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维生素 C 的定量测定 PowerPoint PPT Presentation


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维生素 C 的定量测定. 定量测定维生素 C 的方法. 一 . 氧化还原法 1. 直接碘量法 2. 2,6- 二氯酚靛酚滴定法 二 . 分光光度法 1. 紫外快速测定法 2. 2,4- 二硝基苯肼法 3. 高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸 三 . 光电比浊法 四 . 电化学法 五 . 荧光分析法 1. 抗坏铁酸的微量荧光测定法 2. 抗坏铁酸总量的荧光测定 …………. 直接碘量法定量测定维生素 C 的原理. 维生素 c 分子中含有烯二醇基,易被 I2 定量氧化成含二酮基的脱氢维生 c ,故可用直接碘量法测定定含量。

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维生素 C 的定量测定

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Presentation Transcript


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维生素C的定量测定


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定量测定维生素C的方法

  • 一.氧化还原法

  • 1. 直接碘量法

  • 2. 2,6-二氯酚靛酚滴定法

  • 二.分光光度法

  • 1. 紫外快速测定法

  • 2. 2,4-二硝基苯肼法

  • 3. 高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸

  • 三.光电比浊法

  • 四.电化学法

  • 五.荧光分析法

  • 1. 抗坏铁酸的微量荧光测定法

  • 2. 抗坏铁酸总量的荧光测定

  • …………


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直接碘量法定量测定维生素C的原理

  • 维生素c分子中含有烯二醇基,易被I2定量氧化成含二酮基的脱氢维生c,故可用直接碘量法测定定含量。

  • 从上式可以看出,在碱性条件下有利于反应向右进行,但维生素c的还原性很强,在碱性环境中易被空气中的O2氧化,故滴定时加一些HAc使滴定在弱酸性溶液中进行,以减少维被空气氧化所造成的误差。


2 6 c

2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的原理

维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型,还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中,2,6-二氯酚靛酚呈红色,还原后变为无色 。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时,则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以,当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化,此时即为滴定终点。


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O

C

C

HO

O

Cl

C

HO

O

+

OH

N

C

H

+

Cl

OH

HO

C

Cl

C

H OH

2

O

N

O

蓝色)

Cl

O

C

C

O

Cl

O

C

O

N

O

OH

H

C

Cl

C

HO

C

H OH

2

H

2,6-二氯酚靛酚(红色)

还原型抗坏血酸

H

还原型2,6-二氯酚靛酚(无色)

氧化型脱氢抗坏血酸


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紫外快速测定法定量测定维生素C的原理

维生素C的2,6—二氯酚靛酚容量法,操作步骤较繁琐,而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法,是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性,于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差,通过查标准曲线,即可计算样品中维生素C的含量。


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光电比浊法的原理

  • 在酸性介质中,抗坏铁酸与亚硒酸(H2SeO3)能定量地进行氧化还原反应.1mol的抗铁酸能将2mol的亚硒酸还原成硒.在一定条件下,生成的元素硒在溶液中形成稳定的悬浊液.当抗铁酸的浓度在0-4mg/25-50ml的范围内,该溶液生成的浊度与抗坏铁酸的含量成正比.将试液置分光光度计上测其浊度可以定量地测定抗坏铁酸.


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荧光分析法的原理

用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸,然后与邻苯二胺缩合成一种荧光性化合物.样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧化后的样品中加入硼酸,使脱氢抗坏铁酸形成 硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物,它不与邻二苯胺生成荧光化合物.这样可以测定其它荧光杂质的空白荧光强度而加以校正.


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碘量法定量测定维生素C

  • (1)配制0.05mol·l-1I2标准溶液 称取6.5g I2和12.5gkI,

  • 置于小研钵中,加水少许,研磨至全部溶解后移入棕色瓶中,加水500ml,摇匀后避光阴凉处放置过夜。

  • (2)标定I2溶液浓度 吸取25.00ml I2溶液置于250ml锥形瓶中,加水50ml,用标定过的Na 2S2O3标准溶液滴定至浅黄色后,加入0.2%淀粉溶液2-4滴,继续用Na2S2O3溶液滴定至蓝色恰好退去,根据下式计算I2溶液的浓度。


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  • (3)维生素c含量的测定 准确称取约0.2g维生素c,放入锥形瓶中,加入新蒸过的蒸馏水50ml2 mol·l-1HAc使其溶解,加淀粉指示剂1ml,立即用I2标准溶液滴定至浅蓝色,按下式计算维生素c的含量

  • 维生素C含量=c(I2)*V(I2)*M(维生素C)/S样


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二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C

  • 一、试剂

  • 2%草酸溶液: 草酸2g溶于100ml蒸馏水中。

  • 1%草酸溶液: 草酸1g溶于100ml蒸馏水中。

  • 标准抗坏血酸溶液(1mg/ml): 准确称取100mg纯抗坏血酸(应为洁白色,如变为黄色则不能用)溶于1%草酸溶液中,并稀释至100ml,贮于棕色瓶中,冷藏。最好临用前配制。

