Antitrombin III,
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 25

Antitrombin III, heparin kofaktor II PowerPoint PPT Presentation


  • 55 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

Antitrombin III, heparin kofaktor II. Muszbek László Debreceni Egyetem, Orvos és Egészségtudományi Centrum, Klinikai Kutató Központ. Mi utal thrombophiliára?. 1/ Mélyvénás thrombosis relatíve fiatal korban (<55 év) 2/ Recurrens thrombosis 3/ Thrombosis szokatlan helyen

Download Presentation

Antitrombin III, heparin kofaktor II

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Antitrombin III,

heparin kofaktor II

Muszbek László

Debreceni Egyetem,

Orvos és Egészségtudományi Centrum,

Klinikai Kutató Központ


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Mi utal thrombophiliára?

1/ Mélyvénás thrombosis relatíve

fiatal korban (<55 év)

2/ Recurrens thrombosis

3/ Thrombosis szokatlan helyen

(nem alsó végtagon)

4/ Familiáris elôfordulás

(öröklött thrombophilia)


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Thrombophiliák felosztása

1/ Öröklött

2/ Szerzett

3/ Öröklött + szerzett


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Öröklött thrombophiliák okai

Az inhibitor rendszer deficienciája

Antitrombin III deficiencia

Az inaktivátor rendszer deficienciája

Protein C, Protein S deficiencia

Fokozott faktor szint vagy abnormális faktorok

Aktivált protein C resisztencia (FV Leiden)

Protrombin 20210A allél

Dysfibrinogenaemia thrombosissal

Magas FVIII, FIX, FXI szint ?

Csökkent fibrinolítikus aktivitás

Plazminogen deficiencia, FXII hiány?

Egyéb Homocystinuria


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

10%

40%

35%

5%

10%

A vénás thrombosisokra való fokozott hajlam

genetikai okainak relatív gyakorisága

APC rezisztencia - FV Leiden

Ismert, ritka thrombophiliák

AT III, protein C, protein S def.

Protrombin 20210 A allél

Ismeretlen


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Asn96, 135, 155, 192

SZH

SZH

SZH

SZH

N-

-C

Ms.: 58.000 D

Heparin-kötö

helyek

Trombin

gátlás

Az AT III sémás szerkezete

  • -AT III (90%) (15% szénhidrát), -AT III (10%)

    -AT III szorosabban kötődik a heparinhoz és a

    heparan szulfát proteoglikánhoz (HSPG), mint az -AT III ,

    gyorsabbal eliminálódik a keringésből, de több van az

    érfalhoz kötve.


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Antitrombin III gén

1q22-25, 7 exon és 6 intron, 13.480 bp.

700 bp gén promoter, májspecifikus transzkripciós

faktorok (HNF3, HNF4) kötôdése

32 aminósav vezető szekvencia, 432 aminósav érett fehérje


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Az antitrombin III funkciója

Serpin, de progresszív inhibitor, a gátló hatása heparin

vagy HSPG jelenlétében 1000x-re gyorsul

Fő fiziológiás hatása: a trombin és FXa gátlása (de gátolja

a FIXa-t, a FXIa-t a FXIIa-t és a FVIIa-SzF komplexet is)

Az aktivációs komplexben a thrombocyták felszínén lévő

FXa-t vagy a fibrinhez kötött trombint az AT III még

heparin jelenlétében sem gátolja, az alvadékból kikerülő

szabad trombint/FXa-t viszont hatékonyan gátolja

(“scavanger funkció”).

AT III-trombin (TAT) és AT III-FXa komplex gxorsan

eliminálódik a keringésből (döntően a máj veszi fel, LDL

receptor-related protein)


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Heparin-AT III kölcsönhatás

Heparin: szulfatált glükózaminoglikán

Nem frakcionált heparin: 7-25.000 D

Az AT III-mal való kölcsönhatásban döntő a szulfatált

pentasaccharid egység (HPSPG-ben is ez van)

Magas és alacsony ms-ú frakciók.

Alacsony ms.-ú heparin a nem frakcionált heparin kémiai

vagy enzimatikus hasítással (1,8-12.000 D)

Trombin gátláshoz legalább 18 saccharidból álló molekula.

Anti-FXa:anti-trombin hatás aránya

nem frakcionált: 1:1

alacsony ms.ú 2:1-4:1

pentasaccharid (fondaparinux): trombinra nem hat


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Heparin hatása az AT III-ra

antitrombin +

pentaszacharid

antitrombin

1-antitripszin


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

FXa

TR

AT

AT

AT

TR

H

H

Konvencionális heparin

AT

AT

FXa

FXa

TR

H

H

Az antitrombin III hatásmechanizmusa

Alacsony ms.-ú heparin

Heparin nélkül


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

AT III meghatározás

I. Funkcionális tesztek

Heparin kofaktor meghatározás

Progresszív antitrombin meghatározás

1. Alvadási tesztek

2. Kromogén tesztek

Antitrombin aktivitás meghatározás

Anti-faktor Xa teszt

II. Antigén meghatározás

Turbidimetria, Nefelometria

III. Heparin kötôdés kémiai vizsgálata


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Heparin kofaktor aktivitás meghatározás

kromogén szubsztráttal

Heparin + AT III  Heparin - AT III komplex

trombin (feleslegben)

Heparin - AT III + —————————

FXa (feleslegben)

Heparin - AT III - trombin + trombin (maradék)

—————————————————————

 Heparin - AT III - FXa + FXa (maradék)

trombin

R-pNA ———— R-COOH + pNA

FXa

Rtr CBZ-Gly-Pro-ArgRxa: Bz-IIe-Glu-Gly-Arg


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

AT III meghatározás problémái

Szűrőteszt: funkcionális kromogén teszt

Az anti-trombin alapú teszt hátránya:

nem specifikus, heparin kofaktor II-t is

beleméri ha bovin trombin akkor jobb

Anti-FXa alapú tesztet a heparin kofaktor II nem

befolyásolja

Szűk referencia tartomány (80-120%), a döntés a

65-80%-os tartományban nagyon nehéz és súlyos

következményekkel jár.

