1 / 36

ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΒΜ89 ΚΑΙ ΒΜ88

ΕΘΝΙΚΟ ΚΑΠΟΔΙΣΤΡΙΑΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝ ΣΧΟΛΗ ΘΕΤΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΤΜΗΜΑ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ ΤΟΜΕΑΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ ΚΥΤΤΑΡΟΥ ΚΑΙ ΒΙΟΦΥΣΙΚΗΣ ΕΛΛΗΝΙΚΟ ΙΝΣΤΙΤΟΥΤΟ ΠΑΣΤΕΡ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗΣ ΚΑΙ ΜΟΡΙΑΚΗΣ ΝΕΥΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑΣ. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΒΜ89 ΚΑΙ ΒΜ88. Γαϊτάνου Μαρία.

lawson
Download Presentation

ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΒΜ89 ΚΑΙ ΒΜ88

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. ΕΘΝΙΚΟ ΚΑΠΟΔΙΣΤΡΙΑΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝ ΣΧΟΛΗ ΘΕΤΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΤΜΗΜΑ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ ΤΟΜΕΑΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ ΚΥΤΤΑΡΟΥ ΚΑΙ ΒΙΟΦΥΣΙΚΗΣ ΕΛΛΗΝΙΚΟ ΙΝΣΤΙΤΟΥΤΟ ΠΑΣΤΕΡ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗΣ ΚΑΙ ΜΟΡΙΑΚΗΣ ΝΕΥΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑΣ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΒΜ89 ΚΑΙ ΒΜ88 Γαϊτάνου Μαρία Επιβλέποντες: Τμήμα Βιολογίας Καθηγητής Λουκάς Χ. Μαργαρίτης Αναπληρώτρια ΚαθηγήτριαΕιρήνη Λεκανίδου Ελληνικό Ινστιτούτο Παστέρ Ερευνήτρια Α’ Ρεβέκκα Μάτσα Ερευνήτρια Α’ Αυγή Μαμαλάκη

  2. Νευρώνες • Κύτταρα γλοίας Αστροκύτταρα KNΣ Ολιγοδενδροκύτταρα ΠNΣ Κύτταρα Schwann Νευρώνες Αστροκύτταρα Ολιγοδενδροκύτταρα Sauvageot and Stiles 2002 Κύτταρα του νευρικού συστήματος Νευρογένεση και γλοιογένεση στον εγκέφαλο αρουραίου

  3. ΜΟΡΙΑ ΠΟΥ ΕΜΠΛΕΚΟΝΤΑΙ ΣΤΗ ΝΕΥΡΙΚΗ ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΙΗΣΗ ΜΟΡΙΑ ΕΠΙΦΑΝΕΙΑΣ EΝΔΟΚΥΤΤΑΡΙΚΑ ΜΟΡΙΑ ΜΕΤΑΓΡΑΦΙΚΟΙ ΠΑΡΑΓΟΝΤΕΣ ΜΟΡΙΑ ΣΥΝΑΦΕΙΑΣ π.χ NCAMs της υπεροικογένειας των ανοσοσφαιρινών καντερίνες, ιντεγκρίνες GAP 43 Συναπτοταγμίνη MAP-2 ΟΓΚΟΚΑΤΑΣΤΑΛΤΙΚΑ ΓΟΝΙΔΙΑ π.χ DCC Bcl 2 BM88

  4. Οι πρωτεΐνεςΒΜ88 και ΒΜ89προσδιορίστηκαν, με τη βοήθεια μονοκλωνικών αντισωμάτων σε μεμβρανικά παρασκευάσματα εγκεφάλου χοίρου. • Είναι νευροειδικά μόρια, που εμφανίζουν ευρεία κατανομή στο κεντρικό και περιφερικό νευρικό σύστημα των θηλαστικών.

