Bruno leonardo de freitas soares
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 35

BRUNO LEONARDO DE FREITAS SOARES PowerPoint PPT Presentation


  • 70 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

BRUNO LEONARDO DE FREITAS SOARES. EFEITOS DO ALPROSTADIL NA SÍNDROME DE ISQUEMIA E REPERFUSÃO EM TECIDO RENAL DE RATOS São Paulo 2005. Projeto de Tese apresentado à Universidade Federal de São Paulo / Escola Paulista de Medicina, para obtenção do título de Mestre em Ciências. 1. Introdução.

Download Presentation

BRUNO LEONARDO DE FREITAS SOARES

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Bruno leonardo de freitas soares

BRUNO LEONARDO DE FREITAS SOARES

EFEITOS DO ALPROSTADIL NA SÍNDROME DE ISQUEMIA E REPERFUSÃO EM TECIDO RENAL DE RATOS

São Paulo

2005

Projeto de Tese apresentado à Universidade Federal de São Paulo/ Escola Paulista de Medicina, para obtenção do título de Mestre em Ciências


1 introdu o

1. Introdução

1.1 - Contexto

  • Bywaters, 1941

    Descrição de síndrome associada a extensas lesões musculares traumáticas

  • Haimovici, 1960

    Síndrome metabólica pós-revascularização

  • Haimovici, 1973

    Síndrome mionefropática ou de reperfusão

  • Burihan, 1982

    O nível de obstrução e a massa muscular envolvida são importantes na síndrome

    Bywaters EGL, Beall D. Crush injuries with impairment of renal function. Br Med Journ 1960,;1:427-32.

    Haimovici H. Arterial embolism with acute massive ischemic myopathy and myoglobinuria. Surgery 1960; 47: 739-47.

    Haimovici H. Miopathic nephrotic metabolic syndrome associated with massive acute arterial occlusion. Arch Surg 1999 nov; 18(5): 439-44.

    Francisco JR, Burihan E. Tratamento das embolias aorto-iliacas. Revista de tema livre do 16 Congresso Brasileiro de Cirurgia 1982; p.79.


1 1 contexto

1.1- Contexto

  • Myers, 1986

     Injúria renal decorre da magnitude e da duração da isquemia

  • Joves, 1982

     A isquemia leva ao edema intersticial com obstrução tubular e necrose tubular aguda

  • Ward, 1988

     Pouco progresso no tratamento a despeito do conhecimento

    Myers BD, Mran SM. Hemodinamically mediated acute renal failure. N Eng J Med 1986;314:97.

    Joves DB. Ultrastructure of acute renal failure. Lab Invest 1982;46:254.

    Ward MH. Factors predictive of acute renal failure in rhabomyolysis. Arch Int Med 1988; 148: 1553-7.


1 1 contexto1

1.1- Contexto

  • Granger, 1988

     Radicais livres de oxigênio e lesão celular

  • Vargas, 1995

     Efeito atenuante da PGE1 no tecido isquêmico renal reperfundido em ratos

  • Kelly, 1996

     Mecanismo direto e indireto de lesão celular: Molécula de adesão intercelular tipo 1 (ICAM1)

    Granger DN. Role of Xanthine oxidase and granulocytes in ischemia-reperfusion injury. Am J Physiol 1988;225:1269-75.

    Vargas AV. Krishnamuthi V, Masih R, Robinson AV, Schulak JA. Prostaglandin E1 attenuation of ischemic renal reperfusion injury in the rat. J AM Coll Surg 1995;180(6):713-7.

    Kelly KJ, Williams JR, Colvin RB, Bonventre JV. Antibody to intercellular adhesion molecule 1 deficient mice are protected against ischemic renal injury. J Clin Invest 1996;97:1056-63.


1 1 contexto2

1.1- Contexto

  • Alprostadil: análogo da prostaglandina (PGE1)

  • Vargas, 1995

     Bloqueio de substâncias quimioatrativas

  • Linderman, 1998

     Diminuição da adesividade leucocitária

  • Gupta, 1998

     Diminuição da expressão das moléculas ICAM-1

  • Linderman, 1998

     Diminuição da resistência vascular periférica

    Vargas AV. Krishnamuthi V, Masih R, Robinson AV, Schulak JA. Prostaglandin E1 attenuation of ischemic renal

    reperfusion injury in the rat. J AM Coll Surg 1995;180(6):713-7.