Többszöri mérés, genetikai teszt


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Öröklött antitrombin III hiány

laboratóriumi típusai

TípusAntigénHeparin kofaktorProgresszív Heparin

aktivitás aktivitás affinitás*

IaNormál

IbCsökkent

IIaNormál Csökkent

IIbNormálNormál v.

emelkedett

IIc#NormálNormál Csökkent

*Heparin kötô teszttel meghatározva

#IIc típusú heterozigóták: nincs fokozott thrombosis rizikó,

öröklôdésmenet AR


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Antitrombin III hiány

Öröklésmenet: AD (II/HBS: AR)

Gyakoriság:1:2000-5000

A thrombophila oka: 3-5%

Thrombosis rizikó (OR)21, 5

Plazma szint heterozig.:30%-70%

A heterozigóták tünetei: DVT, PE, MVT, CVT

I. típus és II/RS, II/PE típus esetén

nincsenek homozigóták : letális mutáció

II/HBS esetén csak a homozigóták betegek

Spanish multicenter (family) study on thrombophilia

 Leiden thrombophilia study (general population)


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Öröklött antitrombin III hiány

típusai

I. Típus: Alacsony antitrombin

aktivitás és antigén

II. Típus:Abnormális antitrombin variáns

RS, az aktív centrumra gyakorolt hatás

(382-402; Arg393-Ser394: trombin

hasítási hely)

HBS, a heparin kötô helyre gyakorolt

hatás

PE, pleiotróp (multiplex) hatás (402-429)


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Antitrombin gén mutációk

altípusonként

FajtaÖsszesen

I. Típus: 92 113

II. Típus:

RS 12 55

HBS 12 70

PE 11 18


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Debrecenben talált AT III mutációk

Asn96, 135, 155, 192

SZH

SZH

SZH

SZH

N-

-C

G392D

P41L

L99F

R47H

V295V

Q305Q

Heparin-kötö

helyek

Trombin

gátlás

P41L: AT III Basel (BA)

R47H: ATIII Padua I, ATIII Rouen I, ATIII Bligny(KM)

L99F: AT III Budapest 3 (FK, HM, SJ, BJ, RK, GE, KSGY)

G392D: AT III Stockholm (KMP)


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Referencia tartomány: Antitrombin III aktivitás: 80-120%,Antitrombin III antigén:0.19-0.31 g/L

1Blajchman et al. Blood, 1992; 79: 1428-34.

2Olds et al.FEBS Lett, 1992; 300:241-6.

3Chang and Tran, JBC, 1986; 261:1174-6.

4Owen et al. Blood, 1987 ; 69:1275-9., Caso et al. Thromb Res, 1990;58:185-90.

Wolf et al. Thromb Haemost, 1990;63:215-9.


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Antithrombin III-Stockholm: A codon 392 (Gly-Asp) mutation with normal heparin binding and impaired serine protease reactivity

Blajchman et al. Blood, 1992, 79: 1428-34.

26 éves nőbeteg OAC+MVT

Beteg plazma és kontroll plazma Heparin-sepharose oszlopon azonos elúciós profil, SDS-PAGE-n azonos mobilitás

Beteg és kontroll plazmából izolált AT III humán trombinnal inkubálva a beteg AT III nem alkot TAT komplexet

Site-directed mutagenesis- sejt mentes fehérjeszintézis:

normál AT III 15 sec alatt, beteg AT III csak 5 perc után alkot TAT komplexet

Heparin hozzáadása fokozta a TAT képződést

 Az AT III RS variáns oka a trombin AT III aktiv centrumának fel nem ismerése


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

AT III Budapest 3- családvizsgálat


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Szerzett AT III deficienciák

Csökkent szintézis

Consumptio

Leukocyta proteázok elhasítják az reaktív hurkot

Máj elégtelenség

Súlyos sepsis

Trauma, égés

Malignus megbetegedések kemoterápia)

Extracorporális keringés

Nephrosis syndroma

Acut DIC


Antitrombin iii heparin kofaktor ii

Heparin kofaktor II

Szintén serpin (66.000 D), 33% homológia az AT III-mal

Csak a trombint gátolja, egyéb aktív alvadási

faktorokat nem.

Szintén progresszív inhibitor, a heparin és a dermatán

szulfát fokozza a hatását

Más a hatásmechanizmus mint az AT III esetében

Az aktív centrumban leucin van, amely mellett a trombin

nem hasít (katepszin G-t, kimotripszint gátol a serpin

mechanizmussal)

Nem a trombin aktív centrumához, hanem az exosite

1-hez kötődik

Hetrozigóta deficienciája nem okoz thrombophiliát


  • Login