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交叉配血的方式与选择

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骆群. 交叉配血的方式与选择. 交叉配血: 确保输血配型相符的正确方法 有同 种 抗体的病人: - 进行间接抗人球试验 无同 种 抗体的病人: - 进行盐水试验 由于绝大多数储存血都作了成分处理,若只输入储存红细胞,则不做次侧配血。. 红细胞抗原. 血型系统 ( Blood group systems ) 29 245 血型集合 ( Blood group collections ) 6 12 血型系列 ( series ): 低频率系列( 700 series , low-incidence

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骆群

交叉配血的方式与选择

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交叉配血:确保输血配型相符的正确方法

有同种抗体的病人:- 进行间接抗人球试验

无同种抗体的病人:- 进行盐水试验

由于绝大多数储存血都作了成分处理,若只输入储存红细胞,则不做次侧配血。

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红细胞抗原
  • 血型系统(Blood group systems)29 245
  • 血型集合( Blood group collections)6 12
  • 血型系列(series):

低频率系列(700 series,low-incidence

antigens) 19

高频率系列 (901 serise,high-incidence

antigens) 9

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红细胞抗体(1)
  • 预期抗体:若已知红细胞ABO血型,按

Landsteiner´s法则可预知的ABO血型

抗体,即抗-A和抗-B。

预期抗体也叫做规则抗体

  • 意外抗体:抗-A或抗-B以外的抗体。在ABO亚型

中,变异的抗-A1或某种抗-B等抗体,

也称为意外抗体。

意外抗体过去也叫做不规则抗体

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红细胞抗体(2)
  • 天然抗体:没有可察觉的抗原刺激,而机体对抗原免疫应答的产物。天然抗体多为IgM抗体,能与含有相应抗原的红细胞结合,在盐水介质中出现肉眼可见的凝集反应,所以也叫盐水抗体。IgM抗体的最适反应温度为0-25℃。
  • 免疫抗体:抗原刺激机体而产生的。免疫抗体多为IgG抗体,在盐水介质中只能致敏含有相应抗原的红细胞,但不产生凝集,需要采用抗球蛋白搭桥、酶处理细胞或聚凝胺介导等方法,才能产生凝集反应。IgG抗体的最适反应温度为37℃。
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免疫血液学的传统方法
  • 凝集实验和溶血实验
  • 玻片法/试管法/微孔板法
  • 抗人球实验(冲洗)
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在抗原抗体反应中的去离子和低离子

盐水凝集法:

例如,ABO血型鉴定试验

包括玻片法、试管

法和微孔法

但灵敏度相对较低,只在

一些基层医院血库使用

低离子强度盐水法:

通过降低介质溶液离子强度,减少红细胞膜外围的离子云,促进红细胞凝集,因而其灵敏度有所提高。

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聚凝胺试验
  • 原理:聚凝胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物,溶解后能产生很多正电荷,可以中和红细胞表面的负电荷,使红细胞之间距离减小,能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝聚。如果是抗体致敏的红细胞,加入中和液后,凝集不可逆;无抗体致敏的红细胞,加入中和液后,凝集解散。
  • 程序:按试剂盒说明书操作。
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聚凝胺凝集法:

通过多聚季氨盐溶液提供大量正电荷来中和红细胞表面负电荷,减少红细胞间的排斥,促进红细胞凝集,其灵敏度有较大提高。此方

法目前在国内使用较多。(Rh,Duffy)

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抗人球试验 - 检测IgG

抗人球试验:

在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上,加入抗人球蛋白抗体,通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用,促进红细胞的凝集。可分为直接和间接抗人球试验。 K, k, Fya,

Fyb, JKa, JKb, Kpa, Kpb,

S, s, Lua, Lub

reaction media
REACTION MEDIA
  • 22% albumin
    • decreases zeta potential by buffering
    • allows Ab-coated cells to come closer together
  • Low Ionic Strength Solution (LISS)
    • decreases zeta potential
    • serum/cells very important; increase amount of serum with caution
  • Polyethylene glycol (PEG)
    • removes water, concentrating Ab
    • use monospecific AHG with anti-IgG (else, false positives)
    • do not read aggl. microscopically (false positives)
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间接抗人球蛋白试验(IAT)
  • 经典IAT
  • LISS-IAT:试管法 卡
  • PEG-IAT
  • 酶-IAT
  • 聚凝胺-IAT
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经典IAT

程序:2滴血清、1滴2-5%的红细胞,37℃孵育45-60分钟,生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液,控干,加2滴抗人球蛋白试剂,离心后判读结果。用抗体致敏的红细胞检测试验结果的正确性。