  5. ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ88 • Νευροειδική διαμεμβρανική μη γλυκοζυλιωμένη πρωτεΐνη. • Αποτελείται από δύο ίδιες πολυπεπτιδικές αλυσίδες Μ.Β 22-23 kD, που συνδέονται μεταξύ τους με S-S δεσμούς. • Η έκφραση της BM88 ξεκινά κατά την έναρξη της νευρογένεσης και αυξάνεται με την ηλικία. • Εκφράζεται από πολλαπλασιαζόμενους νευροβλάστες και, ισχυρότερα, από μετα-μιτωτικούς νευρώνες. • Εντοπίζεται στημεμβράνη ενδοκυτταρικών οργανιδίων (ενδοπλασματικό δίκτυο, εξωτερική μεμβράνη μιτοχονδρίων).

  6. πολλαπλασιασμός BM88 διαφοροποίηση ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΚΕΣ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ88 Η πρωτεΐνη ΒΜ88 προάγει τη διαφοροποίηση και επιβραδύνει τον πολλαπλασιασμό των νευρικών κυττάρων. • in vitro: • Σταθερά μετασχηματισμένα με το ΒΜ88 κύτταρα του νευροβλαστώματος του ποντικού (Neuro2A), παρουσιάζουν μειωμένο ρυθμό πολλαπλασιασμού και διαφοροποίηση προς φαινότυπο νευρώνων, τόσο σε μορφολογικό όσο και σε βιοχημικό επίπεδο. • (Mamalaki A. et al., J. Biol. Chem., 1995)

  7. Η υπερέκφραση της πρωτεΐνηςΒΜ88στα Neuro2 κύτταρα επάγει τη νευρική διαφοροποίησή τους in vitro καθώς και την έκφραση της νευροειδικής πρωτεΐνηςΒΜ89. Νeuro2A Νeurο2A-BM88 BM88 BM89 BM88 / BM89 7 4 ημέρες N2A N2A-BM88 7 ημέρες 25 μm ΒΜ88 7 ημέρες

  8. ΣΤΟΧΟΙ ΤΗΣ ΠΑΡΟΥΣΑΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ 1. Διαλεύκανση της πρωτεΐνικής ταυτότητας της πρωτεΐνης ΒΜ89 προκειμένου να διερευνηθεί το σηματοδοτικό μονοπάτι νευρικής διαφοροποίησης που ενεργοποιείται από την πρωτεΐνη ΒΜ88 in vitro στα Neuro2A κύτταρα. 2. Μελέτη της δράσης της πρωτεΐνης ΒΜ88 του χοίρου στους μηχανισμούς της νευρικής διαφοροποίησης in vivo, με τη δημιουργία διαγονιδιακών ποντικιών. 3. Tαυτοποίηση και μελέτη των ομόλογων ΒΜ88 πρωτεϊνών του ποντικού και του ανθρώπου, απομόνωση και μελέτη των αντίστοιχων cDNA τους καθώς και απομόνωση και χαρτογράφηση του ανθρώπινου γονιδίου ΒΜ88.

  9. ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ89 • Νευροειδικό μόριο με ευρεία κατανομή στο Κ.Ν.Σ και το Π.Ν.Σ των θηλαστικών. • Βιοχημεία: Διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που αποτελείται από μία πολυπεπτιδική αλυσίδα ΜΒ 41- 43 kD, ανάλογα με το εξεταζόμενο είδος. • Αναπτυξιακές μελέτεςέδειξαν ότι η έκφραση της πρωτεΐνης ΒΜ89 συμπίπτει με την περίοδο της διαφοροποίησης των νευρώνων και της ανάπτυξης των αξόνων τους. • Η έκφρασητης πρωτεΐνης ΒΜ89 στην κυτταρική σειρά N2A σχετίζεται με τις λειτουργικές ιδιότητες της πρωτεΐνης ΒΜ88.

