Alcuni citometri a flusso utilizzano laser a semiconduttori (633 nm) e coloranti fluorescenti per ac...
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Forward Scatter (FSc) Side Fluorescence (SFl) Side Scatter (SSc); PowerPoint PPT Presentation


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Alcuni citometri a flusso utilizzano laser a semiconduttori (633 nm) e coloranti fluorescenti per acidi nucleici che separano i leucociti utilizzando i segnali di:. Forward Scatter (FSc) Side Fluorescence (SFl) Side Scatter (SSc);. Leucocytes. Lymphocytes Monocytes/Macrophages Granulocytes:

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Forward Scatter (FSc) Side Fluorescence (SFl) Side Scatter (SSc);

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Presentation Transcript


Forward scatter fsc side fluorescence sfl side scatter ssc

Alcuni citometri a flusso utilizzano laser a semiconduttori (633 nm) e coloranti fluorescenti per acidi nucleici che separano i leucociti utilizzando i segnali di:

Forward Scatter (FSc)

Side Fluorescence (SFl)

Side Scatter (SSc);


Leucocytes

Leucocytes

  • Lymphocytes

  • Monocytes/Macrophages

  • Granulocytes:

    Neutrophils

    Eosinophils

    Basophils


Forward scatter fsc side fluorescence sfl side scatter ssc

I leucociti vengono anche differenziati sulla base della maggiore o minore quantità di mieloperosidasi (MPO) contenuta nei granuli citoplasmatici. Il sangue viene diluito, le emazie lisate e i leucociti colorati per la (MPO).

Granulociti ed eosinofili = massima quantità di MPO

Monociti = quantità medio -piccola di MPO

Linfociti e Blasti = piccola quantità di MPO

I GB: entrano in una cella di flusso in cui per ciascuna cellula vengono determinate le proprietà bi-dimensionali di dispersione e di assorbimento della luce.

Le cellule colorate assorbono più luce e la disperdono con un angolo diverso rispetto alle cellule non colorate. Il risultato finale e' un citogramma leucocitario bi-dimensionale.


Linee guida f leucocitaria

LINEE GUIDA F. LEUCOCITARIA

La refertazione delle popolazioni leucocitarie deve essere espressa in numero assoluto. La quantificazione percentuale, che da sola può fornire informazioni equivoche, può talvolta integrare efficacemente il numero assoluto; pertanto, la doppia refertazione mantiene un valore informativo.


Lymphocytes

Lymphocytes

  • 1.5 - 3.5 x 109/l

  • Count varies with age

  • Adaptive immune response

  • T cells – cell mediated immunity

  • B cells – antibody mediated immunity NK cells


Linfocitosi

Linfocitosi

  • Linfociti ≥4500 cellule/l negli adulti

  • Linfociti ≥9000 cellule/l nei bambini fino ai 10 anni

  • Infezioni virali, tubercolosi ,brucellosi e tifo

  • Infezione da Bordetella pertussis

  • Linfomi


Linfocitopenia

Linfocitopenia

  • Linfociti1500 cellule/l negli adulti

  • Linfociti 3000 cellule/l nei bambini

  • Immunodeficit congeniti ed acquisiti

  • Stress da aumentata increzione di glucocorticoidi

  • Aplasia midollare

  • Alcune forme di LLA

  • Immunosoppressione da farmaci


Monocytes

Monocytes

0.2 – 0.8 x 109/l

  • Antigen presentation

  • Cytokine production

  • Phagocytosis


Monocitosi

Monocitosi

  • Monociti ≥ 800 cellule/l

  • Tubercolosi

  • Endocarditi batteriche acute

  • Brucellosi

  • Malaria

  • Morbo di Chron

  • Sarcoidosi

  • LES ed artrite reumatoide

  • Linfoma di Hodgkin


Monocitopenia

Monocitopenia

  • Monociti 150 cel/l

  • Stress da glucocorticoidi

  • Aplasia midollare

  • Leucemia a cellule capellute

  • Farmaci immunosoppressivi


Neutrophils

Neutrophils

  • 2.5 - 7.5 x 109/l

  • Large reserve pool

  • 3-5 lobes

  • Granular cytoplasm

  • Transient in blood

  • Major phagocytic role

  • Bacterial killing


Neutrofilia

Neutrofilia

  • Neutrofilia ≥7500cellule/L

  • Infezioni batteriche – germi piogeni (ma anche fungine, parassitarie ed alcune virali)

  • Flogosi immuni e non immuni (ustioni ,emorragie,tumori metastatici, infarto,embolia polmonare)

  • Stress, Adrenalina e Glucocorticoidi

  • Sindromi mieloproliferative ( Leucemia mieloide cronica,mielodisplasia e policitemia vera)

  • Farmaci (glucocorticoidi)


Neutropenia

Neutropenia

  • Neutropenia grave:neutrofili500 cellule/l

  • Neutropenia moderata: 500-1000 cellule/ l

  • Neutropenia lieve:1000-2000 cellule/ l

  • Neutropenia da farmaci (immunosoppressori e antiblastici)

  • Aplasia midollare, leucemie e linfomi

  • Neutropenia isoimmune neonatale (aumentata distruzione da IgG materne verso Antigeni paterni)

  • Neutropenia autoimmune (LES)

  • Neutropenia da aumentata marginazione (setticemia da Gram -, malaria, tifo, rickettiosi)

  • Neutropenia da sequestro splenico (cirrosi)


