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Universit à degli Studi di Napoli Federico II. FACOLTÀ DI SCIENZE MATEMATICHE, FISICHE E NATURALI DOTTORATO DI RICERCA IN SCIENZE CHIMICHE. Sintesi e purificazione di un inibitore della trombina. Candidata : Valeria Turco . Coagulazione del sangue. Trombina. Sito catalitico.

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Universit à degli Studi di Napoli Federico II

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Presentation Transcript


Universit degli studi di napoli federico ii

Università degli Studi di Napoli Federico II

FACOLTÀ DI SCIENZE MATEMATICHE, FISICHE E NATURALI

DOTTORATO DI RICERCA IN SCIENZE CHIMICHE

Sintesi e purificazione di un inibitore della trombina

Candidata : Valeria Turco


Universit degli studi di napoli federico ii

Coagulazione del sangue


Universit degli studi di napoli federico ii

Trombina

Sito catalitico

Exo sito

CS

ES

Hirudina

40 aa

Ile-Thr-Tyr-Thr-Asp-----------------------Pro-Glu-Ser-His-Asn-Asx-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln

Chg-Arg-Nal-Thr-Asp-DAla-ßAla-ßAla-Pro-Glu-Ser-His-Phe-Gly-Gly-Asp-Tyr-Glu-Glu-Ile-Pro-Aib-Aib-Tyr-Cha-DGlu

Hirunorm IV

Inibitore della trombina


Universit degli studi di napoli federico ii

Trombina

Sito catalitico

Exo sito

CS

peptide

ES

peptide

porfirina

TAMPP

Inibitore della trombina

H-Chg-Arg-2Nal-OH

CS3

HO-Succ-Pro-Glu-Tyr-Asp-Pro-Chg-OH

ES7


Universit degli studi di napoli federico ii

H

N

2

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H

N

H

2

CS3-TAMPP-ES7


Universit degli studi di napoli federico ii

Fasi sperimentali

  • Sintesi dell’inibitore

  • Purificazione

  • Inserzione del metallo


Universit degli studi di napoli federico ii

H

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2

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H

H

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N

2

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N

N

N

N

N

H

H

N

N

H2

H- 2Nal-Arg-Chg-H

CS3-TAMPP-CS3

CS3-TAMPP

TAMPP

Primo peptide

+ peptide CS3

TAMPP

CS3-TAMPP


Universit degli studi di napoli federico ii

H

H

2

2

N

H

2

N

H

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2

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H

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H

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2

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N

N

H

N

H- 2Nal-Arg-Chg-H

N

H- 2Nal-Arg-Chg-H

peptide ES7

CS3-TAMPP-ES7

CS3-TAMPP

Secondo peptide

+ peptide ES7

CS3-TAMPP

CS3-TAMPP-ES7


Inserzione metallo

Inserzione metallo

H

H

2

2

N

H

N

H

N

2

MnAc2

N

N

N

N

H

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2

MnIII

N

N

N

N

H- 2Nal-Arg-Chg-H

N

H- 2Nal-Arg-Chg-H

Applicazione in diagnostica: rivelazione dei trombi


Inserzione metallo1

Inserzione metallo

H

H

2

2

N

H

N

H

N

2

MnAc2

N

N

N

N

H

H

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MnIII

N

N

N

22.13 min

400

22,13 min

N

H- 2Nal-Arg-Chg-H

mAU

mAU

200

N

H- 2Nal-Arg-Chg-H

0

200

400

600

800

nm

22,86 min

mAU


Universit degli studi di napoli federico ii

HPLC:

Minutes

Spettro di massa:

1: 210 nm, 8 nm

210 nm

100 Mn-trans pulito 25-11-06

400

400

22.13 min

100 Mn-trans pulito 25-11-06

mAU

200

200

0

0

10

15

20

25

30

2117.3 (M)

7520.9

100

90

80

70

60

% Intensity

50

40

30

20

1862.80

2182.97

10

2088.11

1977.23

2205.44

2049.96

0

0

1332.0

1665.2

1998.4

2331.6

2664.8

2998.0

Mass (m/z)

Purificazione MnIII-CS3-TAMPP-ES7


Universit degli studi di napoli federico ii

Conclusioni

  • E’ stato sintetizzato e purificato un nuovo inibitore della trombina, costituito da una porfirina che porta due peptidi diversi.

  • E’ stato inserito uno ione metallico all’interno dell’anello porfirinico.

  • Il complesso metallo-inibitore potrebbe trovare un’applicazione nel campo della diagnostica.


Universit degli studi di napoli federico ii

Interazione con la trombina legata ai coaguli

  • Formazione dei coaguli

  • La molecola sintetizzata lega in vitro coaguli di fibrina e ne inibisce la crescita

Coagulo di fibrina

Coagulo di fibrina

+ inibitore


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