实验内容实验一、显微镜的使用与单染色法实验二、革兰氏染色与荚膜染色实验三、放线菌形态观察与芽孢染色实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术

实验内容 实验一、显微镜的使用与单染色法实验二、革兰氏染色与荚膜染色实验三、放线菌形态观察与芽孢染色实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术实验六、培养基的制备实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数实验八、水质微生物学检测实验九、消毒与灭菌技术

实验六、培养基的制备 一、实验目的 1、掌握常用培养基配制的一般方法和步骤。 2、了解微生物学实验的准备工作，包括棉塞制作，试管包扎，培养皿的包装等。 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理并掌握其具体操作方法。

二、实验材料 1、牛肉膏蛋白胨 NaCl 马铃薯蔗糖琼脂 1mol/L NaOH 1mol/L HCl等 2、试管三角瓶烧杯量筒天平 pH试纸棉花培养皿高压蒸汽灭菌锅等

三、实验内容 （一）牛肉膏蛋白胨培养基的制备 1、原理：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛细菌基本培养基，成分为牛肉膏，蛋白胨和NaCl，其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。多用于培养基细菌，因此要用稀酸和稀碱将其pH调至中性微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

2、制作程序： 称量溶化调pH 过滤分装灭菌检测使用 3、具体步骤（1）称量：按培养基配方比例依次称取牛肉膏，蛋白胨， NaCl放入小铝锅中。（牛肉膏：3.0g 蛋白胨： 10.0g NaCl：5.0g 自来水：1000mL 琼脂：15～20g）注意：牛肉膏常用玻棒挑取，放在称量纸上，称量后直接放入水中，稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

（2）溶化：搪瓷杯量取1000mL水加热后倒入小铝锅中，记下刻度，用玻璃棒搅动继续加热，将药品完成溶解后，补充水到所需总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。（2）溶化：搪瓷杯量取1000mL水加热后倒入小铝锅中，记下刻度，用玻璃棒搅动继续加热，将药品完成溶解后，补充水到所需总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。（3）调pH：在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.2～7.4。反之，用1mol/L HCl进行调节。

（4）过滤：如有沉淀，可用纱布或脱脂棉过滤。（4）过滤：如有沉淀，可用纱布或脱脂棉过滤。（5）分装：按实验要求，可将配制好的培养基分装入试管内或三角烧瓶内，塞好棉塞或包扎瓶口，做好标记，灭菌备用。（6）灭菌：高压蒸汽灭菌，121℃ 15~20分钟（7）检测：灭菌物品过夜培养，确定无杂菌生长再使用。

（二）马铃薯蔗糖琼脂培养基的制备 1、原理：马铃薯琼脂蔗糖培养基是一种半合成培养基，可用来培养各种真菌。培养基成分：马铃薯（去皮）：200g 蔗糖：20g 琼脂：18g 水：1000ml 2、步骤（1）量取1000mL自来水，倒入铝锅，记下刻度，加热。（2）称取200g去皮马铃薯，切成小块放入铝锅，煮沸20分钟。（3）用纱布过滤于搪瓷杯中，在倒入铝锅，加热至沸。（4）加入称好的蔗糖和琼脂，不断搅拌至琼脂完全溶化，补足水至1000 mL，再加热至沸。（5）趁热分装到试管和三角瓶，包扎，做好标记，灭菌备用。（6）试管琼脂培养基要摆成斜面。

（三）实验准备 1、培养基的配置：（1）牛肉膏蛋白胨培养基：1500ml ①分装 7支×5 组试管，5~8ml/试管（18×180），占试管的1/4~1/5 ； ② 剩余培养基分装至6个三角瓶中，200ml/三角瓶。（2） PDA培养基：1000ml ①分装 7支×5组试管，5~8ml/试管（ 18×180），占试管的1/4~1/5； ②剩余培养基分装至4个三角瓶中，200ml/三角瓶。

2、无菌水的制作： （1）取洁净250ml三角瓶5支，精确量取自来水100ml，包扎，灭菌备用；（2）取洁净试管（18×180），定量加入9ml/试管，7支×8组，灭菌备用。 3、试管斜面、三角瓶、培养皿的准备（1）棉塞的制作（2）培养皿的准备：十个一组，双层报纸包扎。（3）移液枪头准备

四、实验报告 1、培养基定义及其分类。 2、常用培养基的配制过程及注意事项。

实验内容 实验一、显微镜的使用与单染色法 实验二、革兰氏染色与荚膜染色 实验三、放线菌形态观察与芽孢染色 实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征 实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术