Diamino pimelinsav meghat roz sa
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 14

Diamino-pimelinsav meghatározása PowerPoint PPT Presentation


  • 54 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

Diamino-pimelinsav meghatározása. Készítette: Kelényi Janka. Diamino-pimelinsav (DAP). Diaminosavak csoportjába tartozik. Lizin ε-karboxi-származéka. Nem-fehérjeépítő aminosav.

Download Presentation

Diamino-pimelinsav meghatározása

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Diamino pimelinsav meghat roz sa

Diamino-pimelinsav meghatározása

Készítette: Kelényi Janka


Diamino pimelinsav dap

Diamino-pimelinsav (DAP)

  • Diaminosavak csoportjába tartozik.

  • Lizin ε-karboxi-származéka.

  • Nem-fehérjeépítő aminosav.

  • Baktériumok sejtfalának jellemzője. Jelenlétében normál növekedés, hiányában nem képesek új sejtfal-proteoglikánokat előállítani.

  • Minden Gram-negatív baktériumban, azonban csak néhány Gram-pozitív baktériumban jelenik meg.

Kelényi Janka


Diamino pimelinsav meghat roz sa

DAP

  • A Braun-féle lipoproteinek diaminopimelinsavon keresztül kapcsolódnak a Gram-negatív sejtfalakhoz.

  • A Gram-negatív Escherichia coli esetében diaminopimelinsavhoz közvetlenül kapcsolódik a szomszéd láncvégi D‑alanin. A sejtfal teichoinsav nélkül tömörebb, így kisebb rétegvastagság mellett is szilárd.

Kelényi Janka


Dap meghat roz s

DAP meghatározás

Grant és West egyszerűsített módszere

  • Hidrolízis tömény sósavval

  • Tisztítás

  • Papír kormatográfiás vizsgálat

  • Elemzés

  • 80%-os visszanyerés

Kelényi Janka


Dap meghat roz s1

DAP meghatározás

Mikrohullámmal gyorsított eljárás

  • Egészsejtes hidrolízis folyadék és gőzfázisban lévő 6 N sósavval, lezárt edényben.

  • Nyomás és hőmérséklet érzékelővel ellátott mikro használata.

  • Folyadék- és gőzfázisú mikrohullámmal történő eljárással azonos minőségű eredmény nyerhető, mint a hagyományos módszerrel.

  • A hidrolízis időtartama így 16-20 óráról kevesebb, mint 10 percre csökkenthető

  • A teljes vizsgálati idő kevesebb mint 90 perc

  • A gőzfáziú megoldás esetében megkönnyíti az eljárás menetét a fázisok közötti sósavmosás elhagyása

Kelényi Janka


Grant s west m dszere i

Grant és West módszere I.

Módszer elve:

  • DAP extrakció talajból

  • Hidrolízis HCl-al

  • Mennyiségi meghatározás

  • Vékonyréteg kromatográfia

    Anyagok és eszközök:

  • Spektrométer

  • Rotációs bepárló

  • Kromatográfiás papír

  • Rázógép

  • Vízfürdő (25-100°C között állítható)

  • Szűrőpapír

  • Centrifuga és centrifuga csövek

Kelényi Janka


Grant s west m dszere ii

Grant és West módszere II.

Vegyszerek:

  • HCl (12 M)

  • trimetilkloroszilán (1% toluol)

  • pellet NaOH

  • Mozgó fázis I (30:20:6:24 V/V)

    • Bután-1-ol

    • Piridin

    • Ecetsav, tömény

    • Víz

  • Mozgó fázis II (7:1 V/V)

    • Buán-1-ol

    • Hangyasav

Kelényi Janka


Grant s west m dszere iii

Grant és West módszere III.

Vegyszerek: (folytatás)

  • Ninhidrin reagens

    • 1g ninhidrin

    • 100 mg kadmium-acetát

    • 5 ml ecetsav

    • 100 ml aceton

    • 10 ml desztillált víz

  • H2SO4 (tömény)

  • Metanol

  • DAP standard oldat

Kelényi Janka


Grant s west m dszere iv

Grant és West módszere IV.

Eljárás:

  • 3 db 2,5g talajminta bemérése

    • Inkubálásrázógépen (100 fordulat/perc)

    • 25°C

    • 48 óra

    • 20 ml HCl (12 M)

  • Hidrolizálás

    • 20 ml desztillált víz

    • 105°C

    • 18 óra

  • Hidrolizátumok szűrése

  • Maradékok kimosása 2x10 ml desztillált vízzel

  • Lombik szililezése a felszíni DAP abszorpció megelőzésére

  • Rotációs bepárlóval 45-50°C-on a szűrőket kiszárítjuk (3x)

Kelényi Janka


Grant s west m dszere v

Grant és West módszere V.

Eljárás: (folytatás)

  • Semlegesített hidrolizátumot desztillált vízbe visszaoldjuk

  • Huminanyagok eltávolítása centrifugálással

  • A felülúszókat adott térfogatra egészítjük ki

  • DAP meghatározás

    • Whatman papír

    • 2 cm-es távolságban viszik fel az egyes mintákat

    • 72 óra

  • Levegőn szárítása a kromatográfiás papíroknak

  • Ninhidrin reagensbe mártás

Kelényi Janka


Grant s west m dszere vi

Grant és West módszere VI.

Eljárás: (folytatás)

  • Folt előhívása, kivágása

    • 24 órán belül

    • Tömény H2SO4-val

    • Sötétben

  • A foltok eluálása 4 ml metil-alkohollal

  • 500 nm-en spektrofotometriás mérés

  • Minden kromatográfiás papírból kivágunk egy ugyanakkora darabot (vak minta), mint a mintáknál és mossuk 4 ml metil-alkohollal. Ezzel a háttér-abszorbancia értékkel korrigálunk a mérés során.

Kelényi Janka


Grant s west m dszere vii

Grant és West módszere VII.

Eredmények:

  • Érzékenysége kb. 10 μg/ g talaj

  • Extrakciós veszteség max. 38 %

  • Talaj élettelen szerves frakciójában megjelenik a DAP

Kelényi Janka


Felhaszn lt irodalom

Felhasznált irodalom

  • http://hu.wikipedia.org/wiki/Diamino-pimelinsav

  • delfin.unideb.hu/~szentirm/mikrobana.doc

  • http://davidcwhite.org/fulltext/310.pdf

  • Alef K. and Nannipieri P. (Editors): Methods in Applied Soil Microbiology and Biochemistry, Academic Press Limited, London, 1995

Kelényi Janka


K sz n m a figyelmet

Köszönöm a figyelmet!

Kelényi Janka


  • Login