Tests rapides de dépistage du VIH Dr C. Delamare

1. Tests rapides de dépistage du VIHDr C. Delamare FORMATION CDAG/CIDDIST NANCY – 13 septembre 2011

2. Diagnostic biologique de l’infection par le VIH  Diagnostic Indirect : • Mise en évidence des anticorps anti-VIH (sérologie)  Diagnostic Direct : Mise en évidence du virus, de ses composants ou de son génome Ag p24 • ARN viral plasmatique • (charge virale) • ou d ’ADN proviral Culture virale

3. Tests ELISA ou EIA Techniques de dépistage des anticorps 1985 Tests de 2eme génération : Antigènes recombinants et peptides de synthèse 1986 Tests de 1ere génération : lysats de cellules infectées par VIH-1- Faux négatifs, et spécificité médiocre Tests mixtes : détection des anticorps dirigés contre le VIH-1 et VIH-2 1987 Tests sandwich (3ème génération) : - Sensibilité +++ - Spécificité +++ Actuellement 4ème génération 1991 Tests combinés détectant simultanément les anticorps anti-VIH-1 et anti-VIH-2 et de l’antigène p24 (4ème génération) 1997

4. Recommandations de la Haute autorité de santé (HAS) Arrêté du 28 mai 2010 • Test combiné de 4e génération • seuil de détection de l’antigène p24 : 2UI/ml • L’utilisation de 2 tests pour le dépistage n’est plus nécessaire • (Etude APHP sur 37 568 échantillons testés : Haute sensibilité, meilleure spécificité, réduction du cout, Dominique Costagliola , AIDS 2008, 22:2035–2044) • 2 prélèvements pour la confirmation d’un positif • Tout test positif doit être confirmé par un Western blot ou Immunoblot (spécificité)

5. Tests ELISA Microplaques • Automatisation +++ • Adaptée à de grandes séries • Traçabilité informatique • Rapide : 1 technicien =2h30 pour 90 échantillons • Reproductible • Sensible • Spécifique Détection des Anticorps anti VIH Tests EIA sur automates Haut débit rapides+++ –1 Tests unitaires diagnostic rapide (TDR) : sérum TROD : sang capillaire

6. Les marqueurs de la primo-infection VIH-1 3 marqueurs biologiques ARN plasmatique viral (charge virale) antigène p24 Anticorps anti-VIH-1

7. Évolution des marqueurs au cours de la primo-infection par le VIH Durée de la fenêtre sérologique estimée à 21 à 26 jours après la contamination Délai entre détectabilité ARN et anticorps ARN Anticorps anti-VIH Durée de la fenêtre sans Ag p24 et sans AC Ag p24 • ARN • Détection primo-infection quelques jours (<7 jours) avant Ag et 12 jours avant un test Ac • Beaucoup plus sensibles que la sérologie dans la période très précoce • PCR très sensibles à la variabilité du génome et nettement plus sensible à cette variabilité que les tests sérologiques. • ARN ne doit pas devenir un test de dépistage • En général fort mais peut parfois être faible • Ag p24 • Titres élevés dans la phase aiguë de primo-infection mais durée positivité courte • Cas peu fréquent de réplication faible avec Ag p24 négatif • Difficultés de détection de l’Ag p24 par formation de complexes Ag-Ac dans le sérum Michael P. BuschTransfusion Medicine Review Vol 11, No 3 JUL Y 1997

8. FIEBIG ET AL. LA FENÊTRE SÉROLOGIQUE POUR LES TESTS COMBINÉS : 21 - 26 JOURS POST - CONTAMINATION * • 6 semaines = • durée moyenne de la fenêtre sérologique + 2 semaines incertitudes des performances des tests combinés (non –B) Charge virale + 20 copies/mL Ag p24 - Charge virale+ > 20 000 copies Ag p24 +

9. Tests rapides de dépistage du VIH Deux arrêtés 28 mai 2010 9 novembre 2010 fixant les conditions de réalisation du diagnostic biologique de l’infection à VIH 1 et 2 et les conditions de réalisation des TROD dans les situations d’urgence

10. Arrêté du 28 mai 2010 • TROD dans certaines situations d’urgence (sang total, sérum ou plasma) • Accident d’Exposition au Sang : patient « source » • Accident d’exposition sexuelle : partenaires • accouchement : statut sérologique inconnu ou exposition récente. • Urgence diagnostique d’une pathologie aiguë évocatrice du sida. • Réalisation par : • médecin exerçant en cabinet • médecin ou biologiste médical (établissement ou service de santé) • sage-femme • infirmier ou technicien de laboratoire (sous la responsabilité d’un médecin ou d’un biologiste) • Information du patient concernant les limites inhérentes à l’interprétation du résultat • Consentement éclairé de la personne obligatoire • Validation obligatoire par un test de 4eme génération • Sur un échantillon biologique distinct • Mise en place une procédure d’assurance qualité formalisée

11. DépistageArrêté du 9 novembre 2010 • En dehors des situations d'urgence mentionnées dans l'arrêté du 28 mai 2010 • En dehors des services ou établissements de santé cités dans l'arrêté du 28 mai 2010 • Elargissement aux : • structure de prévention habilitée • structure associative habilitée • médecin, sage-femme ou infirmier • Salarié ou bénévole, non professionnel de santé, • formation validée • TROD+ : test de 4ème génération

