为凝血酶,再进一步促进纤维蛋白形成。

正常值:12~14秒


Dic

3P试验

纤维蛋白单体FM可与纤维蛋白(原)的降

解产物X片段形成可溶性复合物SFMC,当加入硫酸鱼精蛋白或乙醇后可使复合物中的

FM游离,重新聚集,即血浆重凝固。

意义:反映纤溶功能


Dic

肝素(heparin)

1. 来源:肠粘膜肥大细胞,是一种酸性粘多糖;

2. 作用:

A、加速AT-III、HC-II的作用,也影响TFPI、PC作用;

B、增强EC的抗凝和纤溶功能;

C、与血小板结合,抑其表面凝血酶生成;

3. 清除:

细胞清除和体液中和。


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