INTRODUCERE ŞI OBIECTIVE

1. CERCETᾸRI PRIVIND DETERMINAREA SIMULTANᾸ A CEFTRIAXONEI ŞI CEFUROXIM AXETILULUI PRIN CROMATOGRAFIE DE LICHIDE DE ÎNALTᾸ PERFORMANṬᾸ CU FAZE INVERSE Ioana Clementina Constantinescu, Alexandra Filareta Neagu, Angela Nedelcu, Marinela Florea Universitatea de Medicina şi Farmacie Carol Davila, Facultatea de Farmacie, Bucureşti , Romania INTRODUCERE ŞI OBIECTIVE MATERIAL ŞI METODᾸ Materiale:Coloană cromatografică Inertsil 5 ODS-2 (250x4,6mm), acetonitril de puritate HPLC (Scharlau Chemie Spania), Na2HPO4∙12H2O p.a. (Merck, Germania), acid ortofosforic 85% (Merck, Germania), apă purificată, ceftriaxonă (Biochemie, Austria), cefuroxim axetil (Medochemie Ltd, Cipru) Aparatură:Echipament HPLC Varian constȃnd din pompă cuaternară Varian ProStar 240, echipată cu injector Rheodyne 7725, degazor on-line si detector PDA Varian Pro Star 330; Star Chromatography Workstation soft-ware; Balanṭă analitică Mettler Toledo AT 261 cu sensibilitate 0,01 mg. Condiṭii de operare:Eluṭie în gradient de solvent folosind ca fază mobilă amestec de soluţie apoasă Na2HPO4∙12H2O 0,01M cu pH 6,5 (H3PO4) şi acetonitril; debit 1,4mL/min; detecţie cu achiziţia datelor pe două canale, 253,6 şi 270 nm; înregistrarea completă a spectrului în domeniul 200-600 nm; temperatura camerei: 24-26°C; volumul injecat: 20 μL; soluţii standard din cele două substanţe medicamentoase preparate în faza mobilă de start. Ceftriaxona (1) şi cefuroxim axetilul (2) sunt antibiotice beta lactamice frecvent utilizate în terapia infecţiilor cu germeni grampozivi şi gramnegativi. 1. 2. Ne-am propus dezvoltarea şi validarea unei noi metode de analiză prin cromatografie de lichide cu faze inversate în scopul separării, identificării şi dozării celor două cefalosporine în amestec. REZULTATE ŞI DISCUṬII Dezvoltarea metodei Pentru optimizarea metodei am variat raportul componentelor fazei mobileşi debitul acesteia, pH-ul şi concentraţia în Na2HPO4∙12H2O a fazei apoase . Ṭinậnd cont de valorile pKa-urilor pentru cefuroxim axetil si ceftriaxonă şi de instabilitatea ciclului beta lactamic la valori extreme de pH, am efectuat determinări la valori de pH al soluţiei apoase, cuprinse între 3,0 si 8,0. Am selecţionat pH-ul de 6,5 ca valoare optimă. Cea mai bună separare s-a obţinut pentru un debit de 1,4mL/min şi o concentraţie de 0,01M Na2HPO4∙12H2O. Testele iniţiale au fost efectuate în regim izocratic utilizậnd diferite proporţii de acetonitril şi soluţie apoasă Na2HPO4∙12H2O 0,01M cu pH 6,5. Pentru optimizarea timpilor de retenţie am recurs la un program de eluţie în gradient în care proporţia de acetonitril în faza mobilă variază astfel: 8% de la 0 la 4 minute, 25% de la 5,5 la 6,5 minute şi 40% de la 6,5 la 10 minute. Validarea metodei Metoda a fost validată conform parametrilor ICH astfel: liniaritate (y=38470x-88237, r=0,9997) domeniu de liniaritate (10,01-100,10g/mL), exactitate (100,28 ± 0,84%), precizie (repetabilitate RSD%=1,09% şi precizie intermediară RSD%=1,14%), LOD(1,60g/mL), LOQ (5,33g/mL) pentru ceftriaxonă si liniaritate (y=33362x+1450, r=0,9996) domeniul de liniaritate (9,96-99,60g/mL), exactitate (99,23 ± 0,78%), precizie (repetabilitate RSD%=1,02% şi precizie intermediarăRSD%=1,10%), LOD (0,96g/mL), LOQ (3,20g/mL) pentru cefuroxim axetil. • Pentru determinarea din probe necunoscute am obţinut o regăsire medie de 100,34% pentru ceftriaxonă, repectiv 99,15% pentru cefuroxim axetil. CONCLUZII • Am dezvoltat o nouă metodă RP-HPLC în gradient cu detecţie UV pentru separarea ceftriaxonei şi cefuroxim axetilului. Metoda oferă selectivitate, precizie si exactitate conducậnd la o simetrie bună a picurilor şi la o rezoluţie înaltă. • Metoda este rapidă şi permite dozarea simultană a celor două substanţe medicamentoase dintr-un amestec.