Antitrombin III,
Download
1 / 25

Antitrombin III, heparin kofaktor II - PowerPoint PPT Presentation


  • 79 Views
  • Uploaded on

Antitrombin III, heparin kofaktor II. Muszbek László Debreceni Egyetem, Orvos és Egészségtudományi Centrum, Klinikai Kutató Központ. Mi utal thrombophiliára?. 1/ Mélyvénás thrombosis relatíve fiatal korban (<55 év) 2/ Recurrens thrombosis 3/ Thrombosis szokatlan helyen

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about ' Antitrombin III, heparin kofaktor II' - nadine


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript

Antitrombin III,

heparin kofaktor II

Muszbek László

Debreceni Egyetem,

Orvos és Egészségtudományi Centrum,

Klinikai Kutató Központ


Mi utal thrombophiliára?

1/ Mélyvénás thrombosis relatíve

fiatal korban (<55 év)

2/ Recurrens thrombosis

3/ Thrombosis szokatlan helyen

(nem alsó végtagon)

4/ Familiáris elôfordulás

(öröklött thrombophilia)


Thrombophiliák felosztása

1/ Öröklött

2/ Szerzett

3/ Öröklött + szerzett


Öröklött thrombophiliák okai

Az inhibitor rendszer deficienciája

Antitrombin III deficiencia

Az inaktivátor rendszer deficienciája

Protein C, Protein S deficiencia

Fokozott faktor szint vagy abnormális faktorok

Aktivált protein C resisztencia (FV Leiden)

Protrombin 20210A allél

Dysfibrinogenaemia thrombosissal

Magas FVIII, FIX, FXI szint ?

Csökkent fibrinolítikus aktivitás

Plazminogen deficiencia, FXII hiány?

Egyéb Homocystinuria


10%

40%

35%

5%

10%

A vénás thrombosisokra való fokozott hajlam

genetikai okainak relatív gyakorisága

APC rezisztencia - FV Leiden

Ismert, ritka thrombophiliák

AT III, protein C, protein S def.

Protrombin 20210 A allél

Ismeretlen


Asn96, 135, 155, 192

SZH

SZH

SZH

SZH

N-

-C

Ms.: 58.000 D

Heparin-kötö

helyek

Trombin

gátlás

Az AT III sémás szerkezete

  • -AT III (90%) (15% szénhidrát), -AT III (10%)

    -AT III szorosabban kötődik a heparinhoz és a

    heparan szulfát proteoglikánhoz (HSPG), mint az -AT III ,

    gyorsabbal eliminálódik a keringésből, de több van az

    érfalhoz kötve.


Antitrombin III gén

1q22-25, 7 exon és 6 intron, 13.480 bp.

700 bp gén promoter, májspecifikus transzkripciós

faktorok (HNF3, HNF4) kötôdése

32 aminósav vezető szekvencia, 432 aminósav érett fehérje


Az antitrombin III funkciója

Serpin, de progresszív inhibitor, a gátló hatása heparin

vagy HSPG jelenlétében 1000x-re gyorsul

Fő fiziológiás hatása: a trombin és FXa gátlása (de gátolja

a FIXa-t, a FXIa-t a FXIIa-t és a FVIIa-SzF komplexet is)

Az aktivációs komplexben a thrombocyták felszínén lévő

FXa-t vagy a fibrinhez kötött trombint az AT III még

heparin jelenlétében sem gátolja, az alvadékból kikerülő

szabad trombint/FXa-t viszont hatékonyan gátolja

(“scavanger funkció”).

AT III-trombin (TAT) és AT III-FXa komplex gxorsan

eliminálódik a keringésből (döntően a máj veszi fel, LDL

receptor-related protein)


Heparin-AT III kölcsönhatás

Heparin: szulfatált glükózaminoglikán

Nem frakcionált heparin: 7-25.000 D

Az AT III-mal való kölcsönhatásban döntő a szulfatált

pentasaccharid egység (HPSPG-ben is ez van)

Magas és alacsony ms-ú frakciók.

Alacsony ms.-ú heparin a nem frakcionált heparin kémiai

vagy enzimatikus hasítással (1,8-12.000 D)

Trombin gátláshoz legalább 18 saccharidból álló molekula.

Anti-FXa:anti-trombin hatás aránya

nem frakcionált: 1:1

alacsony ms.ú 2:1-4:1

pentasaccharid (fondaparinux): trombinra nem hat


Heparin hatása az AT III-ra

antitrombin +

pentaszacharid

antitrombin

1-antitripszin


FXa

TR

AT

AT

AT

TR

H

H

Konvencionális heparin

AT

AT

FXa

FXa

TR

H

H

Az antitrombin III hatásmechanizmusa

Alacsony ms.-ú heparin

Heparin nélkül


AT III meghatározás

I. Funkcionális tesztek

Heparin kofaktor meghatározás

Progresszív antitrombin meghatározás

1. Alvadási tesztek

2. Kromogén tesztek

Antitrombin aktivitás meghatározás

Anti-faktor Xa teszt

II. Antigén meghatározás

Turbidimetria, Nefelometria

III. Heparin kötôdés kémiai vizsgálata


Heparin kofaktor aktivitás meghatározás

kromogén szubsztráttal

Heparin + AT III  Heparin - AT III komplex

trombin (feleslegben) 

Heparin - AT III + —————————

FXa (feleslegben) 

 Heparin - AT III - trombin + trombin (maradék)

—————————————————————

 Heparin - AT III - FXa + FXa (maradék)

trombin

R-pNA ———— R-COOH + pNA

FXa

Rtr CBZ-Gly-Pro-Arg Rxa: Bz-IIe-Glu-Gly-Arg


AT III meghatározás problémái

Szűrőteszt: funkcionális kromogén teszt

Az anti-trombin alapú teszt hátránya:

nem specifikus, heparin kofaktor II-t is

beleméri ha bovin trombin akkor jobb

Anti-FXa alapú tesztet a heparin kofaktor II nem

befolyásolja

Szűk referencia tartomány (80-120%), a döntés a

65-80%-os tartományban nagyon nehéz és súlyos

következményekkel jár.

