白血病细胞的免疫表达
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白血病细胞的免疫表达. 史蔚 03 级交大教改班 5031819004. 研究方法. 流式细胞术 电镜 荧光显微镜 免疫组织化学. 流式细胞术 (FCM). 流式细胞术白血病免疫分型是利用 荧光素标记的单克隆抗体 ( McAb )作分子探针,多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型,由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。 白血病形成的分化阻断学说. B 细胞分化各时期的细胞膜表现型. 流式细胞仪免疫分型实验. 1. 样本采集、运输、保存和操作 2. 样本制备   单细胞悬液的制备   分离靶细胞群体

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Presentation Transcript

白血病细胞的免疫表达

史蔚

03级交大教改班

5031819004


研究方法

  • 流式细胞术

  • 电镜

  • 荧光显微镜

  • 免疫组织化学


流式细胞术(FCM)

  • 流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体(McAb)作分子探针,多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型,由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。

  • 白血病形成的分化阻断学说


B细胞分化各时期的细胞膜表现型


流式细胞仪免疫分型实验

1. 样本采集、运输、保存和操作

2. 样本制备

  单细胞悬液的制备   分离靶细胞群体

  估细胞悬液   细胞染色

3. 抗体组合的确定

4. 样本获取

5. 数据分析

6. 数据解释


电镜(EM)

  • 电镜不仅可以根据细胞超微结构发育状况提示幼稚细胞来源和功能状态进行诊断,也常常通过对红系各阶段细胞结构分析判断红系病态造血的原因。


急性未分化或微分化型髓系白血病(MO)

  • A、幼稚细胞外形圆形或卵圆形,直径10um,核质比例高,核卵圆形,异染色质较多,核仁明显,细胞器少,×8000;  B、核膜MPO反应阳性,×8000


急性巨核细胞白血病(AMKL)

  • A、小巨核细胞核不规则,有深切迹,异染色质较多,胞浆中可见sER构成管道网状系统,颗粒少见,×6000; B、核膜和内质网PPO阳性反应,无阳性颗粒,×6000。


免疫组化(IHC)

  • 免疫组织化学(IHC)以其方法简单、特异性强、设备要求低、形态学与免疫学结合等优势,得到各级医院尤其是基层医院的广泛认可,成为其它方法不可完全取代的、血液系统肿瘤病理诊断、鉴别诊断与分型的常规检测手段。


白血病细胞的免疫表达

  • 急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)

  • 急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)

  • 急性髓系白血病 (AML)

  • 慢性淋巴细胞白血病(CLL)

  • 慢性髓细胞性白血病(CML)


T t all
急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)

  • CD7、 CD5、CD2为全T细胞抗原,基本表达于T细胞分化的各阶段

  • 常以CD45Ro和CD3作为检测T细胞来源肿瘤较好的抗体组合

  • CD4、CD8

  • TCR α、TCRβ基因重排

  • T淋巴细胞来源的肿瘤浸润性较强,预后较差,并需要多种治疗


B b all
急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)

  • CD10(CALLA)——区别ALL和AML

  • 与T细胞分化相同,在淋巴干细胞阶段,只表达TDT,CD34等非系抗原;到B系祖细胞,出现CD19、CD79a及胞浆CD10表达;随着B 细胞分化发育到逐渐成熟,TDT消失,相继出现CD10、CD22、CD45RA、CD20表达,同时出现膜免疫球蛋白;淋巴细胞发育到终末浆细胞,除表达浆细胞标记抗体外,还表达胞浆免疫球蛋白。CD19、CD45RA、CD79a。


急性非淋巴细胞白血病(AML)

根据FAB分型:

  • MO:有低的SSC和FSC。在CD45-SSC图上出现在淋巴细胞位置上,至少表达一个特异性标志如CD13或CD116,但MPO比CD13与CD33更灵敏。一般淋系标志阴性,但也可表达CD7或CD4。一般HLA-DR、CD34阳性,有些研究表明CD7与CD34共表达在AML且预后差。

  • M1:流式上M1与M0相似不易区分,M1一般CD13+、CD33+、HLA-DR-,但CD34表达少于M0,可能表达部分CD15。

  • M2: M0与M1的主要区别是成熟度增加,blasts减少,CD15较M1较显著,CD34弱于M1,CD13有时表达强于CD33,多数病例HLA-DR (-)。CD45-SSC图显示从髓系blast区至成熟骨髓细胞区的连续细胞带,CD45-SSC图有助于确定blasts比例。


  • M3、高颗粒性,具较高的SSC,但CD45较成熟C少,多数情况HLA-DR(-)或表达减少,CD34少于M2、一般CD13弱(+),可有CD2表达。

  • M4 与M5:两型表型相似,但M4较M5表达更多的CD34(+),较之M0、M1,M4与M5有更大的FSS和SSC,CD45-SSC图上,成熟C出现在单核区,重要的表型为CD13、CD33、HLA-DR、CD14和CD15,CD33可表达强于CD13,CD33(+)、CD13(-)、CD34 (-)很可能为M5,但只出现在少数病人中,部分M5可见CD56(+)。

  • M6: M6较少见且特征不明显,一般HLA-DR,CD34、CD13、CD33阳性,CD45-SSC图显示主要为红系成份。

  • M7: 巨核细胞白血病,在AML中少于1%。一般CD61(GpⅢa)和/或CD41(GpⅡb-Ⅲa)阳性,而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假阳性,可以用流式双色分析在EDTA存在下,测GpⅡb/Ⅲa与CD34以减少激活血小板的粘附。


慢性淋巴细胞白血病(CLL)

  • B系抗原为CD19、CD20、CD43、CD79a与CD5共表达

  • CD23、CD13、CD15表达


慢性髓细胞性白血病(CML)

  • 由于慢性期显著的细胞分化,在CD45-SSC图上除了髓系细胞占主导外,只显示一个正常骨髓像,CML可确诊,CML起病与发展相对缓慢,慢性期的持续1年左右最终发展为加速期和急变期。流式细胞技术对急变期亚型的诊断具有极高价值。直接影响到治疗效果。

  • 急变期CML主要表现为髓系,偶为淋系,髓性急变可表现出多种形态包括未分化细胞。淋性急变具典型形态特征,为CD10+B祖细胞ALL极少有T细胞型ALL。


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