liss iat
LISS-IAT
  • 原理:通过降低红细胞周围的离子氛,使抗体易于接近抗原,促进抗体在更短的时间内致敏红细胞,再使用抗人球蛋白试剂,使被致敏的红细胞产生凝集
  • 程序:2滴血清、1滴2-5%的红细胞,加2-4滴LISS液后混匀,37℃孵育15分钟,离心观察细胞的凝集情况,用生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液,控干,加2滴抗人球蛋白试剂,离心后判读结果。
peg iat
PEG-IAT
  • 原理:PEG是一种水溶性的中性多聚体,当含有抗原与相应抗体的溶液中加入PEG时,由于空间排斥效应作用,使溶液中的抗体饱和度提高,加速溶液中的抗原-抗体复合物的形成。
  • 程序:2滴血清、1滴2-5%的红细胞,加4滴PEG溶液后混匀,37℃孵育15分钟,生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液,控干,加2滴抗人球蛋白试剂,离心后判读结果。
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微柱凝胶技术(卡)
  • 原理:微管内有凝胶颗粒和试剂。凝胶颗粒具有分子筛作用,离心后,不凝集的红细胞通过全程进入微管底部,而凝集的红细胞则悬浮停留在颗粒中。
  • 程序:按厂家说明操作
coombs
抗人球蛋白试验(Coombs试验)
  • 直接抗人球蛋白试验(DAT)

检测红细胞是否在体内被抗体或补体致敏,用于检测自身免疫溶血性贫血、药物引起的溶血、新生儿溶血病、溶血性输血反应

  • 间接抗人球蛋白试验(IAT)

在体外抗体致敏红细胞,用于抗体筛选和鉴定、交叉配血、血型鉴定

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酶试验
  • 原理:蛋白水解酶可将红细胞表面的多肽链打断,使多肽链带负电荷的唾液酸也一起离开红细胞表面,减少了红细胞之间的排斥力,缩短了红细胞之间的距离,容易产生凝集反应
  • 程序:2滴血清、1滴2-5%红细胞,加入2滴酶,37℃孵育15分钟,离心看结果。

注:酶会破坏一些抗原结构,如M、N、Fya、Fyb等

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影响输血效果的免疫血清学问题
  • 速发型输血后溶血反应

血管内溶血

主要原因: ABO血型不和

  • 迟发型输血后溶血反应

血管外溶血

主要原因: 针对红细胞抗原的同种抗体

血型抗原的同种免疫

红细胞抗原免疫强弱依次为Rh (D > c > E > C > e )、Kell、Duffy、Kidd

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传统方法的局限性
  • 不利于标准化管理
  • 重复性较差
  • 要求操作者的经验丰富
  • 难以实现自动化操作
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凝胶凝集试验 - 原理 (1)

  • 通过离心使红细胞被挤过装有过滤介质的小柱
  • 凝集的红细胞被阻挡在小柱中过滤介质的顶部或中央,而未凝集的红细胞则到达小柱的底部
  • 血型或AHG试剂被加入到过滤介质
  • 由于红细胞和血清成分以不同的速度通过小柱(重力加速度不同),从而消除了血清中未结合的球蛋白中和AHG的可能性,因而,在抗人球试验中,不用清洗红细胞
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凝胶抗人球试验

新技术——卡式检测法:

1986年法国Dr.Yves Lappierre发明了用于分离凝集红细胞的凝胶卡式检测法。经过不断改进和临床的大量应用,目前在发达国家已作为临床常规的红细胞血型血清学检测新技术。

1994年凝胶卡式检测法用于临床常规的红细胞血型血清学检测,已得到美国FDA权威机构的认证。

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凝胶酶试验

酶法:

利用木瓜酶或菠萝酶来破坏红细胞表面的唾液酸,

使细胞膜表面失去电荷,减少红细胞间的排斥;同时暴

露某些隐蔽抗原,增强凝集反应。主要用于一些不完全

抗体的检测。

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凝胶凝集试验 - 原理(2)

  • 标准化的孵育时间
  • 标准化的离心时间
  • 标准化的判读 - 消除主观因素对弱反应结果的判读
  • 结果稳定保存
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凝胶试验方法的历史

  • 1984 - 发明建立 (Dr. Y. Lapierre, Lyon, France)
  • 1985 - 申请专利
  • 1988 - 提供商品化试剂盒

市场上的凝胶检测系统:

  • Diana System (Grifols) … 葡聚糖100凝胶, 多种大小颗粒
  • DiaMed ID -葡聚糖100凝胶
  • Ortho BioVue - 玻璃珠
  • Pasteur ScanGel -葡聚糖凝胶
  • Gamma REAct - 蛋白G和蛋白A凝胶
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凝胶试验应用于血型血清学

  • 血型实验室中的一次革命
  • 在全世界许多发达国家已被公认为是常规免疫血液学实验的“金标准”。
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凝胶试验应用于血型血清学

  • 1990年,卡式检测法的发明人Dr. Yves Lapierre等用低离子强度盐水法(试管法)、聚凝胺试验(试管法)和卡式检测法(凝胶)研究了400例已知抗体的样本。血清与细胞的比例是按照试管法标准配置。结果为:
  • 卡式检测法检出359例(检出率为90%)
  • 低离子强度盐水法检出243例(检出率为61%)
  • 聚凝胺试验检出301例(检出率为75%)
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卡式血型/配血系统

  • 系统特点:
  • 灵敏度高
  • 特异性高
  • 重复性好
  • 客观性强
  • 不需洗涤细胞
  • 结果可保留一周
  • 节约样品和试剂
  • 易于标准化
  • 易于自动化
  • ISO9000/CE认证
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谢 谢

Thank you

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