Hypersegmentation

Hypersegmentation

  • Shift to the right

  • More mature cells kept on

  • Infective and inflammatory sites

  • Severe burns

  • TB, post chemo, pregnancy

“Shift to the left”


Eosinophils

Eosinophils

  • 0.2 - 0.8 x 109/l

  • Bilobed nucleus

    Red granules

    Weakly phagocytic

  • Anti-parasitic action

  • Modulation of hypersensitivity and allergic reactions


Eosinofilia

Eosinofilia

  • Eosinofili ≥800 cellule/l

  • Allergie

  • Infestazioni da metazoi

  • Farmaci

  • Malattie autoimmuni sistemiche

  • Neoplasie

  • Sindromi ipereosinofile


Eosinopenia

Eosinopenia

  • Eosinofili 70 cellule/l

  • Aumentata increzione di glucocorticoidi

  • Infezioni batteriche acute


Basophils

Basophils

  • 0.1 - 0.2 x 109/l

  • Bilobed nucleus

  • Large black granules

  • Inflammatory response

  • Hypersensitivity /allergy


Basofilia

Basofilia

  • Basofili ≥ 20 cellule/ l

  • Ipersensibilità immediata

  • Colite ulcerosa

  • Leucemia mieloide cronica (basofila)

  • Policitemia vera


Basopenia

Stress

Infection

Steroids

Cushing’s syndrome

Basopenia


Platelets

Platelets

  • Fragments of cytoplasm from BM megakaryocyte

  • Major role in coagulation


Platelets 2

Platelets 2

  • Lifespan in peripheral blood 7-10 days

  • Range 150-400x 109/l


Metodi usati per il conteggio automatico delle piastrine

METODI USATI PER IL CONTEGGIO AUTOMATICO DELLE PIASTRINE

  • CITOFLUORIMETRICO

  • IMPEDENZOMETRICO

  • ELETTRO OTTICO


Conta piastrinica

Conta piastrinica

Conta Ottica PLTo

Conta ad impedenza PLTi


Forward scatter fsc side fluorescence sfl side scatter ssc

Metodo impedenziometrico

Piastrine : Istogramma volumetrico

PL = soglia inferiore, PU = soglia superiore,

PDW = platelet distribution width (larghezza della curva tagliata al 20%),

P-LCR = platelet –large cell ratio (percentuale di grandi piastrine).

MPC= Mean PLT Contenent (misura della concentrazione complessiva dei componenti interni delle piastrine)


Forward scatter fsc side fluorescence sfl side scatter ssc

MPV

  • Più alto negli uomini

  • Correlazione inversa non lineare fra MPV e N.ro PLT

  • Aumenta in corso di: Diminuisce in corso di:

    Diabete mellito Leucemia Acuta

    IMA An. Megaloblastica

    Arteriopatie Periferiche

    Malattie mieloproliferative

    Pre-eclampsia

    Splenectomia


Forward scatter fsc side fluorescence sfl side scatter ssc

PDW

  • Indica l'anisocitosi piastrinica.

    Aumenta in corso di:

  • An. Megaloblastica

  • An. Aplastica

  • AREB

  • LMC

  • In presenza di crioglobuline e paraproteine


Forward scatter fsc side fluorescence sfl side scatter ssc

MPC

E' misura della concentrazione complessiva dei componenti interni delle piastrine, fornisce indicazioni su:

  • Morfologia, Attivazione, Screening.

    Di conseguenza utile per:

  • monitoraggio terapie antiaggreganti

  • monitoraggio terapie antinfiammatorie


Quantitative abnormalities 1

Quantitative Abnormalities 1

  • Thrombocytopenia - Decreased count

  • <100 x 109/l - Increasing risk of bleeding in major surgery

  • <50 x 109/l - Increasing risk of bleeding for CID and surgery

  • <10-20 x 109/l - Increasing risk of spontaneous bleeding

  • Causes

  • Immune

  • BM infiltration, chemotherapy etc

  • Inherited defects


Quantitative abnormalities 2

Quantitative abnormalities 2

  • Thrombocytosis - Increased count

  • > 450 x 109/l

  • Reactive eg infection inflammation

  • Chronic bleeding

  • Haematological malignancy


Interferenza nella conta piastrinica

INTERFERENZA NELLA CONTA PIASTRINICA

  • Frammenti eritrocitari

  • Frammenti di globuli bianchi

  • Parassiti, batteri

  • Ombre eritrocitarie

  • Piastrine giganti

  • Aggregati piastrinici

  • Effetto da anticoagulante


Cause pi comuni di conta piastrinica erronea nel paziente ematologico

Cause più comuni di conta piastrinica erronea nel paziente ematologico

AGGREGATI PIASTRINICI

CAUSA FREQUENTE DI CONTA SOTTOSTIMATA

Sono epressione dell’agglutinazione piastrinica in vitro da parte di autoanticorpi

  • IgG EDTA- e temperatura – dipendenti

  • Crioagglutinine EDTA – dipendenti

  • IgG EDTA- dipendenti e temperatura – indipendenti

Gli AUTOANTICORPI EDTA – DIPENDENTI

interagiscono con antigeni criptici della glicoproteina II b,

smascherati dalla chelazione del calcio da parte dell’EDTA


Qualitative defects

Qualitative defects

  • Count may be normal/low/high

  • May be no apparent abnormality on film

  • May show changes eg size, appearance etc

  • Functionality is variably affected

  • May be inherited or acquired


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