  • 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mg NaHCO3的热水中,冷却后加水稀释至250ml,贮于棕色瓶中冷藏(4℃)约可保存一周。每次临用时,以标准抗坏血酸溶液标定。


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  • 二、材料

  • 苹果、卷心菜等。

  • 三、器材

  • 锥形瓶(100ml),组织捣碎器,吸量管(10ml),漏斗,滤纸,微量滴定管(5ml),容量瓶(100ml,250ml)。

  • 四、提取

  • 水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果,用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取20g,加入20ml 2%草酸,用研钵研磨,四层纱布过滤,滤液备用。纱布可用少量2%草酸洗几次,合并滤液,滤液总体积定容至50ml。

  • 五、标准液滴定

  • 准确吸取标准抗坏血酸溶液1ml置100ml锥形瓶中,加9ml 1%草酸,用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色,并保持15s不褪色,即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸(取10ml 1%草酸作空白对照,按以上方法滴定)。


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  • 六、样品滴定

  • 准确吸取滤液两份,每份10ml, 分别放入2个锥形瓶内,滴定方法同前。另取10ml 1%草酸作空白对照滴定。

  • 七、计算

  • 式中:VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数;

  • VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数;

  • C为样品提取液的总毫升数;

  • D为滴定时所取的样品提取液毫升数;

  • T为1ml染料能氧化抗坏血酸毫克数;

  • W为待测样品的重量(g)。


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紫外快速测定法定量测定维生素C

  • 一、材料、仪器与试剂

  •     (一)材料:各种水果蔬菜、果汁及饮料。

  •     (二)仪器:紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶(10ml, 25ml)、移液管(0.5ml,1.0ml)、吸管、研钵。

  •     (三)试剂

  • 1.10%盐酸:取浓盐酸133ml,加水稀释至500ml。

  • 2.1%盐酸:取浓盐酸22ml,加水稀释至100ml。

  • 3.1mol/L氢氧化钠溶液:称取40gNaOH,加蒸馏水,不断搅拌至溶解,然后定容至1000ml。


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1

2

3

4

5

6

7

8

标准抗坏血酸溶液加入体积(ml)

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.8

1.0

9.9

9.8

9.7

9.6

9.5

9.4

9.2

9.0

总体积(ml)

10.0

10.0

10.0

10.0

10.0

10.0

10.0

10.0

抗坏血酸溶液浓度(ug/ml)

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6.0

8.0

10.0

  • 二、操作步骤

  •     (一)标准曲线的制作

  • 1.抗坏血酸标准溶液的配制:用分析天平准确称取抗坏血酸10mg,加2ml 10%盐酸,加蒸馏水定容至100ml,混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100ug/ml。

  • 2. 标准曲线的绘制


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  •   3.消光值的测定:以蒸馏水为空的,在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值,以抗坏血酸的含量(ug)为横坐标,以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。


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  • 二)样品的测定1.样品的提取:将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中,加入2-5ml 1%盐酸,匀浆,转移到25ml容量瓶中,稀释至刻度。若提取液澄

  • 清透明,则可直接取样测定,若有浑浊现象,可通过离心(1 0000g, 10min)来消除。

  • 2.样品的测定:取0.1-0.2ml提取液,放入盛有0.2-0.4ml 10%盐酸的10ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白,在243nm处测定其消光值。

  • 3.待测碱处理液的制备:分别吸取0.1-0.2ml提取液,2ml蒸馏水和0.6-0.8ml 1mol/L氢氧化钠溶液依次放入10ml容量瓶中,混匀,15min后加入0.6-0.8ml 10%盐酸,混匀,并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其消光值。


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  •  4.由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线,即可计算出样品中维生素C的含量。

  • 5.也可直接以待测碱处理液为空白,测出待测液的消光值,通过查标准曲线,计算出样品的维生素C的含量。

  • 四、计算

  • μ×V总

  • Vc的含量(μg/g)= ——————

  •                           V1×W总

  •     式中:μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量(μg)

  • V1——测消光值时吸取样品溶液的体积(ml)

  • V总——样品定容体积(ml)

  • W总——称样重量(g)


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关于维生素C的常识

  • 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一,缺少它时会产生坏血病,因此又称为抗坏血酸(ascorbic acid)。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来,发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力,并具有化学致癌物的阻断作用。

  • 维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物,属于水溶性维生素。它分布很广,植物的绿色部分及许多水果(如橘子、苹果、草莓、山楂等)、蔬菜(黄瓜、洋白菜、西红柿等)中的含量更为丰富。


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C

!!!

要不就这样了

!!!

谢谢欣赏

主要参考资料

维生素及其分析方法 聂洪勇等著 上海:上海科学技术文献出版社

维生素手册 英)J.玛克斯著;郑昌学等译 北京:科学普及出版社

癌与维生素C (美)鲍林, (美)卡梅伦著;王艳茹, 王文仲译

北京:科学普及出版社http://www.511511.com/M5/200404/M500000162020040413053909187.shtml


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