DIAGNOSTICUL GESTATIEI PRIN METODE DE LABORATOR

1. DIAGNOSTICULGESTATIEIPRINMETODE DE LABORATOR Metodefizice Metodechimice Metodehistologice Metodebiologice Metodeimunologice

2. Metodefizice • Radiografiasiradioscopia: • La animalele de talie mica simijlocie • Permit diagn. gestatieitardiv, dupainitiereaosificariischeletului fetal • Avantaje:precizeaza nr. produsilor, asezareasidispunerealor in uter, diagn. malformatiilorsimonstruozitatilorfetale. Riscuri: aproapenule, atatatimp cat organogenezaesteterminata

3. Golden Retriever, gestatie 49 zile- Rx lateral si dorsal

4. 2. Electrocardiografia • Inregistrareagrafica a activitatiicardiacematerne (secuselemari) peste care se suprapunsecuselemici (activitateacardiacafetala) • Martor al viabilitatiifetale- clinicaanimalelormici 3. MetodaSokolovskaia • Vaca, fidelitate 80%: crestereadensitatiimucusului cervical la vacilegestanteevidentiataprintr-o reactie cu sulfat de cupru • Cu(SO4)2 sol.+ 1 pic mucus in 5-6 sec. mucusulcade la fundulpaharului (react.+,femelagestanta)

5. 4. CRISTALIZAREAMUCUSULUI CERVICAL LA VACA • Metoda de diagn. a starii de negestatie, fidelitate • Se realizeaza un frotiu din mucusul cervical- se examineaza la microscop: • In proestrusiestru: mucusulcristalizeaza sub forma uneifrunze de feriga, excluzandu-se gestatia Frotiu din mucus cervical- imagine de “feriga”

6. 5. Examinareaecografica Diagnosticul ecografic reprezintă o metodă neinvazivă şi nedureroasă de vizualizare a diferitelor structuri ale organismului. • Ultrasunetele- se propaga liniar (f. bine in mediu lichid, nu si in aer sau mediu solid) si genereaza un ecou la suprafata de separare intre doua medii cu densitate diferita. • Efectul Doppler: la limita de separare intre cele doua medii exista particule in miscare (circulatie fetala, placentara, cord fetal, circ. materna) ce det. modificarea frecventei undei ultrasonice • Efectul puls-ecou: ecoul este captat si convertit in semnal acustic/luminos • Frecventa sondei mare = imagine mai clara = penetrabilitate mai redusa

7. Diagnosticulecografic al gestatiei la catea

8. Aspect ecografic Doppler

9. Diagnosticulecografic al gestatiei la catea Gestaţie, 24 zile: se observă ecoul hiperecogen dat de embrion

10. Gestaţie, 35 de zile: se observă capul şi corpul fetal, precum şi brâul placentar Gestaţie, 35 de zile: secţiune transversală la nivelul fetusului, vezicula vitelină, brâul placentar şi ampula fetală

11. GESTAŢIE 31 ZILE – SE POT DECELA BCF, SEMN AL VIABILITĂŢII FETALE GESTAŢIE 32 ZILE – SAC GESTAŢIONAL ÎN CONTACT CU APEXUL VEZICII URINARE

12. GESTAŢIE 35 ZILE – BRÂUL PLACENTAR UŞOR DE EVIDENŢIAT

13. Diagnosticulecografic al gestatiei la iapa Gestatieiapa, 57 zile Gestatiegemelaraiapa, 30 zile

14. Diagnosticulecografic al gestatiei la scroafa Gestatiescroafa, 28 zile Embrioni 28 zile

15. Metodechimice • ReactiaCuboni -evidentiereacalitativa a hormonilorestrogeni, printr-o reactie de fluorescenta a estrogenilor in prezentaacidului sulfuric -folosita la iapaintrelunile 4-9 de gestatie (estrogeni la nivelurinar), fidelitate 98% -15 ml urina+ 3 ml HCl – (incalzire, filtrare, decantare, racire)- examinare la UV-fluorescentaverde= reactie+

16. Metodehistologice 1.MetodaBenesch-Kurasava, folosita la iapa - Evidentierea in frotiul de la nivelulmucusului cervical a celulelorepiteliateciliate,inmici conglomerate, faraleucocite 2. MetodaCiurea la scroafasioaie, fidelitateprecoce- 95% -apreciereamodificarilorhistologice ale epiteliului vaginal anterior (recoltarebiopsica, includere in gheata, sectiuni, colorare) -la scroafa: in estruepiteliul =20-25 straturi, in metestru 4-5 straturi, in gestatie 2-3 straturi -la oaie: 10-12 strauturi la negestante, la gestante 3-4 straturi, cu celulecubice (dupaziua 40 de gestatie)

17. Metodebiologice Principiu: evidentiereamodificarilorspecificeinduse de gonadotropinasericaasupraaparatului genital la animalele de laborator -gonadotropinaserica = h. glicoproteicsecretat de cel. trofoblastului fetal ceinvadeazacupeleendometriale in intervalul 36-120 de zile de gestatie, cu un maxim intre 55-75

18. Metodeimunologice • Inhibareareactiei de aglutinaredintreeritrocitele de oaiesi un ser antiPMSG, dacaacesteeritrocitesuntpuse in prealabil in contact cu serulprovenit de la iapa de testat, candaceastaestegestanta ERITROCITE Ser anti PMSG Aglutinare (martor) ERITROCITE Ser iapa de testat Fara reactii vizibile ERITROCITE Aglutinare=reactie - Ser iapa de testat Ser anti PMSG Lipsa aglutinarii=reactie+ (iapa gestanta)

19. 2.Imunoforeza in gel de geloza -ser antiPMSGconcentratsi specific se introduce intr-un godeu central, intr-o placa Petri, seruri de la iepele de testatintroduse in godeuriperiferice -camp electroforetic - proteinelevormigra specific in functie de masalormoleculara, intensitatealiniilor de precipitarece se formeazaested.p. cu cant. de PMSG din serul de analizat ser 1 ser 6 ser 2 Ser antiPMSG ser 5 ser 3 ser 4

20. 3.Determinareafactorului de gestatietimpurie -complex proteic dependent de gestatie, produs de ovarsi oviduct care impiedicarejectiaembrionului de catre mama -se identifica la 24 de ore dupamonta la oaiesi 4 ore la scroafa 4. RIA- Ac.antiP se obtinprininj.repetata a P la iapa Ac.antiP+ Ag(P din ser,lapte) Ac-Ag+Ac.antiP(excesul) Ac.antiP+ Ag (P marcat cu tritiu) Ac - Ag + Ag (excesul) -cu ajutorulunuispectometru de scintilatie se determinanumaruldezintegrarilor radioactive- se raporteaza la o curba etalon si se precizeazaastfelcantitatea de P (ng/ml) din ser saulapte.

21. 5. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) Acelasiprincipiu ca RIA, doar Ag estemarcat cu o enzima. Ag+enzima - determinadegradareaunuisubstrat, apare o reactie de culoare, a careiintensitate se determinaspectofotometric Diverse valori ale progesteronemiei la cateva specii domestice

22. 1. Godeurilesuntcaptusite cu un anticorp specific.2. Se adaugaproba (Ac poatecapta Ag din proba).3. Se adauga un Ac secundar de detectie, care se fixeazape Ag capturat de primul Ac.4. Se adaugasubstratulenzimatic, care se fixeazapecomplexul format. 5. Intensitateaculoriicomplexului format ested.p. cu cant. de Ag din proba de analizat.6. Intensitatea se apreciazaspectofotometric la 450 nm.