МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 23

Научный руководитель: д.х.н., проф. А.В. Пирогов PowerPoint PPT Presentation


  • 138 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В. Ломоносова Х имический факультет Кафедра аналитической химии. И. Д. Каргин.

Download Presentation

Научный руководитель: д.х.н., проф. А.В. Пирогов

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


4996252

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТимени М.В. Ломоносова

Химический факультет

Кафедра аналитической химии

И. Д. Каргин

Определение антибиотиков тетрациклинового ряда в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с послеколоночной реакцией и флуоресцентным детектированием

Научный руководитель:

д.х.н., проф. А.В. Пирогов

Москва, 2014


4996252

Тетрациклины

Тетрациклин (TC) (444.43 г/моль)

Окситетрациклин (OTC) (460.43 г/моль)

Доксициклин (DC) (444.43г/моль)

ПДК = 10 нг / г

2


4996252

Применение тетрациклина

  • Фармaкологические препараты

  • Ветеринария

  • Животноводство

ПДК = 10 нг / г


4996252

Создание способа чувствительного определения антибиотиков тетрациклинового рядас использованием микроэмульсий методом ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием

Изучение влияния состава микроэмульсий на флуориметрические свойства исследуемых соединений

Цели работы


4996252

Структура микроэмульсии

Вода

Вода

Типы микроэмульсий:

А – «масло в воде»

В – «вода в масле»

С – биконтинуальная микроэмульсия

н-октан


4996252

Свойства микроэмульсий


4996252

УФ-детектирование

Хроматограмма модельной смеси тетрациклинов (с = 10 мкг/мл каждого ТС). Колонка Zorbax Eclipse XDB-C18 150 × 4.6 мм (5 мкм). Градиентный режим, элюент – (А) 0.01 M р-р щавелевой кислоты, pH3; (В) MeCN. Градиент: (0-4 мин) 20% (В), (4-10 мин) линейное увеличение до 40% (В). F= 1 мл/мин, Т = 30°C. Спектрофотометрическое детектирование при λ = 359 нм.


4996252

mAU

7

OTC + TC

5

3

DC

1

9

3

6

t

,

мин

-1

R

Режим МЭЖХ

(Б)

(А)

Хроматограмма модельной смеси тетрациклинов (с = 1 мкг/мл каждого). Элюент – (А) - МЭ (3.3% ДДСН, 0.8% н-гептана, 8% н-бутанола), (Б) - МЭ (2% ДДСН, 0.6% н-гептана, 6% н-бутанола). pH 3, F = 1 мл/мин, Т = 30°C. Спектрофотометрическое детектирование при λ = 359 нм.


4996252

Комплексообразование с катионами металлов

Предполагаемые структуры комплексов тетрациклина с катионами магния и кальция

g

g

У комплекса тетрациклина с катионом магния наблюдается сильное увеличение

интенсивности флуоресценции ( ̴ 20 раз)

2

Спектры флуоресценции (λEx/λEm= 385 / 512 нм):

1 – 10 мкг/г ТС в МЭ

2 – 10 мкг/г ТС в МЭ + Mg2+(избыток)

1


4996252

Выбор pH и концентрации ионов Mg2+

с(ТС) = 10 мкг/мл, λEx/λEm= 385 / 512 нм


4996252

Изучение влияния природы ПАВ на флуоресценцию комплексов ТС с Mg2+

с(ТС) = 10 мкг/мл,

λEx/λEm= 385 / 512 нм

ДДСН

ДКЗ

ЦТАХ


4996252

Схема проведения послеколоночной реакции

Ввод пробы

ТС

Металлический капилляр

L = 2 м

D = 0,25мм

V = 980 мкл

Т = 50°С

Насос 1

Колонка

Элюат

Реакционная петля

20% MeCN

80% 0.01 M р-ра

щавелевой к-ты

рН 3

Насос 2

рН 7.8

ТС-Mg

0.06 М р-р MgCl2в

МЭ состава:

4% ДДСН

1.2% н-гептана

12% н-бутанола

рН 9

ФЛ детектор


4996252

Кинетика реакции комплексообразования

  • Реакция тетрациклина с ионами магния в среде микроэмульсии

  • Условия: МЭ (2% ДДСН, 0.6% гептана, 6% н-бутанол), содержащая 0.06 М Mg2+, pH 9,

  • с(ТС) = 10 мкг/мл

Зависимость интенсивности флуоресценции комплекса ТС с Mg2+ от времени, λEx/ λEm= 385 / 512 нм.


