Vettori e clonaggio
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Vettori e clonaggio. Clonaggio di un frammento di DNA = = produzione di molte copie identiche del frammento di DNA. Vettori e clonaggio. Il frammento di DNA viene inserito in una molecola-vettore che può replicarsi quando è inserita in una cellula ospite, di solito un batterio.

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Presentation Transcript


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Clonaggio di un

frammento di DNA=

=produzione di molte copie

identiche del frammento di DNA


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Il frammento di DNA viene

inserito in una molecola-vettore

che può replicarsi quando è

inserita in una cellula ospite,

di solito un batterio


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

-Enzimi di restrizione

-DNA ligasi

-Vettori


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Sistema di restrizione/metilazione

del DNA


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Frammenti di restrizione del DNA

genomico di adenovirus 2


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Reazione

ligasica di

frammenti di

restrizione


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Vettori

Plasmidi

Fagi

Cosmidi

YACBAC


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Plasmide

Molecola circolare di DNA a doppio

filamento, normalmente presente

nella cellula batterica, in grado

di replicarsi autonomamente

dal cromosoma.


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Replicazione di un plasmide


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Clonaggio di

un frammento

di DNA in un

plasmide


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Formazione

di un plasmide

ricombinante


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Il marker di selezione permette

permette di selezionare le

cellule batteriche contenenti

il plasmide


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Clonaggio in un

plasmide e

selezione su un

terreno contenente

un antibiotico


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

La possibilità di selezionare

i batteri trasformati è molto

importante perché la trasformazione

batterica è un processo

poco efficiente


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Clonaggio

di diversi

frammenti di

DNA in un

plasmide


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Regione di clonaggio (=polylinker):

regione che contiene una copia di

diversi siti di restrizione


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Lunghezza massima del

DNA clonabile in un plasmide:

circa 20 Kb


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

I virus sono piccoli parassiti

non in grado di replicarsi.

Dopo aver infettato una

cellula-ospite utilizzano i suoi

sistemi di replicazione e sintesi

delle proteine per riprodursi


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

I batteriofagi (o fagi) sono virus

che infettano i batteri.


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Ciclo litico del fago T4


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Il fago più utilizzato in biologia

molecolare è il fago 


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Ciclo

litico e

lisogenico

del fago 


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Assemblaggio

di un fago 


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Mappa del genoma del fago 


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Clonaggio di

frammenti di

DNA nel

fago 


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Formazione di cloni fagici


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

L’infezione dei batteri con il fago 

è circa 103 volte più efficiente

della trasformazione

con un plasmide


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Lunghezza del DNA

clonabile in un fago:

20-25 Kb


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Un cosmide è un plasmide

contenente la sequenza COS

dal fago 


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Clonaggio di

frammenti di

DNA in un

cosmide


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Lunghezza del DNA

clonabile in un cosmide:

circa 45 Kb


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

YAC=yeast artificial chromosome


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Dimostrazione

sperimentale

degli elementi

funzionali di

un cromosoma


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Vettore YAC:

sequenze ARS

CEN

TEL


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Lunghezza del DNA

clonabile in uno YAC:

fino a 1000 Kb


Vettori e clonaggio

Vector Type

Cloned DNA (kb)

Vettori e clonaggio

Approximate Maximum Length of DNA That Can Be Cloned in Vectors

20

Plasmid

25

λ phage

45

Cosmid

100

P1 phage

300

BAC (bacterial artificial chromosome)

1000

YAC (yeast artificial chromosome)


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio

Vettore di espressione


Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio


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