  10. ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ89 ΑΠΟ ΤΟΝ ΕΓΚΕΦΑΛΟ ΤΟΥ ΧΟΙΡΟΥ

  11. ΒΙΟΧΗΜΙΚΟΣ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ89 ΤΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΥ ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΠΟΛΥΚΛΩΝΙΚΟΥ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΟΣ kD ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ89 ΤΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΥ BM89 1 2 1 2 ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΑΜΙΝΟΞΙΚΗΣ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑΣ ΔΥΟ ΕΣΩΤΕΡΙΚΩΝΟΛΙΓΟΠΕΠΤΙΔΙΩΝ

  12. Η ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΤΟΥ cDNA ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ89 ΤΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΥ ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΤΑΥΤΙΖΕΤΑΙ ΜΕ ΤΗΝ ΠΡΩΤΕΪΝΗ ΤΩΝ ΣΥΝΑΠΤΙΚΩΝ ΚΥΣΤΙΔΙΩΝ ΣΥΝΑΠΤΟΦΥΣΙΝΗ.

  13. Νουκλεοτιδική και αμινοξική αλληλουχία της συναπτοφυσίνης του ποντικού. -17 ATTCGGCACGAGCAGAC -1 ATG GACGTGGTGAATCAGCTGGTGGCTGGGGGTCAGTTCCGGGTGGTCAAGGAGCCCCTTGGCTTCGTGAAGGTGCTGCAGTGGGTCTTT 90 M D V V N Q L V A G G Q F R V V K E P L G F V K V L Q W V F GCCATCTTCGCCTTTGCTACGTGCGGCAGCTACACCGGAGAGCTTCGGCTGAGCGTGGAGTGTGCCAACAAGACGGAGAGTGCCCTCAAC 180 A I F A F A T C G S Y T G E L R L S V E C A N K T E S A L N ATCGAAGTCGAATTTGAGTACCCATTCAGGCTGCACCAAGTGTACTTTGATGCACCCTCCTGCGTTAAAGGGGGCACTACCAAGATCTTC 270 I E V E F E Y P F R L H Q V Y F D A P S C V K G G T T K I F CTAGTTGGTGACTACTCCTCCTCGGCTGAATTCTTTGTCACCGTGGCTGTGTTTGCCTTCCTCTACTCCATGGGGGCCCTGGCCACCTAC 360 L V G D Y S S S A E F F V T V A V F A F L Y S M G A L A T Y ATCTTCCTGCAGAACAAGTACCGAGAGAACAACAAAGGGCCAATGATGGACTTCCTGGCCACAGCAGTGTTCGCTTTCATGTGGCTAGTT 450 I F L Q N K Y R E N N K G P M M D F L A T A V F A F M W L V AGCTCATCCGCCTGGGCCAAAGGCCTGTCCGATGTGAAGATGGCCACTGACCCAGAGAACATTATCAAGGAGATGCCTATGTGCCGCCAG 540 S S S A W A K G L S D V K M A T D P E N I I K E M P M C R Q ACAGGAAACACATGCAAGGAACTGAGGGACCCTGTGACTTCAGGACTCAACACCTCGGTGGTGTTTGGCTTCCTGAACCTGGTGCTCTGG 630 T G N T C K E L R D P V T S G L N T S V V F G F L N L V L W GTTGGCAACCTATGGTTCGTGTTCAAGGAGACAGGCTGGGCCGCCCCATTCATGCGCGCACCTCCAGGCGCCCCAGAAAAGCAACCAGCT 720 V G N L W F V F K E T G W A A P F M R A P P G A P E K Q P A