Többszöri mérés, genetikai teszt


Öröklött antitrombin III hiány

laboratóriumi típusai

Típus Antigén Heparin kofaktor Progresszív Heparin

aktivitás aktivitás affinitás*

Ia    Normál

Ib    Csökkent

IIa Normál   Csökkent

IIb Normál   Normál v.

emelkedett

IIc# Normál  Normál Csökkent

* Heparin kötô teszttel meghatározva

# IIc típusú heterozigóták: nincs fokozott thrombosis rizikó,

öröklôdésmenet AR


Antitrombin III hiány

Öröklésmenet: AD (II/HBS: AR)

Gyakoriság: 1:2000-5000

A thrombophila oka: 3-5%

Thrombosis rizikó (OR) 21, 5

Plazma szint heterozig.: 30%-70%

A heterozigóták tünetei: DVT, PE, MVT, CVT

I. típus és II/RS, II/PE típus esetén

nincsenek homozigóták : letális mutáció

II/HBS esetén csak a homozigóták betegek

Spanish multicenter (family) study on thrombophilia

 Leiden thrombophilia study (general population)


Öröklött antitrombin III hiány

típusai

I. Típus: Alacsony antitrombin

aktivitás és antigén

II. Típus: Abnormális antitrombin variáns

RS, az aktív centrumra gyakorolt hatás

(382-402; Arg393-Ser394: trombin

hasítási hely)

HBS, a heparin kötô helyre gyakorolt

hatás

PE, pleiotróp (multiplex) hatás (402-429)


Antitrombin gén mutációk

altípusonként

Fajta Összesen

I. Típus: 92 113

II. Típus:

RS 12 55

HBS 12 70

PE 11 18


Debrecenben talált AT III mutációk

Asn96, 135, 155, 192

SZH

SZH

SZH

SZH

N-

-C

G392D

P41L

L99F

R47H

V295V

Q305Q

Heparin-kötö

helyek

Trombin

gátlás

P41L: AT III Basel (BA)

R47H: ATIII Padua I, ATIII Rouen I, ATIII Bligny(KM)

L99F: AT III Budapest 3 (FK, HM, SJ, BJ, RK, GE, KSGY)

G392D: AT III Stockholm (KMP)


Referencia tartomány: Antitrombin III aktivitás: 80-120%,Antitrombin III antigén:0.19-0.31 g/L

1Blajchman et al. Blood, 1992; 79: 1428-34.

2Olds et al.FEBS Lett, 1992; 300:241-6.

3Chang and Tran, JBC, 1986; 261:1174-6.

4Owen et al. Blood, 1987 ; 69:1275-9., Caso et al. Thromb Res, 1990;58:185-90.

Wolf et al. Thromb Haemost, 1990;63:215-9.


Antithrombin III-Stockholm: 80-120%,Antitrombin III antigén:0.19-0.31 g/L A codon 392 (Gly-Asp) mutation with normal heparin binding and impaired serine protease reactivity

Blajchman et al. Blood, 1992, 79: 1428-34.

26 éves nőbeteg OAC+MVT

Beteg plazma és kontroll plazma Heparin-sepharose oszlopon azonos elúciós profil, SDS-PAGE-n azonos mobilitás

Beteg és kontroll plazmából izolált AT III humán trombinnal inkubálva a beteg AT III nem alkot TAT komplexet

Site-directed mutagenesis- sejt mentes fehérjeszintézis:

normál AT III 15 sec alatt, beteg AT III csak 5 perc után alkot TAT komplexet

Heparin hozzáadása fokozta a TAT képződést

 Az AT III RS variáns oka a trombin AT III aktiv centrumának fel nem ismerése


AT III Budapest 3- családvizsgálat 80-120%,Antitrombin III antigén:0.19-0.31 g/L


Szerzett AT III deficienciák 80-120%,Antitrombin III antigén:0.19-0.31 g/L

Csökkent szintézis

Consumptio

Leukocyta proteázok elhasítják az reaktív hurkot

Máj elégtelenség

Súlyos sepsis

Trauma, égés

Malignus megbetegedések kemoterápia)

Extracorporális keringés

Nephrosis syndroma

Acut DIC


Heparin kofaktor II 80-120%,Antitrombin III antigén:0.19-0.31 g/L

Szintén serpin (66.000 D), 33% homológia az AT III-mal

Csak a trombint gátolja, egyéb aktív alvadási

faktorokat nem.

Szintén progresszív inhibitor, a heparin és a dermatán

szulfát fokozza a hatását

Más a hatásmechanizmus mint az AT III esetében

Az aktív centrumban leucin van, amely mellett a trombin

nem hasít (katepszin G-t, kimotripszint gátol a serpin

mechanizmussal)

Nem a trombin aktív centrumához, hanem az exosite

1-hez kötődik

Hetrozigóta deficienciája nem okoz thrombophiliát


ad