4996252

Варьирование температуры и скорости подачи элюента

Скорость подачи элюента и

микроэмульсии с магнием

одинакова

С ростом температуры

понижается вязкость МЭ


4996252

ОФ-ВЭЖХ с послеколоночной реакцией

Хроматограмма модельной смеси тетрациклинов с концентрациями 0.05 мг/мл. Элюент: А – 0.01 M р-р щавелевой кислоты, pH = 3; В – MeCN. Градиентный режим: 0 мин – 20% А, (0 – 9) мин – 35% А, (9 – 14) мин – 35% А, (14 – 18) мин – 20% А. F = 0.4 мл/мин, Т = 50°C. Послеколоночная реакция – 60 мМ раствор MgCl2 в МЭ (4% ДДСН, 1.2% н-гептана, 12% н-бутанола). F = 0.4 мл/мин, V = 100 мкл, λEx/ λEm= 385 / 512 нм.


4996252

Пробоподготовка фармацевтических препаратов

Навеска 0.030 г

Объем МЭ – 10 мл

Время экстракции – 5 минут

Температура – 60 оС

2 минуты, 16 тыс. об./мин

Разбавление в 100 раз смесью

80% 0.01 M р-ра щавелевой кислоты

20% MeCN


4996252

Анализ тетрациклиновой мази

ТС

Хроматограмма тетрациклиновой мази 3%.


4996252

Степени извлечения тетрациклина из мазей


4996252

Пробоподготовка молока

0.1 М р-р ЭДТА в

буферном растворе МакИлвейна, рН 4

Время обработки – 5 минут

5 минут, 16 тыс. об./мин

3 мл MeCN, 3 мл H2O, 3 мл буф. р-ра

12 мл надосадочной жидкости

3 мл H2O, 3 мл буф. р-ра

1 мл MeCN

2 минут, 16 тыс. об./мин

Разбавление 0,01 M р-ром

щавелевой кислоты


4996252

Хроматограмма реального объекта (молоко)

Участок хроматограммы образца молока «Лианозовское».


4996252

Хроматограмма реального объекта (молоко)

Хроматограммы холостого образца молока (A) и молока с добавкой тетрациклинов (Б). Концентрации добавок составляли 20, 20 и 40 мкг/л для OTC, TC и DC соответственно.


4996252

Выводы

  • Впервые показано, что интенсивность флуоресценции комплексов тетрациклинов с ионами Mg2+ в микроэмульсионной среде в 1.8 раза выше по сравнению с водно-органической средой.

  • Изучено влияние природы ПАВ в составе микроэмульсии на интенсивность флуоресценции комплексов тетрациклинов. Показано, что максимальная интенсивность флуоресценции наблюдается в МЭ на основе анионного ПАВ — ДДСН.

  • Впервые предложена схема проведения послеколоночной реакции комплексообразования тетрациклинов с ионами Mg2+ в среде микроэмульсий.

  • Выбраны условия чувствительного и селективного хроматографического определения тетрациклинов в виде комплексов с флуоресцентным детектированием в фармацевтических препаратах (мази и таблетки) и пищевых объектах (молоко). Пределы обнаружения составили 5, 8 и 25 нг/мл для TC, OTC и DC соответственно.

  • Выбраны условия извлечения тетрациклинов из молока, степени извлечения составили 87, 82 и 68% для TC, OTC и DC соответственно. Также в ходе дополнительной очистки образцов с помощью ТФЭ картриджа Strata XDB-L достигнута степень концентрирования тетрациклинов, равная 2.5.

  • В работе показана перспективность использования МЭ для количественного извлечения тетрациклина из лекарственных форм на основе мазей. Степени извлечения составили 99-100%. Время пробоподготовки занимает 15 минут.


4996252

Спасибо за внимание!


  • Login