CCTGGCGATGCCTACGGCGATGCGGGCTATGGGCAGGGCCCCGGAGGCTATGGGCCCCAGGACTCCTACGGGCCTCAGGGTGGTTATCAA 810 P G D A Y G D A G Y G Q G P G G Y G P Q D S Y G P Q G G Y Q CCCGATTACGGGCAGCCAGCCAGCGGCGGTGGCGGTGGCTACGGGCCTCAGGGCGACTATGGGCAGCAAGGCTACGGCCAACAGGGTGCG 900 P D Y G Q P A S G G G G G Y G P Q G D Y G Q Q G Y G Q Q G A CCCACCTCCTTCTCCAATCAGATG TAA TCTGGTCAGTGAAGCCCACGAAGACCCCACGGGTGGGCAAGAGCTCAAGAGAAGGCCTGCCCC 990 P T S F S N Q M * CCTTCCCATCCCCATATCCTAGGTCTCCACCCCTCAACCCAGGAGACCCTGTCTTTGCTGTTTATATATATATATATTATATATAAATAT 1080 CTATTTATCTGTCTGAGCCCTACCTTCACCCACTCCTCCATGCACTAGGGGCCCAGTCCTGAATGGGCTCCTCCCTACCCCTGACCTTGC 1170 ACTCCTCAGCCCCTATCGGTTCCCCAGCCCTGTCCCGTGATGTAAGGGGGCTCTAGAAAGGGGACAGGAAGGGGGCCAGACCTTGGCTGC 1260 ATGGAGTGGGCGATGTGACTTTTTCCCCCTTCCTTCTCTCCCTCTGCCCCTCCTAACTCTAGCCTTGGTTCCTCCAGCATCGCCTGAACT 1350 TAAGAAGCTCTCAAATGGAAATTCAACCCCAAGAGTAGAGGGGTGGAGGTGGCTTGGATGAAATGGGTGGAGAGGAGATGGCCTCTGTAG 1440 AGAGAGGACCAGTCAGCCAAAAGTTGAATTCCACACATACTGGATGTGGAGCCTAAAAGGGAAGTGGTGTCCTACACCATTCTGGAATGG 1530 GGCTAAAAGGGACTGGGGAGAGGGGTACTAGGAGGGGTGTGGCTTAAACACATGGTGGGTTCCGGAGTGGGCAGGTTTGGGTTGGATCCA 1620 GCATCTCTAGAAGGGGTGTGTCTTGGAACATTCAGGAGTTTGAGCTTGATTCCAAAGAGCTTGAGCAAGGCTAGAAGTGGGATTCGGGAA 1710 TGATCTAAGCTTGAGAGAAGGTTCTGGTCAGGATTGCAGACAGGCAGGTGAAGAGGACGAGGGATGTGTGGTGCTCTCAGAAGAGGAAGC 1800 CCATTCTGTAATGGGGCAGAAAAGAAAATACGGTTTCAGTTGAGTGGAGTTTGAGCAGTGGGTGTAGGAGGCCATGGTTGGGAGCTGTGA 1890 GGTGAGTTTTGCTAAAAGTAGGAAGGAGTACTCCTGATTCCACCCCACGCCCCAGAACGGACATAACCTGGGAAGAGCCAAGTATTGTGG 1980 TTTGGAGGGTGAGCGAAATGTCCCTTACTGACTCCCTCAGAAGAGGGCTAGATAATCAGAAGACAGAATCTACAGGTCTGTGGGGCTGGC 2070 CTACCTTCTCCACCCTTTCTCTGCCCTCTCCCTCCACACTCCCGTCTGTCCCGGAGCACTGGGAGGCTGGCTCTGGAGCCCCAATCCTGG 2160 ACCCTCTGCTGTGTCTGTGACGTTGGTAGTGCCTGTGATCGTGTGTTGCCATTTTGTCTGACTGTGGCCCCTCCCTTTTCCCTCCAGACC 2250 CCCTACTTTCCTGTGCCTTCGGTATTGTTTGAAGACCCCCCTCCCCAAGGAAGAGCAAATATGAGAACCCCCCCC AATAAA CTCCTCAAC 2340 TATCAAAAAAAAAAAAAAAAAA

  14. Σύγκριση της αμινοξικής αλληλουχίας του μορίου της συναπτοφυσίνης ανάμεσα στα είδη Ανθρωπος Βόδι Αρουραίος Ποντικός ΨάριTorpedo Ανθρωπος Βόδι Αρουραίος Ποντικός ΨάριTorpedo Ανθρωπος Βόδι Αρουραίος Ποντικός ΨάριTorpedo Ανθρωπος Βόδι Αρουραίος Ποντικός ΨάριTorpedo Ποσοστά ομολογίας: 92.5% ποντικός-βόδι 94.8% ποντικός-άνθρωπος 100% ποντικός-αρουραίος Ανθρωπος Βόδι Αρουραίος Ποντικός ΨάριTorpedo Ανθρωπος Βόδι Αρουραίος Ποντικός ΨάριTorpedo