12. Tests rapide Principales caractéristiques • Test unitaire ou petites séries • Lecture visuelle et subjective • Pas d’équipements de laboratoire • Délai résultat < 30 mn • Détection Ac anti-VIH-1 et VIH-2. • Peut être confiée à des personnes ayant une expertise technique limitée • Processus de contrôle interne de qualité : «antigène non VIH» qui lie les Ig présentes dans le sérum Positivité du contrôle interne indispensable pour la validation Inconvénients • Absence d’automatisation • Non adaptable à de grandes séries • Pas de lecture code barre • Risque d’inversion • traçabilité résultats ? • Temps technicien ++ si arrivage séquentiel des tubes sang total • évite l’utilisation de centrifugeuse et matériel de laboratoire • hémolyse des globules rouges peut gêner la réaction de liaison anticorps-antigène. • Moins sensible : 1 ml de sang total présente 50% d’anticorps en moins qu’1 ml de plasma salive : - liquide craviculaire - Non autorisé en France - taux d’anticorps est 100 à 1000 fois inférieur à celui du plasma Sérum ou plasma : meilleure sensibilité

13. Principes des TROD • Ag d’enveloppe : VIH-1 (gp41) et VIH-2 (gp36) • immuno-chromatographie ou filtration sur membrane • Migration du sérum déposé sur le support • par capillarité en entraînant avec lui des réactifs déjà présents sur TDR • rencontre des antigènes déposés sur la membrane lors de la filtration du sérum

14. Etude prospective française - Hôpital Saint-Louis Sensibilité de 5 TROD sur sang capillaire et/ou salive • 200 HIV + adultes : 194 VIH-1 et 6 VIH-2 • 20 séronégatifs • 5 TROD • Oraquick Advance: sang capillaire et salive • VIKIA HIV ½ • Determine HIV 1–2 et combo • INSTI HIV K Sensitivity of Five Rapid HIV Tests on Oral Fluid or Finger-Stick Whole Blood: A Real-Time Comparison in a Healthcare Setting Juliette Pavie, Anne Rachline, Benedicte Loze, Laurence Niedbalski, Constance Delaugerre, Eric Laforgerie, Jean-Christophe Plantie, Willy Rozenbaum, Sylvie Chevre, Jean-Michel Molina, Francois Simon. PLoS ONE, July 2010, Volume 5

15. Etude de la sensibilité des TROD • Salive : OraQuick significativement moins sensible que sur sang capillaire • Sang capillaire : • sensibilité OraQuick et Détermine < INSTI (p = 0,025 et 0,03, respectivement) • Faux négatifs • 5,2% (60 essais provenant de 36 patients) • - 6 avaient > 3 tests négatifs (infection récente) • - 4 patients traités avec CV indétectable (seuil à 200 cp/ml associée a faux négatif) • VIH-2 : 2 faux négatifs sur salive mais positifs sang capillaire OraQuick • Spécificité : 20 VIH-négatifs par tous les TDR • Tests invalides • 39 (3,2%) dont 33 avec Test 4G Détermine (16,5%) Pavie et al.

16. Sensibilité sérum>sang capillaire • Faux négatifs sang capillaire : • Oraquick : 11 • Vikia : 3 • Determine Ac : 10 et Ag-Ac : 7 • INSTI : 2 • 18 patients avec au moins un test négatif sur sang capillaire • 12/ 18 patients : + sur le sérum

17. Comparaison de 8 TDR sériques • 100 patients HIV + • 46 sous types B • 41 sous types non-B • 2 groupes O • 5 HIV-2 • WB indeterminés • 3 panels de séroconversion • 11 échantillons de séroconversion • 50 HIV- Sensitivity of 8 CE (European Community)-approved rapid disposable tests for anti-HIV antibody detection during and after seroconversion. Laforgerie E et al. J Virol Methods 2010

19. Résultats discordants 100% détection des WB indéterminés HIV2 : 100% détection 1/3 sous-type A retrouvé négatifs par 3/8 tests Groupe O : négatifs avec l'un des kits (Core VIH 1 & 2) Tous les sous types B sont détectés 1 faux + en Determine Nb : peu d’étude avec virus non B avec les TROD, beaucoup moins d’étude qu’avec les ELISA

20. Sensibilité avec les 3 panels de séroconversionEchantillons très précoces : 0 à 50% des tests +séroconversion : 83 à 100%

21. Comparaison des TROD • 2 éléments à prendre en compte : • Volume d’échantillons • - durée de la réaction

22. Sensibilité des différents tests semaines

23. Importance du programme de formation sur l’exactitude • 4 TROD : • Advance Quality HIV Rapid Test (In Tec Products) • Determine HIV-1/2 (Inverness Medical) • Insti HIV-1/HIV-2 (BioLytical Laboratories) • SD Bioline • 10 échantillons (3 - et 7 +) Amélioration de l’exactitude N = 22 N = 34 N = 19 Photographed Rapid HIV Test Results Pilot Novel Quality Assessment andTraining SchemesYu-Ho C. Chiu et al. mars 2011

24. Certificat de formation à l’utilisation des Tests rapides d’orientation diagnostic du VIH (TROD)

25. Photocopie ou photo du test