    Lindermann S, Gierer C, Darius H. Prostacyclin inhibits adhesion of polymorphonuclear leukocytes to human vascular endothelial cells due to adhesion molecule independent regulatory mechanisms. Basic Res Cardiol 2003 Feb;98(1)8-15.

    Gupta PC, Matsushita M, Oda K, Nishikimi N, Sakurai T, Nemura Y. Attenuation of renal ischemia-reperfusion injury in rats by alloprurinol and prostaglandin E1. Eur Surg Res 1998;30(2):102-7.


1 2 hip tese

1.2- Hipótese

O uso do alprostadil, por via intravenosa, atenua o efeito das lesões metabólicas e histológicas e imuno-histoquímicas na isquemia e reperfusão em tecido renal de ratos


1 3 objetivo

1.3- Objetivo

Avaliar os efeitos da infusão intravenosa do alprostadil num modelo experimental de isquemia e reperfusão em tecido renal de ratos


2 m todos

2. Métodos

Projeto aprovado pelo comitê de ética da UNCISAL, protocolo 16-A, em13/10/2004.

2.1-Tipo de estudo

- Ensaio clínico aleatório em animais de experimentação

2.2-Local

2.2.1-Laboratório do Departamento de Cirurgia Experimental e Técnica Operatória - FMSP-BA


2 m todos1

2. Métodos

2.3 –Amostra

  • Ratos machos

  • Linhagem OUT B Wistar

  • Idade - 90 a 120 dias

  • Peso - 250 a 350 g

  • 15 dias - observação e adaptação

  • Condições controladas

    2.3.1 – Amostragem

  • Animais provenientes do biotério do Departamento de Cirurgia Experimental e Técnica Operatória da FMSP-BA


  • 2 m todos2

    2. Métodos

    2.4 Procedimentos

    2.4.1 - Randomização

    - Envelopes

    - Sorteio aleatório

    - Examinadores


    Bruno leonardo de freitas soares

    2. Métodos

    2.4 Procedimentos

    2.4.2 - Grupos experimentais

    • Grupo Sh (10 animais ) – Realização de microcirurgia sem isquemia ou reperfusão. Infusão de Solução salina (SF 0,9%) atráves da veia jugular externa (V.J.E) após 1h e 30 minutos de procedimento.

    • Grupo Ct ( 10 animais ) – Procedimento microcirúrgico normal, com isquemia e reperfusão. Infusão de SF 0,9% antes da reperfusão.

    • Grupo Al ( 10 animais ) – Procedimento idêntico ao Grupo II, exceto pela infusão de 20microgramas/kg Alprostadil, antes da reperfusão.


    2 4 procedimentos

    2.4 Procedimentos

    2.4.3 Modelo experimental

    • Pré operatório

      • Foram submetidos a jejum (6h)

      • Foram devidamente pesados

      • Submetidos a sorteio

    • Anestesia

      • Fenobarbital sódico (45mg/kg) via intraperitoneal

      • Sono profundo

      • Estímulos dolorosos irresponsivos

      • Doses complementares de anestésico


    2 4 procedimentos1

    2.4- Procedimentos

    2.4.3- Modelo Experimental

    • Dissecção, isolamento e cateterização da veia jugular externa

    • Tricotomia ventral abdominal com lâmina de barbear

    • Incisão abdominal mediana

    • Abordagem transperitoneal da aorta, com isolamento do segmento abdominal até acima das artérias renais

    • Oclusão da aorta supra-renal por 30 minutos(Grupos Ct e Al)

    • Liberação do clampe e reperfusão 1 h (Grupos Ct e Al)

    • No Grupo Sh não há isquemia e reperfusão


    2 4 procedimentos2

    2.4- Procedimentos

    2.4.3- Modelo Experimental

    • Infusão de SF 0,9% (Grupo Ct) e Alprostadil (Grupo Al), antes da reperfusão

    • Amostras de sangue

    • Nefrectomia esquerda e preparo das peças

    • Eutanásia – dose anestésica letal


    2 4 procedimentos3

    2.4 Procedimentos


    2 4 procedimentos4

    2.4 Procedimentos

    2.4.3 Modelo experimental

    • Estudo histológico (microscopia ótica)

      • Hematoxilina eosina

      • Ácido Periódico de Schiff (PAS)

      • Azul patente (Azul de Alcion)

    • Estudo Imunohistoquímico (Laboratório de biologia molecular da Fiocruz-Salvador)

      • Amostras de Tecido Renal


    2 5 1 vari veis prim rias

    2.5.1- Variáveis primárias

    2.5.1.1- Estudo imunohistoquímico

    • Dosagem de Molécula de adesão intercelular do tipo 1 (ICAM-1)

