免疫学实验三
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免疫学实验三. E - 花环形成实验 免疫妊娠实验. E- 花环形成实验. 【 原理 】 人 T 淋巴细胞表面有 CD2 (又称 LFA-2 或绵羊红细胞受体或 E 受体)分子,将淋巴细胞在体外与绵羊红细胞( SRBC )共同孵育, T 细胞可通过 CD2 与 SRBC 结合而形成光镜可见的玫瑰花环样细胞团,称为 E- 花环形成实验。计数花环细胞百分数即为 T 细胞百分数。. (Erythrocyte rosette forming cell test). E- 花环示意图. SRBC. CD2 ( E 受体). T 细胞. CD2 分子的作用. T 淋巴细胞的标志

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Presentation Transcript


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免疫学实验三


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  • E-花环形成实验

  • 免疫妊娠实验


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E-花环形成实验

【原理】

人T淋巴细胞表面有CD2(又称LFA-2或绵羊红细胞受体或E受体)分子,将淋巴细胞在体外与绵羊红细胞(SRBC)共同孵育,T细胞可通过CD2与SRBC结合而形成光镜可见的玫瑰花环样细胞团,称为E-花环形成实验。计数花环细胞百分数即为T细胞百分数。

(Erythrocyte rosette forming cell test)


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E-花环示意图

SRBC

CD2(E受体)

T细胞


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CD2分子的作用

  • T淋巴细胞的标志

  • 结合绵羊红细胞

  • 其配体为LFA-3(CD58) , 两者结合可介导T细胞与抗原提呈细胞的黏附作用,协同刺激T细胞的活化

  • 介导胸腺细胞的发育成熟


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T细胞包括E-受体亲和力高的和E-受体亲和

力低的两个亚群:

高亲和力 活性E-花环

高亲和力+低亲和力 总数E-花环

室温、几分钟

4℃、2h


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【意义】

  • 总数E-花环实验可以计数T细胞总数,根据其数量多少间接反映机体细胞免疫功能状态。

  • 目前认为,形成活性E-花环的T细胞是细胞免疫中最先出现效应功能的,检测其百分率能确切地反映出机体细胞免疫功能状态。

  • 由于T细胞表面有E-受体,而B细胞无此受体,故可用于T、B细胞的分离。


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活性E-花环形成实验方法

  • 取离心管加蒸馏水0.4ml。

  • 采血0.02ml,加入其中,作用30秒(破坏红细胞)。

  • 用微量加样器加入4.5%NaCl 0.1ml恢复等渗(取血前就准备好,以免来不及)。

  • 加Hank’s液3ml,2000r/min离心5分钟,后弃上清。(注意:离心机的使用;离心管做好标记)

  • 加小牛血清1滴,摇匀,加0.2%SRBC 1滴,轻轻摇匀,1000r/min离心10分钟。(轻拿)

  • 加戊二醛 1滴,固定10分钟。

  • 吸去大部分上清,留少许液体,再用乳头吸管吹吸均匀。

  • 用乳头吸管头部涂片,直径约1.5cm,自然干燥。

  • 用G-W染液染色2分钟,再以3~4倍的蒸馏水加入染液中复染5分钟。 用水冲洗、吸干、镜检。


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【结果观察】

凡吸附3个或3个以上SRBC的淋巴细胞为一个花环形成细胞。

E-花环形成细胞数

E-花环形成细胞百分率=

镜下计数200个淋巴细胞

正常参考值:活性E-花环形成细胞百分率23.6±3.5%

总数E-花环形成细胞百分率64.4±6.7%

×100%

淋巴细胞总数


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注意事项

  • 低渗时间要控制好

  • 毛细吸管要打到液面下

  • 取血要领: 1 快,准,狠,一次吸完

    2 酒精挥发后再扎

    3 取血不要持续太长时间

  • 观察结果先用10倍和40倍镜,找到花环形成细胞后换油镜


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显微镜油镜的使用方法

  • 先在高倍物镜(40倍)下找准被检物,并置于视野中央,然后降下载物台,再把油镜头旋转至对准正下方。

  • 在玻片标本的镜检部位滴一滴香柏油,将头偏于一侧观察,上调载物台,使oil镜(100倍)的前透镜与香柏油接触,再上调载物台至镜头最接近载玻片,但绝不能压在标本上。

  • 继而从目镜里观察视野,旋转粗螺旋,使载物台缓慢地下降,刚出现不太清晰的物象时就换用细螺旋,至物象清晰后进行观察。


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  • 若调节粗螺旋时,镜头离开油滴,仍不能发现被检目的物,须重新调节。

  • 油镜使用完毕,下降载物台,把油镜转离光轴,先用擦镜纸擦去镜头上的大部分油,再用浸少量二甲苯的擦镜纸擦去镜头上的残余油迹,最后用干擦镜纸擦去镜头上的二甲苯。

  • 擦拭时要顺镜头的直径方向,不要沿镜头的圆周方向擦。

  • 玻片标本上的油也要进行清洁,即把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上,在纸上滴一些二甲苯,趁湿把纸往外拉,这样连续作三四次即可干净


Hcg hcg hcg hcg

【原理】临床常用的免疫妊娠试验是先把待测孕妇尿(含有人绒毛膜促性腺激素,HCG)与已知抗HCG抗体结合,充分作用后,加入偶联了HCG的胶乳颗粒。如果不凝集,则说明孕妇尿中有HCG,妊娠试验阳性,反之则为阴性。

免疫妊娠实验


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间接凝集抑制反应


1 1 2 hcg 2 hcg hcg 3

1.待检尿液1、2号、孕妇HCG阳性尿液。2.吸附HCG的聚苯乙烯胶乳、抗人HCG抗体血清。3.载玻片、滴管、特种铅笔等。

【材料】


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1.取玻片一张置试验台上,用特种铅笔将其划分为两格,并注明1、2。2.用滴管取待检孕妇尿①一滴加至第1格中,另吸取待检孕妇尿②一滴加至第2格。3.于第1、2两格中各滴加一滴抗人HCG抗体血清,轻轻摇动1min,充分混匀。4.于第1、2两格中各滴加一滴HCG致敏的胶乳抗原,缓缓摇动3—5min后观察结果。

【方法】


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1. 所用诊断试剂必须在有效期内使用,用前应充分摇匀。2. 加样不宜过多,玻片应平置,以防两格反应液相混。

【注意事项】


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以是否出现凝集现象记录结果待检尿无凝集现象而呈乳状液体者为妊娠试 验阳性;待检尿出现凝集现象者为妊娠试验阴性。

【结果】


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