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MÉTODOS MOLECULARES NA ANÁLISE CROMOSSÔMICA

Universidade Católica de Goiás Pró-Reitoria de Graduação Departamento de Biologia. MÉTODOS MOLECULARES NA ANÁLISE CROMOSSÔMICA. Cláudio C. Silva, M.Sc. Citogenética Molecular. FISH / ISHI / M-FISH SKY CGH. Hibridização “ in situ ” (Sondas de DNA). Cláudio C. Silva UCG/LaGene.

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MÉTODOS MOLECULARES NA ANÁLISE CROMOSSÔMICA

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Presentation Transcript

  1. Universidade Católica de GoiásPró-Reitoria de GraduaçãoDepartamento de Biologia MÉTODOS MOLECULARES NA ANÁLISE CROMOSSÔMICA Cláudio C. Silva, M.Sc.

  2. Citogenética Molecular FISH / ISHI / M-FISH SKY CGH Hibridização “ in situ ” (Sondas de DNA) Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  3. Hibridização “in situ” Pardue e Gall (1969) Sondas radioativas Nederlof et al. (1989) Sondas não isotópicas (NISH) Bühler (1989) Sondas cromossômicas, centroméricas e teloméricas Hopman et al. (1992) Sondas de seqüências únicas Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  4. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization • Método Rápido; • Alta especificidade e confiabilidade; • Difícil otimização; • Equipamentos e material de consumo caros; FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  5. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  6. Blue Acqua Green Yellow Orange Red FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  7. Método Cultura Celular: • - Sangue periférico • - Medula Óssea • - Tumores sólidos, etc. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization • Amostra Heparinizada • Meio RPMI • Glutamina • Soro Fetal Bovino • Fitohemaglutinina FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  8. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  9. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  10. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  11. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Sondas para DNA repetitivo Sondas para seqüência única Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  12. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Pancentromérica Telomérica Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  13. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization rRNA (NOR) Seqüências repetitivas Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  14. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Seqüências específicas Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  15. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization WCP – Whole Chromosome Probe (Sonda para cromossomo inteiro) Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”

  16. Sexo Masculino 47,XY,+21 Sexo Feminino 47,XX,+21 FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  17. 49,XXXXY FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  18. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  19. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  20. Cromossomos inteiros Lócus FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  21. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  22. Pancentromérica XY,18 Whole Chromosome Probe 22 FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  23. DAPI - Vysis® / WCP 1 - Vysis® / WCP 2 - Vysis® / WCP 4 - Vysis® FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  24. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  25. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cromossomo 17 HER2/neu Gene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene

  26. Considerações Finais • Revolução a análise citogenética; • Permite a identificação de microdeleções, translocações, amplificações gênicas, etc; • Interage com o mapeamento gênico; • Possibilita a confirmação do diagnóstico; • Permite uma melhor compreensão de eventos moleculares; Cláudio C. Silva UCG/LaGene

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