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白血病 的实验室诊断

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白血病 的实验室诊断. 安徽省立医院 丁邦胜. 患者有不明原因的持续或反复发热,贫血,恶液质,有出血倾向,肝、脾、淋巴结肿大,骨骼疼痛或胸骨有压痛,不明原因的消瘦,体力逐渐下降等症状就诊时,医生要高度警惕。考虑是否为血液病?. 血常规的检测是必不可少的. 血常规中会发现原始或幼稚细胞,或某一种细胞明显增多或减少. 当高度怀疑是白血病,骨髓穿刺是首要进行的,骨髓细胞学检测是诊断白血病及疗效观察、判断预后有着重要作用。.

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Presentation Transcript
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白血病的实验室诊断

安徽省立医院 丁邦胜

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患者有不明原因的持续或反复发热,贫血,恶液质,有出血倾向,肝、脾、淋巴结肿大,骨骼疼痛或胸骨有压痛,不明原因的消瘦,体力逐渐下降等症状就诊时,医生要高度警惕。考虑是否为血液病?
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血常规中会发现原始或幼稚细胞,或某一种细胞明显增多或减少血常规中会发现原始或幼稚细胞,或某一种细胞明显增多或减少
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当高度怀疑是白血病,骨髓穿刺是首要进行的,骨髓细胞学检测是诊断白血病及疗效观察、判断预后有着重要作用。
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白血病是起源与造血系统的恶性肿瘤性疾病,其特征是造血组织中某一系列或几系列血细胞无控制地增生、并侵润其他组织,骨髓及外周血中以原始及早期幼稚细胞为主,临床常见贫血、发热和肝、脾、淋巴结肿大等表现,其起病急,发展快,未经治疗一般病程6个月之内。

病因:1、电离辐射

2、化学因素

3、病毒

4、遗传因素

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按白血病细胞成熟障碍的情况,以及病情发展快慢将白血病划分为急性白血病和慢性白血病
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白血病细胞形态特点
  • 细胞大小不均及形态异常
  • 胞核异常,核形不规则,可见扭曲、折叠
  • 核仁异常,核仁有的大而明显,有的不清
  • 变性的征象:Auer`s小体、蓝细胞。
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骨髓检查是诊断白血病的主要方法

骨髓中原始粒细胞或原始(单、淋)+幼稚(单、淋)细胞≥20%方可诊断为急性白血病

急性白血病分为急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病。

常用的细胞化学染色:POX、NSE、NSE-NaF、CE、NAP、ACP、PAS等

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急性白血病形态学特点:

血象:贫血,白细胞大部分明显最高,少数减少,可见原始、幼稚细胞,血小板明显减少。

骨髓象:常增生明显活跃或极度活跃,原始、幼稚细胞明显增多,常常伴有形态学异常,红系、巨核系受抑制。

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POX

≥3%

<3%

ANLL

ALL

NSE,NSE-NaF

NSE,NSE-NaF

抑制 不抑制

不抑制 抑制

细胞体积大小、胞浆空泡

早幼粒 原始 原始+幼稚

小细胞 大小细胞 大细胞胞浆有空泡

红系≥50%

M3 M1、M2 M6 M4 M5 L1 L2 L3

根据细胞化学染色将急性白血病分型

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细胞免疫分型的临床应用1 有助于识别不同系列的细胞 识别髓系细胞的抗体有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。识别淋巴细胞系列的抗体有:CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD19、CD20、CD52、CD77等。识别巨核细胞和血小板的抗体有CD41、CD42、CD61、等。识别红细胞系列的抗体常用血型糖蛋白A或B,CD71。

t cd2 cd3 cd4 cd7 cd8 b cd19 cd20 cd22 nk cd16 cd56
识别不同的淋巴系统 识别成熟T淋巴细胞的抗体有CD2、CD3、CD4、CD7、CD8等。识别成熟B淋巴细胞的抗体有CD19、CD20、CD22等。识别NK细胞的抗体有CD16、CD56等。
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用于识别不同分化阶段的细胞CD34+、CD90+、Lin-被认为使造血干细胞的主要标志; CD34+、CD33+为造血干细胞向髓系定向的标志; CD34+、TDT+、CD10+、CD7+为T淋巴细胞系祖细胞标志;CD34+、CD19+为B淋巴细胞系祖细胞标志。