  15. ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ89/ ΣΥΝΑΠΤΟΦΥΣΙΝΗΣ ΤΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΥ ΑΝΑΛΥΣΗ ΚΑΤΑ SOUTHERN TOY ΓΟΝΙΔΙΟΥ ΤΗΣ ΣΥΝΑΠΤΟΦΥΣΙΝΗΣ ΑΝΑΜΕΣΑ ΣΤΑ ΕΙΔΗ poly 89 SVP-38

  16. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ ›Η κλωνοποίηση του cDNA της πρωτεΐνης ΒΜ89 του ποντικού έδειξε ότι το μόριο αυτό ταυτίζεται με τη συναπτοφυσίνη. Το cDNA της συναπτοφυσίνης του ποντικού κλωνοποιήθηκε για πρώτη φορά στα πλαίσια αυτής της εργασίας. ›Tο μόριο της συναπτοφυσίνης είναι πολύ καλά συντηρημένο κατά τη διάρκεια της εξέλιξης, γεγονός που υποδηλώνει τη μεγάλη σημασία του βιολογικού του ρόλου. ›Το ειδικό πολυκλωνικό αντίσωμα που παρασκευάστηκε μπορεί να χρησιμοποιηθεί σαν διαγνωστικό εργαλείο σε διαφόρων ειδών ανθρώπινες νεοπλασίες. Συγκεκριμένα έχει ήδη χρησιμοποιηθεί στη μελέτη ανθρώπινων αστροκυτωμάτων (Katsetos et al., Arch. Pathol. Lab. Med., 2001). ›Το γεγονός ότι η έκφραση της πρωτεΐνης ΒΜ88 στα Neuro2Α κύτταρα επάγει άμεσα ή έμμεσα την έκφραση της συναπτοφυσίνης, μορίου- δείκτη της τελικής διαφοροποίησης των νευρώνων ενισχύει το νευρογενετικό ρόλο της πρωτεΐνης ΒΜ88.

  17. ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ88 ΤΟΥ ΧΟΙΡΟΥ ΣΤΗ ΝΕΥΡΙΚΗ ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΙΗΣΗ ΣΕ IN VIVO ΜΟΝΤΕΛΟ ΔΙΑΓΟΝΙΔΙΑΚΩΝ ΠΟΝΤΙΚΙΩΝ. (Hoxa7) (Knittel et al., 1995)

  18. ποντικός Χοίρος ΜΎ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΒΜ88 ΔΙΑΓΟΝΙΔΙΟΥ ΤΟΥ ΧΟΙΡΟΥ ΜΕ RT- PCR ΑΝΑΛΥΣΗ ΣΕ ΔΙΑΓΟΝΙΔΙΑΚΑ ΕΤΕΡΟΖΥΓΑ ΕΜΒΡΥΑ ΠΟΝΤΙΚΟΥ ΗΛΙΚΙΑΣ Ε12.5 Προϊόν RT-PCR (660 bp ) B. A. AΝΙΧΝΕΥΣΗ ΤΩΝ ΟΜΟΖΥΓΩΝ ΖΩΩΝ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΟ ΒΜ88 -ΔΙΑΓΟΝΙΔΙΟ ΜΕ SLOT-BLOT ΑΝΑΛΥΣΗ

  19. TΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΤΩΝ ΟΜΟΛΟΓΩΝ ΒΜ88 ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΤΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΥ ΚΑΙ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΟΥ. A) B) Γ) P0 ποντικού χοίρου Εγκέφαλος ανθρώπου Εγκέφαλος ποντικού Εγκέφαλος χοίρου Εγκέφαλος ανθρώπου Εγκέφαλος αρουραίου Εγκέφαλος ανθρώπου Εγκέφαλος ποντικού Εγκέφαλος ποντικού Εγκέφαλος χοίρου Εγκέφαλος Εγκέφαλος -DTT kD 94 67 43 30 BM88 20 14 Πολυκλωνικό αντίσωμα Μονοκλωνικό αντίσωμα Πολυκλωνικό αντίσωμα 1. 2. 3.