    • Análise qualitativa de desarranjo estrutural


    2 5 1 vari veis prim rias1

    2.5.1- Variáveis primárias

    Tecido renal sem isquemia

    Tecido renal com isquemia e reperfusão


    2 4 procedimentos5

    2.4 Procedimentos

    Grau II

    Grau I


    2 4 procedimentos6

    2.4 Procedimentos

    Grau IV

    Grau III


    2 5 1 vari veis prim rias2

    2.5.1- Variáveis primárias

    2.5.1.2- Estudo histológico Jablonski, 1983

    • Grau 0: Normal

    • Grau 1: Mitoses e necrose de células individualmente

    • Grau 2: Necrose de células adjacentes aos túbulos contorcidos proximais, porém sendo estes ainda viáveis

    • Grau 3: Necrose confinada ao terço distal do túbulo contorcido proximal. Desarranjo estrutural moderado

    • Grau 4: Necrose abrangendo todas as porções do túbulo contorcido proximal com desarranjo estrutural severo intersticial


    2 5 1 vari veis prim rias3

    2.5.1.2 Estudo histológico

    2.5.1 Variáveis primárias


    2 5 1 vari veis prim rias4

    2.5.1.2 Estudo histológico

    2.5.1 Variáveis primárias

    Grau II

    Grau I


    2 5 1 vari veis prim rias5

    2.5.1 Variáveis primárias

    • 2.5.1.2 Estudo histológico

    Grau IV

    Grau III


    Bruno leonardo de freitas soares

    2.5.2 Variáveis secundárias

    2.5.2.1- Avaliação bioquímica sérica

    • Desidrogenase lática Leucometria

    • Creatina-fosfoquinasePotássio

    • Lactato Hemogasimetria

    • Uréia

    • Sódio

    • Creatinina

    • Cálcio


    Bruno leonardo de freitas soares

    2.6- Modelo Estatístico

    2.6.1- Cálculo do tamanho da amostra

    2.6.2- Análise estatística

    • Análise de variância por postos de Kruskal Wallis

    • Teste de Mann-Whitney para duas amostras independentes

    • P = 0,05 ou 5% Nível de rejeição da hipótese de nulidade


    3 resultados 3 3 vari veis prim rias

    3. Resultados 3.3 Variáveis Primárias

    Gráfico 1. Distribuição dos graus de necrose entre os grupos


    3 resultados 3 3 vari veis prim rias1

    3. Resultados 3.3 Variáveis Primárias

    Gráfico 2. Análise Imunohistoquímica entre os grupos


    3 resultados 3 3 vari veis prim rias2

    3. Resultados3.3 Variáveis Primárias

    Gráfico 3. Comparativo da análise histológica entre os grupos


    3 resultados 3 1 caracteriza o da amostra

    3. Resultados 3.1 Caracterização da amostra

    □ Grupo Sh □ Grupo Ct □ Grupo Al

    Gráfico 4. Médias do pesos dos ratos dos três grupos de tratamento.


    3 resultados 3 3 vari veis secund rias

    3. Resultados 3.3 Variáveis secundárias

    Gráfico 5. Comparação dos níveis de eletrólitos dos três grupos de tratamento.


    3 resultados 3 3 vari veis secund rias1

    3. Resultados 3.3 Variáveis secundárias

    ■ Grupo Al

    Gráfico 6. Comparação de LDH e CPK dos três grupos de tratamento.


    3 resultados 3 3 vari veis secund rias2

    3. Resultados 3.3 Variáveis secundárias

    Controle

    Alprostadil

    SF0,9%

    Gráfico 7. Comparação da Gasometria (pO2 e pCO2) dos três grupos de tratamento.


    3 resultados 3 3 vari veis secund rias3

    3. Resultados 3.3 Variáveis secundárias

    ■ Alprostadil

    Gráfico 8. Comparação de Lactato e Uréia dos três grupos de tratamento.


    4 conclus es

    4. Conclusões

    • O Alprostadil, na dose de 20 microgramas/kg, atenua as repercussões imunohistoquímicas e histológicas em tecido renal de ratos submetidos a um modelo experimental de isquemia e reperfusão com clampeamento aórtico supra-renal

    • Exceto pelos níveis de CPK, o Alprostadil na dose de 20 microgramas/kg, não foi capaz de modificar as alterações metabólicas pelos parâmetros utilizados neste estudo


  • Login