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急性粒细胞白血病(M1、M2)

M1:急性粒细胞白血病未成熟型,骨髓中原粒细胞≥90% (非红系),早幼粒很少,中幼粒以下阶段不见或罕见。

M2:急性粒细胞白血病部分成熟型,分为两个亚型:M2a:骨髓中原粒细胞30~90% (非红系),早幼粒以下阶段>10%,单核细胞<20%;M2b:异常中性中幼粒>30%。

细胞化学染色:POX>3%,NSE:阴性~弱阳性,NSE-NaF:不抑制,NAP:减低,CE:阳性,PAS:阴性

m1 hla dr mpo cd34 cd33 cd13 cd11 cd15 t 9 22 bcr abl
M1免疫表型: HLA─DR,MPO,CD34,CD33,CD13阳性,CD11,CD15阴性有t(9;22)形成BCR/ABL融合基因
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免疫表型: HLA-DR,MPO,CD57,CD33,CD13阳性,其中CD33,CD13阳性率减低,更成熟的抗原CD15和CD11b阳性率增高有t(8;21)(q22;q22)或AML1基因重排

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M3:急性颗粒增多的早幼粒细胞白血病

分为两个亚型: M3a(粗颗粒型),M3b(细颗粒型)

细胞化学染色:POX:100%强阳性,NSE:阳性,NSE-NaF:不抑制,NAP:减低,CE:阳性

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免疫表型: CD33,CD13阳性,CD34、HLA-DR阴性

遗传学:t(15;17)及PNL/RARa融合基因

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M4:急性粒-单细胞白血病。分为4个亚型

M4a:原始和早幼粒细胞为主,原、幼单和单核细胞≥20%(非红系)

M4b:原、幼单核细胞为主,原始和早幼粒细胞> 20%(非红系)

M4c:原始细胞即具有粒细胞系又具有单核细胞系形态特征>30% (非红系)

M4eo:除上述特点外,还有粗大而圆的嗜酸颗粒及嗜碱颗粒细胞占5~30% (非红系)

细胞化学染色:POX>3%,NSE:阳性,NSE-NaF:抑制,,CE:部分阳性,

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免疫表型:CD13,CD14,CD15.CD33.HLA-DR阳性

遗传学:M4Eo有16号染色体异常,inv(16)(p13;q22)或t(16;16)(p13;q22)

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M5:急性单核细胞白血病,分为两个亚型

M5a:未分化型:骨髓中原单≥80% (非红系)

M5b:部分分化型:骨髓中原始和幼稚单核细胞>30%,原单细胞<80% (非红系)

细胞化学染色:POX>3%(弱阳性),NSE:阳性,NSE-NaF:抑制,NAP:正常或增高,CE:阴性

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免疫表型: CD11,CD13,CD14,CD15,CD33,HLA-DR,CD36,CD64和溶菌酶阳性,CD34阴性

遗传学:常有t/del(11)(q23),多见于M5a,

t(9;11)易位致MLL-AF9融合基因及t(11;19)易位致MLL-ENL融合基因多见

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M6:急性红白血病。骨髓中红细胞系>50%,且形态学异常,原粒(或原单+幼单)>30%(非红系);若血片中原粒或原单>5%,骨髓中原粒(或原单+幼单)>20%(非红系)

M6前期为红血病期,为单一红系统恶性增生,且形态异常,原红≥30%

细胞化学染色:POX>3%,NSE:阴性~弱阳性,NSE-NaF:不抑制,PAS:幼红细胞阳性

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免疫表型:原始红细胞的血型糖蛋白A,CD71阳性,同时表达髓系抗原: CD13, CD33, CD117,MPO等, CD34阴性或阳性