  20. ΑΝΟΣΟΪΣΤΟΧΗΜΙΚΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ88ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗ ΠΑΡΕΓΚΕΦΑΛΙΔΑ 300 μm ΒΜ88 75 μm NF 75 μm

  21. ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ cDNA ΤΟΥ ΒΜ88 ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΟΥ ΚΑΙ ΤΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΥ

  22. ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΗΣ ΑΜΙΝΟΞΙΚΗΣ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΗΣ ΒΜ88 ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΒΜ88 ΑΝΑΜΕΣΑ ΣΤΑ ΕΙΔΗ 76.4% άνθρωπος-χοίρος 79.9% άνθρωπος-ποντικός 70.7% ποντικός-χοίρος ΕΠΑΝΑΛΗΨΕΙΣ ΠΡΟΛΙΝΗΣ ΜΕ ΜΟΤΙΒΑ ΤΟΥ ΤΥΠΟΥ: PXXP (47-109) PP P PP P P P P P P P P P P P E AA TL AKKTSALLDNHSNLK A AA SS DAA E KG GDGAEEAEA SGG GGRG C ΧΟΙΡΟΣ (50-118) PP P P P P P P P P P P P Q AA TTA AKKTSAKAD ALLNNHSNLK A TV SS DAT E KG GDGAEEDEAASGG GGRGSWS ΑΝΘΡΩΠΟΣ ΠΟΝΤΙΚΟΣ P P P P P P P P P P P EQAAA G AATKKT AKAD VLLNNHSNLK A TV AA SS DATSE KG GDGAEEDESNTGGRG (50-118) =

  23. MEΛΕΤΗ ΤΗΣ ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ ΒΜ88 ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΟΥ . ανθρώπου A) . ποντικού Hela κυττάρων εγκεφ εγκεφ RNA RNA RNA 1.8 kb BM88 κέλυφος φακοειδούς πυρήνα B) κροταφιαίος λοβός μετωπιαίος λοβός νωτιαίος μυελός παρεγκεφαλίδα ινιακός πόλος προμήκης φλοιός Μ.Β 2. 40 kb BM88 1. 35 kb β- ακτίνη

  24. A. B. cR 3000 BM88 D11S 922 14,50 11q23 IGF2 DRD4 RP_P2 BM 88 22,52 HRAS H19 11q23 TH CTSD BM88 HNAP2 IPL/ TSSC3 D11S 932 33,60 ΕΝΤΟΠΙΣΜΟΣ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟΥ ΒΜ88 ΓΟΝΙΔΙΟΥ ΣΤΟ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑ 11p15.5 ( LOC51286, Radiation Hybrid Mapping Consortium, NCBI)

  25. Χαρακτηριστικά της περιοχής 11p15.5 του ανθρώπινου χρωμοσώματος 11. Εμπεριέχει γενωμικά «εντυπωμένα» γονίδια(IGF2, H19, TSSC3 ) και συνδέεται με πολλές ανθρώπινες ασθένειες, όπως αναπτυξιακές ανωμαλίες (σύνδρομο Beckwith-Wiedemann) και την καρκινογένεση.

