1 / 32

BAKTÉRIUMOK TENYÉSZTÉSE

BAKTÉRIUMOK TENYÉSZTÉSE. A növekedést befolyásoló tényezők. Tápanyagok Szénforrás (CH, AS szénlánca), nitrogénforrás (pepton, ammónia) !! növekedési faktorok, vitaminok, nyomelemek Hőmérséklet pszichrofil (<20°C)– mezofil – termofil (>50 Thermus aquaticus) pH

melanion-zenon
Download Presentation

BAKTÉRIUMOK TENYÉSZTÉSE

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. BAKTÉRIUMOK TENYÉSZTÉSE

  2. A növekedést befolyásoló tényezők • Tápanyagok • Szénforrás (CH, AS szénlánca), nitrogénforrás (pepton, ammónia) !! • növekedési faktorok, vitaminok, nyomelemek • Hőmérséklet • pszichrofil (<20°C)– mezofil – termofil (>50 Thermus aquaticus) • pH • acidofil (Lactobacillus) – alkalofil (Vibrio cholerae), legtöbb 7,2-7,6

  3. Oxigénigény • Obligát aerob (csak O2 jelenlétében M. tuberculosis) / fakultatív anaerob / obligát anaerob (Clostridiumok, toxikus az O2,) • CO2 atmoszféra mértéke • légköri = 0.03% • Mikroaerofil (alacsony O2, magas CO2, C. jejuni), aerotoleráns (02 jelenlétében is fermentál S.pyogenes) • Toxikus oxigénformák közömbösítésének képessége: Szuperoxid diszmutáz (2 O2- + 2 H+ H2O2 + O2) Kataláz (2 H2O2 2 H2O + O2)

  4. Táplálkozási típusok - I • Autotróf • szervetlenből szervest építenek fel • ehhez energiaforrás: • fény (fotoautotrófok) • oxidáció (kemoautotrófok) pl. szulfid  szulfát, nitrit  nitrát • kórtani jelentőségük nincs

  5. Táplálkozási típusok - II • Heterotróf • szerves tápanyagot igényelnek • C-forrás: glükóz, tejsav, keményítő, … • N-forrás: aminosavak, … • majdnem az összes patogén ide tartozik • Paratróf • csak élő sejtekben tudnak szaporodni • pl. lepra kórokozója (egértalpban), rickettsiák

  6. Energianyerés típusai • Légzés (aerobok!) • van kataláz és szuperoxid-diszmutáz enzim • szénhidrát anyagcsere: glükóz  piroszőlősav  citrátkör  légzési lánc sok ATP + CO2 + H2O • terminális elektron-akceptor = O2 • Fermentáció (anaerobok!) • nincs enzim a káros oxidációs termékek semlegesítésére glükóz  etanol + tejsav kevés ATP + CO2 + H2

  7. III IV II Log sejtszám I Idő Baktériumok növekedési görbéje Generációs idő 20/40 perc de M. tuberculosis 20h !! I.Lag fázis (adaptáció) II. Log fázis (exponenciális növekedés) III.Stacioner fázis (élő sejtszám változatlan) IV. Deklinációs fázis (hanyatlás, fogyás)

  8. Táptalajok - I • Halmazállapot szerint • folyékony (húslé, buillon) • szilárd (lemez, magas, ferde agar, Koch találta ki) Petri csésze! • Előállítás szerint • természetes (epe, tej, húslé, ...) • mesterséges • Funkció szerint • „normál” • szelektív (pl antibiotikummal gátlódik ami nem érdekel minket) • differenciáló ( biokém tul alapján elkülöníthetőek a hasonló baktériumok) • dúsító STERILITÁS !!!

  9. Táptalajok - II • Ferde és magas agar • Bouillon • Dúsítók: húsos és szérum bouillon

  10. Véres agar Csokoládé agar Táptalajok - III Egyszerű lemez agar

  11. Telepmorfológiai jellemzők • telep nagysága • telep fénye (tükröződő, opál, áttetsző) • telep alak(ép szélű, csipkézett, köldökös , kerek, platószerű) • telep állaga(sima, száraz, gumiszerű, elfolyós) • telep színe(pigment termelés) • hemolízis: és  • tenyészet szaga (hársfa, fokhagyma)

  12. Telepmorfológiai jellemzők • Hogy ezeket lássuk, IZOLÁLT TELEPEK-re van szükségünk:

  13. Mintatenyészetek - I • Escherichia coli agar táptalajon • semmi különös jellemző, átlagos telepek • Klebsiella agar táptalajon • nagy poliszaccharid tok  nyálkás telepek

  14. Mintatenyészetek - II • Bacillus cereusagar táptalajon • erősen nyálkás, csipkézett szélű, felhő-szerű („medúzafő-szerű”) tenyészet, ritka az izolált telep

