2003

1. Detección de ADN mini circular T. cruzi en pacientes cardíacos crónicos ambulatorios en diferentes hospitales.El Salvador / GuatemalaDr Gilberto Ascencio MSc 2003

2. Gilberto Ascencio 2 Carmen Villagran de Tercero1, Rafael Cedillos 2, Salomón Campos 2, Verónica Pérez2, Ramón Rivera2, Norma Marroquin 1 and Inger Ljunström3 • 1.Centro de Investigaciones de las Ciencias de la Salud y Laboratorio Multidisciplinario, Facultad de Ciencias Médicas, Universidad de San Carlos de Guatemala. • 2. Departamento de Microbiología, Facultad de Medicina, Universidad de El Salvador.  • 3. Swedish Institute for Infecious diseases control, Solna, Parasitology Departmet Karolinska Institute

3. DISTRIBUCION GEOGRAFICA DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS En rojo

4. Vector de la enfermedad de chagas Familia reduviidae Insectos hematófagos Transmiten al parasito por medio de las heces

5. Trypanosoma cruzi Agente causal de la enfermedad de chagas Fase sanguínea tripomastigota

6. Introducción • La enfermedad de Chagas, es considerada por la Organización Mundial de la Salud, uno de los principales problemas sanitarios en Centro y Sud América. Se ha estimado que 16-18 millones de personas están infectadas por T. cruzi, y el 25 % de la población de América vive con el riesgo de ser infectada, debido a las malas condiciones de vida y a la presencia del vector. • La enfermedad de Chagas es causa de cardiomiopatía y de muerte súbita.

7. ADN mini circular T.cruzi • El diagnóstico de la enfermedad en fase indeterminada y crónica, se establece por métodos serológicos y por xenodiagnóstico, debido a la poca cantidad de parásitos circulantes. • La reacción de polimerasa en cadena (PCR) ha sido propuesta como una alternativa en el diagnóstico por la capacidad de detectar muy pequeñas cantidades de DNA parasitario

8. EL METODO DE PCR DETECTA PEQUEÑAS CANTIDADES DE ADN DEL PERASITO Y LUEGO MULTIPLICA POR MILLONES DE VECES PARA HACER VISIBLE LA REACCION. SE HACE EN UN EQUIPO ESPECIAL LLAMADO TERMOCICLADOR.

9. ADN mini circular T. cruzi PCR puede distinguir entre infección por otros hemoflagelados y no depende de estado inmunológico del paciente como lo es la detección de anticuerpos, además de ser muy sensible en pacientes en etapa crónica de la enfermedad, también es útil para el diagnóstico de enfermedad congénita.

10. T. cruzi • Los minicirculos de kDNA , son punto clave e ideal para la amplificación, debido a que están en 10-20,000 copias por parásito. Además k ADN es altamente específico para T. cruzi y otros parásitos comoLeishmania yT.brucei no son amplificados y T. rangeli, es amplificado pero produce bandas de diferentes tamaños que las de T. cruzi.

11. Objetivo • Demostrar la utilidad del PCR del DNA del minicirculo de T.cruzi en muestras sanguíneas tomadas y conservadas a temperatura ambiente, en 110 pacientes adultos con diagnóstico de enfermedad de Chagas en fase crónica e indeterminada.

12. Población • 110 personas adultas de las mismas áreas endémicas con serología negativa para enfermedad de Chagas. • Un total de 50 casos procedentes de El Salvador y 60 casos de Guatemala. • 71 pacientes adultos en fase indeterminada y 39 con diagnóstico de fase crónica de enfermedad de Chagas. • El diagnóstico, inicialmente se estableció en el banco de sangre de los hospitales y en la comunidad. • Los pacientes con enfermedad crónica, fueron diagnosticados en los servicios de cardiología de los hospitales.

13. PROCEDENCIA AREA CASOS EN TOTAL SEROLOGIA NEGATIVA POSITIVA BANCO DE SANGRE Y COMUNIDAD HOSPITAL NACIONAL DE CUILAPA CUILAPA GUATE. 144 134 10 JUTIAPA NATIONAL HOSPITAL JUTIAPA GUATE. 220 170 50 ROSALES HOSPITAL EL SALVADOR 280 230 50 644 534 110 SEROLOGIA DE LA POBLACIÓN DE LAS ÁREAS ENDÉMICAS ESTUDIADAS

14. HALLAZGOS CLINICOS DE LOS 39 PACIENTES EN FASE CRONICA DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS Cardiomegalia 20 Bloqueo de rama derecha del haz de His 16 Arritmia 2 Bloqueo auriculo ventricular 4 Fibrilación 1 Hipertrofia ventricular 6 Taquicarda 7

15. Resultados de PCR en controles seronegativos

16. Resultados de PCR en pacientes en fase indeterminada y crónica

17. T. rangeli t. cruzi 235mw Lane.1 T. cruzi from patient, lane 2 and 3: T. cruzi from culture, lane 5: T. rangeli from culture, lane 6 from acute patient, lane 7: negative control and MW:

18. PCR en pacientes en fase crónica 235

19. PCR en pacientes en fase crónica: 235

20. Discusión • Se encontró la característica banda de 235 bp en los pacientes indeterminados y cardíacos, adicionalmente se encontró una banda de mayor tamaño que es el resultado de amplificar a través de dos regiones variables del minicirculo de T.cruzi ya que esta minicirculo tiene 4 regiones conservadas alrededor, donde los primers pueden combinarse, probablemente se obtuvo ¼ del minicirculo o probablemente la mitad.

21. Discusión • Encontramos tres pacientes con serología positiva que no presentaron bandas de 235 bp, probablemente en estos hubo reacción serológica cruzada con otros parásitos. • Adicionalmente se detectaron 2 casos positivos para PCR y con serología negativa, esto puede deberse a falta de producción de anticuerpos específicos anti T. cruzi.

22. CONCLUSIONES • La toma y conservación de muestras sanguíneas para PCR es de utilidad y puede ser aplicada en condiciones de trabajo de campo en la comunidad. • Los Primers TC1 TC2 amplifican en forma específica secuencias de DNA de minicirculo de T. cruzi.