Testov n toxicity pr myslov ch chemik li ii senzibilizace k e a genotoxicita
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 22

Testování toxicity průmyslových chemikálií II – senzibilizace kůže a genotoxicita PowerPoint PPT Presentation


  • 72 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

Testování toxicity průmyslových chemikálií II – senzibilizace kůže a genotoxicita. Průmyslová toxikologie (C867). Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT). Testovací metody. LLNA – Local Lymph Node Assay (Test regionálních mízních uzlin) - OECD 429

Download Presentation

Testování toxicity průmyslových chemikálií II – senzibilizace kůže a genotoxicita

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Testov n toxicity pr myslov ch chemik li ii senzibilizace k e a genotoxicita

Testování toxicity průmyslových chemikálií II – senzibilizace kůže a genotoxicita

Průmyslová toxikologie (C867)


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

Testovací metody

  • LLNA – Local Lymph Node Assay (Test regionálních mízních uzlin) - OECD 429

  • GMPT - Maximalizační test na morčatech - OECD 406


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act1

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

LLNA – OECD 429

  • Vyvolání alergické reakce vyžaduje aktivaci a následnou expanzi T-lymfocytů

  • Střet kůže se senzibilizátorem vyvolá transport antigenů z kůže do lymfatických uzlin

  • Antigenem řízená aktivace T-lymfocytů má za následek dělení a diferenciaci alergen-specifických T-lymfocytů

  • Nárůst počtu T-lymfocytů je měřitelným ukazatelem reakce organismu na kontakt s látkou mající senzibilizační potenciále


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act2

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

LLNA – OECD 429

  • Pokusná zvířata – samice myší staré 8 – 12 týdnů, kmen BALB/c, NMRI

Postup

  • testovaná látka – 3 různé koncentrace

  • negativní kontrola – aceton/olivový olej, dimethysulfoxid aj.

  • pozitivní kontrola - dinitrochlorbenzen aj.


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act3

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

LLNA – OECD 429

DEN 1 – 3

  • aplikace test. látky na dorsální stranu obou uší , aplikační objem 25 mLna ucho

DEN 6

  • aplikace fyziologického roztoku obsahujícího předepsané množství radionuklidu

    • (3H thymidinnebo 125I deoxyuridin)

  • 5 hodin po aplikaci utracení zvířat a odběr uzlin


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act4

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

LLNA – OECD 429


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act5

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

LLNA – OECD 429


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act6

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

LLNA – OECD 429

Vyhodnocení

  • Příprava buněčné suspenze

  • Měření inkorporované aktivity v dpm

    Výpočet Indexu stimulace:

  • průměrná hodnota dpm exponované skupiny/ průměrná hodnota dpm kontrolní skupiny

  • je-li IS větší nebo roven 3 je látka považována za senzibilizující.

  • dávková závislost


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act7

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

GMPT - OECD 406

  • Indukční fáze:

  • kontaktem kůže se senzibilizátorem jsou aktivovány T-lymfocyty a dochází k jejich proliferaci (jako u testu LLNA)

  • Provokační fáze:

  • opakovaným kontaktem se senzibilizátorem je u zvířete vyvolána alergická reakce – kontaktní dermatitida

Pokusná zvířata:

  • albinotická morčata obou pohlaví, váha 150 – 250 g, kmen BFC, ve studii 30 zvířat (20 exponovaných + 10 kontrolních)


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act8

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

Metodika:

  • DEN 1 - indukční expozice intradermální

  • DEN 7- lokální indukce dermální

  • DEN 21- provokace

  • DEN 23 a 24 – odečet kožní reakce

GMPT - OECD 406

  • Vyhodnocení:

  • 24 a 48 hodin po aplikaci se vyhodnotí kožní reakce (zarudnutí, otok)

  • Porovnává se reakce kůže exponované testovanou látkou a reakce kůže exponované vehikulem

  • Pozitivní výsledek = 30% morčat má pozitivní reakci na kůži tj. zarudnutí případně otok


Senzibilizace k e alergick kontaktn dermatitida act9

Senzibilizace kůže (alergická kontaktní dermatitida ACT)

Porovnání GPMT a LLNA testu

GMPT :

  • Manipulace: holení, injekční aplikace, opakovaná bandáž

  • Test trvá 25 dní

  • Výsledek = subjektivní hodnocení

LLNA:

  • Manipulace: přímá aplikace test. látky neinvazivní formou

  • Test trvá 6 dnů

  • Výsledek = číslo

  • U některých látek nelze použít


Genotoxicita

Genotoxicita

  • Studie poskytují informace o možných genotoxických vlastnostech látek tj. o schopnosti způsobovat změny genetického materiálu - mutace

Rozdělení mutací

  • genové - změny v molekule DNA

  • chromozomální - chromozomální aberace (změny struktury a tvaru chromozómu)