  26. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ ›Απομονώθηκαν τα cDNA του ΒΜ88 του ανθρώπου και του ποντικού και ταυτοποιήθηκαν οι ομόλογες πρωτεΐνες ΒΜ88. ›Η ανάλυση της αμινοξικής αλληλουχίας της πρωτεΐνης ΒΜ88 έδειξε την ύπαρξη επαναλήψεων προλίνης του τύπου PXXP, οι οποίες και καθιστούν την πρωτεΐνη ΒΜ88 ως υποψήφιο μόριο για αλληλεπιδράσεις με πρωτεΐνες που περιέχουν SH3 περιοχές (Src- homology domain) στην αμινοξική τους αλληλουχία. ›Ο χρωμοσωμικός εντοπισμός του ανθρώπινου γονιδίου ΒΜ88 στο χρωμόσωμα 11p15.5 σε συνδυασμό με τις ιδιότητές του υποδηλώνουν πιθανή εμπλοκή του ΒΜ88 σε αναπτυξιακές ανωμαλίες ή την καρκινογένεση.

  27. ΜΕΛΛΟΝΤΙΚΟΙ ΣΤΟΧΟΙ: Να εξεταστεί εάν το ΒΜ88 γονίδιο είναι γενωμικά εντυπωμένο. Να εξεταστεί εάν το ανθρώπινο ΒΜ88 γονίδιο εμπλέκεται σε ανθρώπινες ασθένειες. Να μελετηθεί το σηματοδοτικό μονοπάτι στο οποίο συμμετέχουν οι πρωτεΐνες ΒΜ88 και ΒΜ89/συναπτοφυσίνη στους μηχανισμούς της νευρικής διαφοροποίησης.

  28. Η πρωτεΐνη BM88 έχει διπλό ρόλο: συντονίζει την έξοδο από τον κυτταρικό κύκλο και τη διαφοροποίηση των προδρόμων νευρικών κυττάρων N2A BM88-C3C1 N2A BM88-C7G5 N2A Control +Rb+2μg cDNA BM88 +Rb+4μg cDNA BM88 +Rb+adeno-88 +Rb+cyclinD1 +Rb+PC3 +Rb BM88 p53 BM88 cell-cycle signaling pathway Cyclin D1 Cyclin B1 Cyclin E Cyclin D1/BM88 α-tubulin E2F N2A Growth arrest stimuli p21 N2A-BM88 p53 NIH-3T3 cells Neuro2a Neuro2a-BM88 Neuro2a Neuro2a-BM88 BM88/TuJ-1 BM88/Synaptophysin Georgopoulou et al., J Biol Chem. , 2006

  29. Ευχαριστώ… Εργαστήριο Κυτταρικής και Μοριακής Νευροβιολογίας Τριμελής επιτροπή Μαργαρίτης Λ. Λεκανίδου Ρ. Μάτσα Ρ. Θωμαΐδου Δ. Πολίτης Π. Λάβδας Α. Hurel C. Παπαστεφανάκη Φ. Σεργάκη Μ. Μακρή Γ. Κατσιμπάρδη Λ. Τσιώρας Κ. Κουρούπη Γ. Επιβλέποντες Μάτσα Ρ. Μαμαλάκη Α. Πρώην μέλη της ομάδας Μπούτου Φ. Παπαδόδημα Ο. Κουτμάνη Γ.

  30. Ν2Α-ΒΜ88 εκφράζουν NF, βIII -tubulin, SMI311 BM89/synaptophysin Μεγαλύτερη απόκκριση σε b-FGF FGF-R , NCAM

  31. Η διπλή χρώση ανοσοτυπωμάτων δύο διαστάσεων σε πρωτεϊνικά παρασκευάσματα εγκεφάλου χοίρου έδειξε ότι τόσο το μονοκλωνικό όσο και το πολυκλωνικό αντίσωμα έναντι της πρωτεΐνης ΒΜ89 αναγνωρίζουν τη συναπτοφυσίνη όπως και το ειδικό αντίσωμα SVP-38 του εμπορίου. mab89 και poly 89 SVP-38 και poly 89

  32. Πολυδύναμο προγονικό κύτταρο Πολυδύναμο προγονικό κύτταρο Κύτταρα του νευρικού συστήματος Προγονικό κύτταρο νευρώνων Νευρώνας Μεταγραφικοί παράγοντες Ομοιοτικοί (Emx, Pax) bHLH (ngn, mash, neuroD) Ενεργοποίηση νευροειδικών γονιδίων

More Related