KÜLTÜR ORTAMLARININ EMBRİYO GELİŞİMİNE ETKİSİ

1. KÜLTÜR ORTAMLARININ EMBRİYO GELİŞİMİNE ETKİSİ Doç. Dr. LaleDelilbaşı Ankara GüvenHastanesiEmbriyolojiLaboratuvarıDirektörü

2. Hücresel Stres • Gelişimin yavaşlaması veya durması • Sitoplazmik fragmantasyon • Anormal genom ve gen transkripsiyonu • Enerji metabolizmasının bozulması

3. Kültür Ortamlarının Bileşimi • Temel inorganik iyonlar • Karbohidratlar • Aminoasitler • Vitaminler

4. Simple Balanced Salt Solution (Basittuzsolüsyonları, enerjikaynakları) • Modifiye Earle’s, modifiyeWhittingham T6, CZB ve KSOM • HTF, P1,G1 • KompleksMediumlar(İnorganiktuzlar, enerjikaynakları, aminoasitler, vitaminler, kofaktörler) • Ham’s F10, Menezo’s B2, B3, MEM, G2 • Hypoxanthine......2 hücrebloğu(Loutradis et al, BiolReprod 1987) • Nikotinamide.......embriyotoksik(Tsai&Gardner, FertilSteril, 1994) • Vitamin B12.......blastoselinhibisyonu(Kane MT, JexpZool, 1988) • Non-esansiyelaminoasitler......blastosistgelişimi(Lane&Gardner, J.ReprodFertil, 1997)

5. IVF Mediumları • SOF medium (Tervit et al, J Reprod Fertil, 1972) • HTF medium (Quinn et al, Fertil Steril, 1985) • G1 ve G2 (Gardner&Lane, Hum Reprod Update, 1997)

6. İnorganik İyonlar • Potasyum • Klorid • Kalsiyum • Magnezyum • Fosfat

7. Karbohidratlar • Pirüvat • Laktat (D ve L izomerleri) • Glukoz • Membranlarda enzimatik aktivitenin geç gelişmesi • ATP/ADP oranının yüksek olması • Glukoz içermeyen mediumlar (HTF) (Quinn P, J Assist Reprod Genet, 1995, Quinn et al, Fertil Steril, 1995, Mahadevan et al, Hum Reprod, 1997)

8. (Gardner et al, ART and Human Blastocysts, 2001)

9. Aminoasitler • Biyosentetik aktivasyon • Enerji kaynağı • Enerji metabolizması düzenleyicisi • Ozmolit • İntrasellüler pH tamponu • Antioksidan • Şelatör

10. Aminoasitler • Non-esansiyel aminoasitler • Erken dönem hücresel aktiviteyi destekler • Blastosel formasyonunda etkilidir • Esansiyel aminoasitler • Blastosist formasyonu, ICM’de hücresel artış, blastosist viabilitesinde artış (Gardner&Lane, Hum Reprod Update, 1997)

11. Amonyum • Aminoasitlerin 37 C parçalanmasıyla • Embriyoların aminoasitleri metabolize etmesiyle • Embriyoların kendileri tarafından salgılanır (Gardner&Lane, Biol Reprod, 1993, Nakazawa et al, J Reprod Fertil, 1997, Houghton et al, Hum Reprod 2002)

13. Erken Dönem Preimplante Embriyolar • Düşük biyosentetik aktivite • Düşük O2 tüketimi • Pirüvat • Non-esansiyel aminoasitler • İndividual hücreler • Tek tip hücre

14. KompaktlaşmaSonrasıEmbriyolar • Yüksek biyosentetik aktivite • Yüksek O2 tüketimi • Glukoz • Non-esansiyel ve esansiyel aminoasitler • Embriyonik genom • Transport epiteli • ICM ve trofoektodermal hücreler

15. IVF Mediumları • İnorganik iyonlar • Karbohidratlar • Aminoasitler • Vitaminler (Behr et al, Hum Reprod, 1999, McKiernan et al, Hum Reprod, 2000) • EDTA (Gardner&Lane, Hum Reprod, 1998) • Hormonlar (Wu J-T, Biol Reprod, 1987) • Büyüme faktörleri (Sjoblom et al, Hum Reprod 1999, Kim et al, Fertil Steril, 2001) • Antioksidanlar (Gardiner et al, Biol Reprod, 1998) ?

16. Ardışık veya Tek Medium ? • Erken preimplante embriyolar için tuba uterina • Geç preimplante embriyolar için uterus salgılarını taklit ederler (Gardner DK, Theriogenology, 1998) • Embriyolar içinde bulundukları ortamdan gereksinimlerini ihtiyaçlarına göre alırlar (Biggers JD, RBM Online, 2002)

17. Blastosist 0.5 µl medium

18. Oksidatif Stres • Antioksidanlar (lipoat)

19. İnternal pH (pHi) Medium pH 7.4 Dale et al, Hum Reprod, 1998, Phillips et al, Hum Reprod, 2000

21. IVF Mediumlarının Kullanılması • Transport • Raf ömrü, saklanması • Hazırlanması • İnkübatörde kalma süresi • Gametlerin inseminasyon öncesi inkübasyon süresi • İnkübatör özellikleri

22. IVF Mediumlarının Kullanılması • Yağ • Çoklu embriyo kültürü • Medium miktarı

23. Mediumların Performansı ? • Embriyo kalitesi • Blastosist gelişim hızı ve morfolojisi • İmplantasyon oranı • Gebelik ? ? ?