Antigénio versus Anticorpo O diagnóstico Imunológico

1. Antigénio versus AnticorpoO diagnóstico Imunológico

2. Visão geral do SI

3. A imunologia estuda os mecanismos de resposta do organismo a substâncias estranhas - Antigénios A resposta pode ser Humoral ( mediada por anticorpos) ou Celular ( mediada por células, fundamentalmente linfócitos). A resposta humoral ou celular pode ser medida no laboratório Laboratório de Imunologia

4. Anticorpos - a chave para um diagnóstico • Uma variedade de técnicas permite a medida qualitativa e quantitativa do Ag ou Ab. Anticorpos são usados na investigação celular e molecular pois permitem a localização e caracterização dos antigénios Efeitos da combinação Ag-Ab • Aglutinação: particula antigénica+Ab específico resulta na agregação de partículas • Precipitação: Ag solúvel + Ab resulta em precipitação • Activação do Complemento(C): Ag em solução ou em partícula+Ab específico resulta na activação de complemento • Citolise: Celula+anti-celula Ab+C, resulta na lise da célula • Opsonização:Ag+Ab+C aumenta fagocitose por monócitos, macrófagos ou PMNs • Neutralização: Toxinas, viroses, enzimas,…+Ab específico resulta na sua inactivação

5. Anticorpos - a chave para um diagnóstico • Todas as reacções de diagnóstico que usam Ag-Ab, têm por base a capacidade de um Ab reconhecer um dado epítope- parte estrutural reactiva de um antigénio. • Anticorpos: • Monoclonais- reagem apenas com um epítope específico de um Ag • Policlonais- ligam-se a vários epítopes de um antigénio

6. Anticorpos - a chave para um diagnóstico • Afinidade : capacidade ou intensidade de um Ab (paratope) se ligar a um Ag particular (epítope) – “lock and key”. • Produção de Abs: • Injecta-se um animal (ex:ratinho) com o material antigénico, e espera-se pelo desenvolvimento da resposta imune; depois retiram-se os Abs circulantes presentes no sangue do animal, sendo estes representantes de uma população de Abs específicos = Policlonais • Os Abs monoclonais são mais difíceis de produzir: quando a resposta imune se desenvolve no ratinho imunizado o seu baço é removido; as células desenvolvem-se em células B maturas que são feitas replicar e depois fundidas com células de hibridoma. No final é feito um “screenning” de identificação das células que produzemo anticorpo de interesse, que são isoladase clonadas

7. Abs/Ags+ligando+enzima- a chave para um diagnóstico • Um grupo de técnicas destinadas a medir níveis/concentrações de Ag ou Ab em que um dos reagentes é conjugado com uma enzima, que quando junta com o seu substrato gera um produto com côr- ELISA • Têm por base a capacidade de um Ab reconhecer um dado epítope

8. Abs/Ags+ligando+enzima=ELISA (Enzyme-linked Immunoadsorbent Assay) • Detecção ou quantificação de um antigénio ou anticorpo usando um ligando (Anti-Ag ou Anti-Ab) conjugado com uma enzima cuja reacção se traduz na alteração de côr do substrato: • Ligando - qualquer molécula ligada a um composto • Enzima - proteína capaz de desencadear reacções como hidrólises, oxidações ou reduções, e não é consumida no processo • Substrato-composto que é degradado ( no caso da reacção de ELISA é cromogéneo) • Epítope - parte estrutural do Ag que reage com o Ab

9. Abs/Ags+ligando+enzima=ELISA (Enzyme-linked Immunoadsorbent Assay)

10. Níveis Primeiro Segundo Terceiro Tipo de estudo Quantificação de imunoglobulinas Capacidade hemolítica total do C Provas cutâneas de hipersensibilidade Estudo da função fagocítica Quantificação de linfócitos T e B Quantificação fraccionária de C Capacidade funcional de T e B Actividade citotóxica de T e NK Quantificação de citoquinas Capacidade de síntese de Igs Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune

11. Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune Estudo de imunoglobulinas e complemento • 1) métodos não-imunológicos (ex.análises bioquímicas) • 2) métodos imunológicos • Imunoelectroforese • Difusão radial • Nefelometria • RIA Quantificação de proteínas de complemento • Hemólise • Imunodifusão • Nefelometria

12. Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune • Estudo de células imunocompetentes • 1- Análise fenotípica • Citometria de fluxo * • Imunofluorescência (simples, dupla ou tripla) • 2- Análise Funcional (capacidade de resposta linfoproliferativa a diferentes estímulos) _ Lectinas,mitogéneos,Abs monoclonais

13. Citometria de Fluxo

14. Granulócitos Monócitos Linfócitos *Resultados de Citometria de Fluxo

15. Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune • 2.1- Análise Funcional- Medida do grau de activação celular -activação -proliferação -produção de citoquinas -actividade citotóxica dos linfócitos T -actividade citotóxica das células NK -fluxo de cálcio, fosforilação proteica -provas de aderência -ensaios de mobilidade celular -fagocitose -actividade bactericida