  • genomové - změny v chromozomálním počtu

  • nechromozomální - mimojaderné


Genotoxicita testovac metody

Genotoxicita - testovací metody

  • Mutagenita - test chromozómových aberací u savčích buněk in vitro

  • Mutagenita - test chromozómových aberací v kostní dřeni savců in vivo

  • Mutagenita in vivo mikronukleus test v savčích erytrocytech

  • Mutagenita-test reverzních mutací u baktérií

  • Genové mutace-Saccharomyces cerevisiae

  • Mitotické rekombinace Saccharomyces cerevisiae

  • Mutagenita-test genových mutací v savčích buňkách in vitro

  • Poškození DNA reparace- neplánovaná syntéza DNA-savčí buňky in vitro

  • SCE - výměna sesterských chromatid in vitro

  • Recesivní letální mutace vázané na pohlaví u Drosophilla melanogaster

  • Test transformace savčích buněk in vitro

  • Dominantní letální test u hlodavců


Mutagenita test reverzn ch mutac u bakt ri oecd 471

Mutagenita - test reverzních mutací u baktérií – OECD 471

  • Detekce genových mutací – mutace v genu pro syntézu aminokyselin His (Trp)

    • zkouška pro počáteční vyšetření genotoxické aktivity

    • pět kmenů bakterií je vystaveno působení zkoušené látky za přítomnosti i bez přítomnosti metabolického aktivačního systému

    • aktivační systém – posmitochondrionální frakce z jater hlodavců ošetřených prostředkem indukujícím enzymy

  • Kontrola počtu narostlých kolonií po 48-72 hod – porovnání počtu kolonií revertantů (v přítomnosti testované látky) s počtem kolonií spontánních revertantů (NK)


Mutagenita test chromoz mov ch aberac u sav ch bun k in vitro oecd 473

Mutagenita - test chromozómových aberací u savčích buněk in vitro – OECD 473

  • Identifikace látek způsobující strukturní chromozomové aberace = změny ve struktuře nebo počtu chromozomů

    • zjištění možných mutagenů a karcinogenů u savců

      Základní rozdělení aberací:

  • Chromatidového typu

  • Chromozomového typu

  • Pro test se používají stabilizované buněčné linie, buněčné kmeny nebo primární buněčné kultury


Mutagenita test chromoz mov ch aberac u sav ch bun k in vitro oecd 4731

Mutagenita - test chromozómových aberací u savčích buněk in vitro – OECD 473

  • Kultury jsou vystaveny zkoušené látce (a to s metabolickou aktivací i bez ní), v předem stanovených intervalech se přidává látka zastavující metafázi (např. Kolchicin)

  • Hodnocení přítomnosti chromozomových aberací - nejméně 200 mitóz (46±2 centromery)

  • Stanoven Mitotický index - buňky v metafázi : celkový počet buněk v populaci

  • Procento aberentních buněk vůči negativní kontrole


Mutagenita test chromoz mov ch aberac u sav ch bun k in vitro oecd 4732

Mutagenita - test chromozómových aberací u savčích buněk in vitro – OECD 473

Chromozomový zlom

Chromozomové aberace - příklady

Prstencový chromozom (kruhový fragment)


Mutagenita test chromoz mov ch aberac u sav ch bun k in vitro oecd 4733

Mutagenita - test chromozómových aberací u savčích buněk in vitro – OECD 473

Acentrický fragment

Chromozomové aberace - příklady

Dicentrický chromozom


Mutagenita in vivo mikronukleus test v sav ch erytrocytech oecd 474

Mutagenita – in vivo mikronukleus test v savčích erytrocytech - OECD 474

  • Mikronukleus test zjišťuje poškození, jež testovaná látka způsobuje v chromozómech nebo mitotickém aparátu erytroblastů.

  • Výsledkem cytogenetického poškození je vznik mikrojader – chromozómových fragmentů v erytrocytech a současně změna v poměru zralých a nezralých erytrocytů v kostní dřeni.

  • Pro tento test existuje in vitro metoda – v současné době je ve fázi schvalování

  • Metodika in vivo – pokusné zvíře potkan

    • testovaná látka v 1 – 3 koncentracích

    • negativní kontrola + pozitivní kontrola

    • jednorázová aplikace

    • vyšetření kostní dřeně 24 a 48 hodin po aplikaci


Mutagenita in vivo mikronukleus test v sav ch erytrocytech oecd 4741

Mutagenita – in vivo mikronukleus test v savčích erytrocytech - OECD 474

Hodnocení kostní dřeně

Normochromní erytrocyt:

  • zralý erytrocyt, barvící se eosinofilně – červenooranžově

    Polychromní erytrocyt:

  • nezralý erytrocyt, barvící se bazofilně - šedomodře

    Mikrojádra:

  • fragmenty jádra vznikající během dělení buňky z chromozómů opožděných v dělení

    Hodnocení

  • poměr zralých a nezralých erytrocytů

  • přítomnost nezralých erytrocytů s mikrojádry


Mutagenita in vivo mikronukleus test v sav ch erytrocytech oecd 4742

Mutagenita – in vivo mikronukleus test v savčích erytrocytech - OECD 474

savčí buňky s mikrojádry – in vitro test - příklady


Mutagenita kometov test comet assay

Mutagenita – kometový test (Comet assay)


  • Login