遗传学:有5q-/-5,7q-/-7,-3,+8等非特异染色体异常

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M7:急性巨核细胞白血病:骨髓中原始巨核细胞≥20%。M7:急性巨核细胞白血病:骨髓中原始巨核细胞≥20%。

细胞化学染色:POX阴性,NSE:阴性, CE:阴性,PAS:阳性

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免疫表型: CD41和、或CD61阳性

遗传学:有inv(3)或del(3);+8,+21等异常

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急性髓细胞白血病微分化型(M0)

细胞形态无明显特征,细胞化学染色绝大部分为阴性。

免疫表现:表达一种或几种髓细胞抗原:CD13,CD33,CD117。不表达T、B系列抗原,表达细胞较早期抗原:CD34,TDT,HLA-DR等。而成熟阶段如CD11b,CD15,CD14等不表达。

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急性淋巴细胞白血病根据细胞形态大小分为L1、L2、L3急性淋巴细胞白血病根据细胞形态大小分为L1、L2、L3

细胞化学染色:POX<3%,NSE:阴性~弱阳性,NSE-NaF:不抑制,PAS:阳性,NAP:明显增高。

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L1:原始和幼稚淋巴细胞以小细胞为主,直径<12um,核圆形,偶有折叠、凹陷,染色质粗,结构较一致,核仁小且不清楚,胞浆少。L1:原始和幼稚淋巴细胞以小细胞为主,直径<12um,核圆形,偶有折叠、凹陷,染色质粗,结构较一致,核仁小且不清楚,胞浆少。
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L2:原始和幼稚淋巴细胞以大细胞为主,直径>12um,核形不规则,有折叠、凹陷,染色质较疏松,结构较不一致,核仁清楚,胞浆量较多。L2:原始和幼稚淋巴细胞以大细胞为主,直径>12um,核形不规则,有折叠、凹陷,染色质较疏松,结构较不一致,核仁清楚,胞浆量较多。
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L3:原始和幼稚淋巴细胞大小较一致,以大细胞为主,直径>12um,核形较规则,染色质呈均匀点状,核仁清楚,胞浆较多,深蓝色,空泡明显。L3:原始和幼稚淋巴细胞大小较一致,以大细胞为主,直径>12um,核形较规则,染色质呈均匀点状,核仁清楚,胞浆较多,深蓝色,空泡明显。
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遗传学:

70%-90%有克隆性核型异常,其中66%为特异性染色体重排。

可见假二倍体,超二倍体,亚二倍体等

可见非特异性结构重排:6q-,t/del(9p),t/del(12p)

可见特异性结构重排:t(8;14),t(11;14),t(9;22),t(4;11),t(1;19)等

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慢性白血病形态学特点:

血象:红细胞和血红蛋白早期正常,后随着病情发展逐渐下降;血小板早期正常或最高,晚期下降。白细胞显著增高,以后期细胞为主。

骨髓象:常增生极度活跃,某系细胞个阶段明显增生,常常伴有形态学异常,红系、巨核系早期正常,晚期受抑制。

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慢性粒细胞白细胞

以各期粒细胞明显增生为主,嗜酸、嗜碱细胞明显增多。

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免疫学表现: 表达:CD13,CD33,CD15阳性。CD14,CD34,CD16,HLA-DR也可为阳性

遗传学:90%-95%有t(9;22)(q34;q11)易位, Ph染色体,可检出bcr/abl融合基因

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慢性淋巴白血病形态学特点:

血象:白细胞显著增高,以成熟样淋巴细胞为主,有时可见少数原始、幼稚淋巴细胞。

骨髓象:常增生明显到极度活跃,以成熟样淋巴细胞增生为主,>40%,粒、红系、巨核系早期正常,晚期受抑制。

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免疫学表现:

B-CLL呈κ或λ单克隆轻链型,主要表达:CD5,CD19,CD20.SmIg,FCM7等,不表达CD10和CD22.

T-CLL主要表达CD2,CD3,CD8或CD4等,CD5阴性。

遗传学:B-CLL:+12检出率,还有t(11;14)(q13;q32),t(14;19)(q32;q13),13q14缺失。

T-CLL:有inv(14)(q11;q32)