  15. Mintatenyészetek - III • Proteus mirabilisagar táptalajon • rajzás !

  16. Mintatenyészetek - IVIntracelluláris pigmenttermelés • Staphylococcus aureus • arany pigment • Staphylococcus epidermidis • fehér pigment • Serratia marcescens • vérvörös pigment

  17. Mintatenyészetek - VExtracelluláris pigmenttermelés • Pseudomonas auruginosa • többféle pigment, extracellulárisan  az egész táptalaj elszíneződik • a zöld pigment dominál táptalajon

  18. Véres agaron Csokoládé agaron Mintatenyészetek - VI - hemolízis • -hemolízis: • Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Bacillus cereus • teljes feltisztulás Csak véres agaron •  -hemolízis: • Streptococcus pneumoniae, zöldítő streptococcusok • zöld terület a telepek körül

  19. Anaerob tenyésztésI - Fizikai módszerek • O2 kiforralása • O2 kiszívása (vákuum – anaerosztát) • Szúrt tenyészet magas agaron (karácsonyfa)

  20. Anaerob tenyésztésII - Kémiai módszerek 1. Redoxpotenciál csökkentése • Holman médium (apróra darált húsdarabkák) • tioglikolátos médium • indikátor jelzi az átlevegősödést • lezárás paraffin gyűrűvel

  21. Anaerob tenyésztésII - Kémiai módszerek 2. Preis módszer • erősen O2-igényes reakció játszódik le a tenyésztési térben • GasPak: a tenyészetek behelyezése után a felszakított zacskókban levő reagensek reagálni tudnak egymással, elvonva az oxigént (CO2 fejlesztés)

  22. Anaerob tenyésztésIII - Biológiai módszer • Fortner eljárás • elavult!! • A két részre osztott Petri csésze egyik térfelén erősen aerob baktériumot (pl. Serratia) tenyésztünk, ami elvonja az összes oxigént

  23. Hemokultúra - I • Vér vagy más steril minta tenyésztésére • Milyen esetben alkalmazzuk: • meningitis, endocarditis, bacteraemia, szisztémás fertőzés gyanúja, peritonitis, FUO (=ismeretlen eredetű láz), mesterséges lélegeztetés során kialakuló fertőzés, kórokozó váltás terápia alatt, implantáció utáni láz, … • Inkubációs idő:7-10 nap • de: 80-90%-ban már az első 24 óra alatt pozitív lesz!

  24. Hemokultúra - II • Fontos szabályok • Legalább két minta kell: kül. helyekről, kül. időben ! • Frissen szúrt vénából !! • legjobb a láz kezdetén • elegendő mennyiséget kell levenni (2-30 ml) • Sterilitás!! • Antibiotikum kezelés alatt: • ab-kötő gyöngyökkel • Aerob / anaerob palackpár

  25. Hemokultúra - III

  26. Transzport médiumok - I • Transzport közeg • példa: Stuart médium • a baktériumok maximum 48 óráig túlélnek, de nem szaporodnak • 0,2%-os agar • Tárolás szobahőn! • anaerobok is túlélnek

  27. Transzport médiumok - II • Transzport táptalajok • A baktériumok szaporodnak is benne, mire a laborba érnek • Példák: Uriline, Uricult, Gonoline, stb. • Műanyag lemez két oldalán két vagy három különböző táptalaj (szelektívek is)

  28. Biofilm - I • Jelentősége • vízben élő mikroorganizmusok 99,9%-a biofilmként él a felszíneken • élő szervezetben: felületek kolonizációja (natív és beültetett) • Kialakulása • előkészítő réteg (slime képzés): elektrolitok (Ca2+, Mg2+), fehérjék, stb. • baktériumok letapadása, konzorcium létrehozása • biofilm leszakadása (disszemináció) planktonikus

  29. Biofilm - II • Kimutatása • elektronmikroszkóppal • üvegcső falán, festéssel • Antibiotikum rezisztencia nagyobb • penetráció gátolt • szaporodás lassúbb • géntranszfer sokkal intenzívebb (+leszakadáskor elviszik!)

  30. Antibiotikum rezisztencia: biofilm versus planktonikus fázis Donlan, Clin Microbiol Rev. 2002; 15(2): 167–193.

  31. Biofilm - III • Kórképek biofilmmel: • natív szívbillentyű endocarditis (Streptococcus, S. aureus, Enterococcus , Candida, Aspergillus) • beültetett eszközök: érpálya kanülök (pl. centrális vénás, perifériás), húgyúti katéterek(Enterococcus, Gram -, Pseudomonas, Serratia, Citrobacter), műbillentyű, intrauterin eszközök, fogászati implantátumok (titánium), kontakt lencse, beültetett szemlencse, csípőprotézis, térdprotézis, … • krónikus bakteriális prostatitis • CF (cisztikus fibrózis):Pseudomonas aeruginosa, S. aureus, Burkholderia, H. influenzae (alginát képzés!) • periodontitis, fog plaque

More Related